细丝蛋白A在肿瘤中作用机制的研究进展

细丝蛋白A(filamin A,FLNA)是一种肌动蛋白结合蛋白,参与人的多种生理和病理作用。随着分子生物学的发展和人们对肿瘤认识的深入,越来越多的证据表明FLNA及其广泛的伙伴蛋白在乳腺癌、结直肠癌、前列腺癌、非小细胞肺癌等常见肿瘤中构成了精密的分子调控网络,并在肿瘤发生发展、侵袭、转移和耐药等方面发挥着重要作用。FLNA及其伙伴蛋白很可能成为新的肿瘤分子标志物和治疗靶点,为肿瘤的诊断和治疗提供新的方向。本文主要综述了FLNA结构功能特点以及在其肿瘤中作用的研究进展。

敲低细丝蛋白B对小鼠颅顶成骨前体细胞增殖、迁移及凋亡的影响

背景:细丝蛋白B(FLNB)能将肌动蛋白细胞骨架交联成动态结构,对细胞的定向移动至关重要,可调控软骨细胞的增殖、分化及凋亡的发生。然而,细丝蛋白B对成骨细胞增殖、迁移及凋亡的影响尚未报道。目的:探究细丝蛋白B对MC3T3-E1细胞的增殖、迁移及凋亡的影响。方法:构建敲低细丝蛋白B表达的腺病毒载体(sh-FLNB1、sh-FLNB2、sh-FLNB3),感染小鼠颅顶成骨前体细胞(MC3T3-E1),嘌呤霉素药筛,通过Western Blot以及RT-PCR技术检测敲低效率,选取敲低细丝蛋白B效率最佳的MC3T3-E1细胞株作为稳转细胞株。将细胞分为Blank组、mc3t3组、sh-NC组(空载体)、sh-FLNB组(sh-FLNB慢病毒),Blank组为α-MEM完全培养基无细胞;mc3t3组为单纯α-MEM完全培养基培养;sh-NC组、sh-FLNB组为含有嘌呤霉素2.5μg/mL的α-MEM完全培养基培养。培养3 d采用CCK-8法和划痕实验检测MC3T3-E1细胞增殖和迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR进一步验证细胞凋亡相关基因的表达。结果与结论:①Western Blot及RT-PCR结果显示,sh-FLNB3组细丝蛋白B敲低效率最佳,差异有显著性意义(P<0.0001),以此作为后续实验稳转细胞株;②CCK-8数据显示,敲低细丝蛋白B后MC3T3增殖能力显著减弱(P<0.05);③划痕实验显示,敲低细丝蛋白B后MC3T3的迁移能力明显下降;④流式细胞仪及RT-PCR显示,敲低细丝蛋白B后,MC3T3-E1细胞凋亡率增加,促凋亡因子Bax表达显著上升,抑凋亡因子Bcl-2表达下降(P<0.05);⑤结果说明,细丝蛋白B敲低可降低MC3T3-E1细胞的增殖能力,细胞迁移能力下降,并增加细胞凋亡的发生。

细丝蛋白A参与肿瘤发生发展的研究进展

0引言细丝蛋白A（filamin A,FLNa）是非肌性肌动蛋白结合蛋白,基因结构高度保守,表达广泛,对哺乳动物的生长发育具有重要的作用。FLNa蛋白包括一个肌动蛋白结合结构域和24个串联的重复序列,中间间隔两个铰链结构。

细丝蛋白A抑制人结肠癌SW480细胞体外侵袭转移能力

目的研究细丝蛋白A(FLNa)对人结肠癌SW480细胞侵袭转移行为的影响,并初步探讨其抑癌的机制。方法将FLNa基因质粒载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO/FLNa,以脂质体介导方式转染SW480细胞。经G418筛选,获得FLNa基因稳定表达的SW480/FLNa细胞。反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot检测FLNa基因导入;RT-PCR和Western blot检测细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达;MTT法检测细胞的增殖能力;划痕损伤实验、Transwell小室和Matrigel侵袭模型评价FLNa对细胞侵袭和转移能力。结果在SW480细胞中,FLNa的表达载体pcDNA3.1/V5-His-TOPO/FLNa获得稳定表达,SW480/FLNa细胞FLNa的mRNA和蛋白的表达水平均较SW480细胞高,分别为[(1.27±0.03)vs(0.14±0.02),P<0.01]和[(1.18±0.03)vs(0.25±0.02),P<0.05];SW480/FLNa细胞MMP-9的mRNA和蛋白表达水平均低于SW480细胞,分别为[(0.19±0.02)vs(1.63±0.04),P<0.05]和[(0.12±0.02)vs(0.79±0.04),P<0.05]。结论 FLNa抑制SW480细胞的侵袭和转移能力,其机制可能与降低MMP-9的表达有关。

阿尔茨海默病患者大脑灰质神经细丝蛋白的表达特性及磷酸化修饰的比较研究

目的探讨神经细丝蛋白NFPs的异常磷酸化在阿尔茨海默病AD发病中的作用及其分布和溶解特性。方法超速离心法及免疫印迹法。结果人大脑灰质中三种神经细丝亚基主要分布在非水溶性级分;与亨廷顿氏病患者相比,AD患者大脑灰质非水溶性级分三种NF亚基的含量均升高,且升高的NF-H和NF-M主要表现为异常过度磷酸化形式。结论NFPs的异常磷酸化和聚集参与了AD的发病过程。

细丝蛋白A在结直肠腺癌中的特异性表达

目的:研究细丝蛋白A(FLNa)在结直肠腺癌组织中的表达情况,探讨FLNa在结直肠腺癌发生发展中的作用。方法:选择2009年1月～9月河北医科大学第四医院外二科60例患者手术切除的结直肠腺癌组织和正常结直肠组织。癌组织取自肿瘤中心处,正常组织取自距肿瘤边缘至少100cm处。采用RT-PCR法和Western blot法检测60例结直肠腺癌患者癌组织和结直肠正常组织中FLNa的mRNA和蛋白质的表达情况。同时采用免疫组化法检测FLNa在结直肠癌组织和结直肠正常组织中的分布,并分析组间的FLNa阳性率表达差异。所有病例均经病理诊断确诊,均无其他部位原发肿瘤,术前无化疗、放疗和免疫治疗史。结果:结直肠癌组织中FLNa mRNA的表达水平(0.22±0.02)较结直肠正常组织低(0.94±0.04)(P=0.018);Western blot法检测显示:FLNa蛋白在结直肠癌组织中的表达水平(0.34±0.03)也较结直肠正常组织低(0.85±0.02)(P=0.028);Pearson相关分析显示:FLNamRNA和蛋白水平呈正相关(r=0.654,P<0.05)。FLNa免疫组化阳性染色产物位于细胞质。FLNa在结直肠癌组织组和结直肠正常组织组的阳性表达率分别为50.00%、91.67%,癌组织组明显低于正常组织组(x^2=50.037,P=0.000)。结论:FLNa的特异性低表达与结直肠腺癌的发生、发展具有高度相关性,有望成为新的肿瘤标志物,为临床诊治提供的新靶量。

细丝蛋白A及其mRNA在食管鳞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨细丝蛋白A(filamin A,FLNa)在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学方法(SP法)和逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chine reaction,RT-PCR),分别检测32例食管鳞癌组织及距食管癌组织边缘5 cm以上的镜下未见癌浸润的正常组织中FLNa蛋白、FLNa mRNA的表达情况。结果在食管鳞癌组织及正常食管组织中,FLNa蛋白的表达阳性率分别为34.4%、84.4%,FLNa mRNA的表达量分别为0.376±0.053、0.517±0.082,FLNa蛋白明显降低(P<0.05)。结论食管鳞癌组织中FLNa蛋白和FLNa mRNA的表达均降低,可能与食管癌的发生、发展相关。检测FLNa的表达能对食管癌的临床治疗和预后判断有一定价值。

肌动蛋白和神经细丝酸性蛋白在腺样囊性癌中表达的免疫电镜研究

目的:研究肌上皮细胞标记物———肌动蛋白(MA)和神经膜细胞标志物———神经细丝酸性蛋白(GFAP)在腺样囊性癌中的表达,探讨腺样囊性癌中神经膜细胞分化与肌上皮细胞的关系。方法:利用免疫电镜技术从超微结构水平研究MA和GFAP在腺样囊性癌中的表达。结果:MA主要表达于腺样囊性癌的细胞质中,GFAP表达于腺样囊性癌的细胞质和细胞核上。MA阳性细胞与GFAP阳性细胞具有相似的超微结构。GFAP阳性细胞的超微结构符合肌上皮细胞的超微结构特点。结论:发生神经膜细胞分化的腺样囊性癌细胞是其中的肌上皮成分。

细丝蛋白A在结直肠腺癌中的表达及临床意义

目的探讨细丝蛋白A(filaminA,FLNa)在结直肠腺癌中的表达及其生物学意义。方法应用免疫组织化学方法检测60例结直肠腺癌患者的癌组织及正常组织中的FLNa表达情况,并结合临床资料进行分析。结果 FLNa在腺癌组织中的阳性表达率高于正常组织,其表达水平与肿瘤的TNM分期、肝转移、淋巴结转移及肠壁浸润深度相关。结论 FLNa的低表达在结直肠腺癌的发生发展中起重要作用。

细丝蛋白A参与调节器官发育的研究进展

细丝蛋白A(filamin A,FLNa)通过动态调节肌动蛋白的聚合、解聚、分支、交联和捆束而参与细胞骨架的动态重构,改变细胞的形态和运动以应对外界刺激,在多条与细胞运动相关的信号转导通路中具有重要作用,与胚胎发育期的机体器官正常发育有着密切的关系,FLNa的功能缺失可导致脑、心血管、骨骼和肠等器官的发育畸形。本文综述了细丝蛋白A参与调节器官发育的研究进展。

直肠癌组织中细丝蛋白A的表达及临床意义

直肠癌是我国常见的预后较差的恶性肿瘤之一,尽管肿瘤治疗手段不断改进,但晚期肿瘤复发和淋巴结转移仍较为多见。因此分析直肠癌的生物学特性,探索直肠癌治疗的新途径成为临床关注的问题。近年研究发现细丝蛋白A（filamin A,FLNa）基因在某些肿瘤中表现出的生物学和遗传学特征具有肿瘤抑制基因的特性,

泪腺腺样囊性癌S-100蛋白、神经细丝酸性蛋白的表达及其意义

目的探讨泪腺腺样囊性癌S-100蛋白及神经细丝酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表达及其意义。方法收集手术切除泪腺腺样囊性癌28例标本,根据临床症状及组织学观察分为嗜神经侵袭组(15例)和无嗜神经侵袭组(13例),并取术中切除的正常泪腺组织9例为正常对照。应用免疫组织化学SP染色法检测S-100及GFAP在上述组织中表达的差异。结果嗜神经侵袭性生长组的S-100、GFAP阳性表达分别为12例(80%)和9例(60%),与无嗜神经侵袭性生长组S-100阳性5例(41.67%)、GFAP阳性表达率为0相比,呈显著升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GFAP、S-100在有嗜神经性侵袭的腺样囊性癌中有特异性表达,其侵袭特性可能与肿瘤细胞中存在着神经膜细胞分化有关。

缺血再灌注损伤对新生鼠肾小管上皮细胞细丝蛋白的影响

目的 通过研究缺血再灌注不同时段细丝蛋白在肾小管上皮细胞中的分布变化 ,探讨细丝蛋白在肾脏缺血再灌注损伤中所起的作用。方法 建立新生大鼠不同时段的肾脏缺血再灌注模型 ,通过免疫荧光法检测细丝蛋白在肾小管上皮细胞上的分布及其表达量。结果 细丝蛋白在正常时主要分布在肾小管上皮细胞基底部附近 ,缺血 0 .5 h时其分布变化不明显 ,再灌注 0 .5 h后 ,细丝蛋白开始向胞浆转移 ,并出现在细胞顶部和肾小管腔内 ,再灌注 2 h这种改变最明显并伴肾小管结构的破坏 ;从再灌注 2 4h起开始进入恢复阶段 ,细丝蛋白逐渐重新回到基底部 ,再灌注 12 0 h后恢复阶段基本结束 ,肾小管结构正常。结论 细丝蛋白在缺血再灌注时分布发生改变 。

结肠癌组织中基质金属蛋白酶9、转录因子1与细丝蛋白A的表达研究

目的探讨结肠癌患者组织基质金属蛋白酶9(MMP-9)、Ets转录因子1(Ets-1)与细丝蛋白A(FLNa)的表达情况。方法选取已确诊为结肠癌并行手术治疗的患者24例,术中采集患者肿瘤组织、癌旁组织及正常结肠组织,检测各组织中MMP-9、Ets-1与FLNa表达水平,并分析肿瘤组织的临床病理指标与MMP-9、Ets-1与FLNa表达水平的关系,MMP-9与Ets-1、FLNa表达的相关性。结果 (1) MMP-9与Ets-1表达水平比较,肿瘤组织>癌旁组织>正常结肠组织(P<0.05);FLNa表达水平比较,肿瘤组织<癌旁组织<正常结肠组织(P <0.05);(2)肿瘤组织中MMP-9与Ets-1高表达(P <0.05),FLNa低表达(P <0.05),与肿瘤直径越大、Dukes分期越严重、分化程度越低、术后有复发转移有关;(3)在癌旁组织及肿瘤组织中,MMP-9与Ets-1的表达呈正相关(P <0.05),与FLNa表达呈负相关(P <0.05)。结论 MMP-9与Ets-1在结肠癌组织中的表达正相关,与FLNa表达负相关,MMP-9、Ets-1表达水平升高,FLNa表达水平降低。

基质金属蛋白酶-9、白细胞介素-9、转录因子1、细丝蛋白A及肿瘤浸润性树突状细胞在降结肠癌组织中的表达及临床意义

目的探讨基质金属蛋白酶9(MMP-9)、白细胞介素(IL)-9、Ets转录因子(Ets)-1)、细丝蛋白A(FLNa)及肿瘤浸润性树突状细胞(TIDC)在降结肠癌组织中的表达及临床意义。方法降结肠癌病人60例,均接受根治术治疗,检测病人癌组织、癌旁组织、正常结肠组织中MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa水平及TIDC密度,分析临床病理因素与MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa、TIDC的相关性,分析MMP-9与IL-9、Ets-1、FLNa、TIDC的相关性。结果 3种组织中MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa水平及TIDC密度差异有统计学意义(P<0.05),癌组织中MMP-9水平为(471.4±98.1)ng/ml、Ets-1水平为(6.05±1.45),均高于癌旁组织[(190.3±36.9)ng/ml、(3.46±0.79)]和正常结肠组织[(25.4±3.4)ng/ml、(25.4±3.4)],差异有统计学意义(P<0.05),癌旁组织MMP-9、Ets-1高于正常结肠组织,差异有统计学意义(P<0.05)。癌组织中IL-9水平为(0.34±0.14)、FLNa水平为(20.2±3.3)ng/ml、TIDC水平为(9.4±2.1)%,均低于癌旁组织[(0.84±0.20)、(62.4±7.5)ng/ml、(12.9±2.8)%]和正常结肠组织[(1.02±0.22)、(143.2±12.4)ng/ml、(15.8±3.3%)],差异有统计学意义(P<0.05),癌旁组织IL-9、FLNa、TIDC低于正常结肠组织,差异有统计学意义(P<0.05)。MMP-9、IL-9、Ets-1、FLNa及TIDC密度与复发转移、TNM分期、肿瘤分化程度均具有相关性(P<0.05)。MMP-9、Ets-1、FLNa与肿瘤直径具有相关性(P<0.05)。在肿瘤组织中,MMP-9与Ets-1呈正相关(r=0.35,P<0.05),与IL-9、FLNa及TIDC密度呈负相关(r=-0.31、-0.36、-0.41,P<0.05)。Ets-1与IL-9及TIDC呈负相关(r=-0.32、-0.35,P<0.05)。IL-9与TIDC呈正相关性(r=0.42,P<0.05)。结论降结肠癌组织中MMP-9)、Ets-1水平升高,IL-9、FLNa、TIDC水平降低,且与复发转移及病理因素相关。

细丝蛋白与其蛋白配体的相互作用

细丝蛋白是交联肌动蛋白丝的同源二聚蛋白,它由肌动蛋白结合蛋白结构域(ABD)和细丝蛋白类型的免疫球蛋白(Ig_FLMN)结构域组成(其中,盘基网柄菌细丝蛋白(ddFLN)有6个免疫球蛋白,人细丝蛋白有24个免疫球蛋白)。超过90种蛋白配体能与细丝蛋白相互作用,参与细胞迁移、粘附、扩散和信号转导,发挥细胞迁移和极化、凝聚、磷酸化、信号转导、蛋白水解、离子通道、免疫调节、膜受体、激素受体、细胞核功能的作用。至今,越来越多的畸形病变被发现与细丝蛋白的基因突变有关,这也说明细丝蛋白在生物发育过程中起了至关重要的作用。

神经生长因子对糖尿病大鼠背根神经节神经细丝蛋白变化的影响

目的：观察神经生长因子（ＮＧＦ）对糖尿病神经病变的治疗作用。方法：采用免疫组织化学染色结合电子计算机图像分析技术，测定糖尿病大鼠背根神经节的结构蛋白－神经细丝蛋白（ＮＦ）的相对含量。结果：糖尿病成模后三个月，背根神经节ＮＦ的平均灰度值，糖尿病组（ＤＭ组）明显低于正常对照组（ＮＣ组），ＮＧＦ组（ＮＧＦ２００μｇ·ｋｇ－１·ｄ－１肌肉注射，３０ｄ）虽低于ＮＣ组，但却高于ＤＭ组，Ｐ均＜０．０１。结论：ＮＧＦ可促进感觉神经结构蛋白的表达。

大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经元中细丝蛋白表达的实验研究

目的观察大脑中动脉缺血再灌注(MCAO/R)大鼠模型神经元中细丝蛋白(filamin,FLN)表达的变化情况,结合其超微结构改变,了解脑血管病变后神经元结构功能变化与FLN表达的相关性。方法制备MCAO/R大鼠模型,依照再灌注时间的不同分为2h、6h、12h、24h、3d及7d共6组,正常大鼠做对照组。按时相点取材,草酸蛳焦锑酸钾电镜观察,应用免疫组织化学方法染色并进行图像分析。结果除正常对照组外,其他各组神经元中均有阳性反应,12h、24h、3d组神经元中FLN表达较多,以3d时最明显。阳性神经元细胞集中在缺血半球皮质区。神经元中FLN阳性部位为胞浆的核周边部,表达均匀一致。胶质细胞中未见表达。结论再灌注损伤可引起神经元中细丝蛋白免疫阳性的表达,并与损伤时间的变化及神经元形态学改变有一定相关性,提示此现象可能与神经元的再生、修复及移行有关,有进一步研究的价值。

大鼠血睾屏障形成初期细丝蛋白A对肌动蛋白丝排布的影响

目的根据肌动蛋白丝(F-actin)在血睾屏障(BTB)形成与变化过程中发挥的作用,初步探讨细丝蛋白A(FLNA)在大鼠血睾屏障形成初期对F-actin排布的影响。方法 Western印迹检测FLNA在大鼠睾丸、支持细胞及精子中的表达;免疫荧光染色观察FLNA与F-actin在20d龄大鼠生精上皮中的共定位;体外无血清体系分离培养大鼠睾丸支持细胞,待细胞连接形成后通过siRNA干扰沉默FLNA的表达,鬼笔环肽染色观察F-actin的分布定位;睾丸内siRNA注射,观察FLNA对血睾屏障形成时F-actin分布的影响。结果 FLNA在20d龄大鼠主要由支持细胞表达,体外siRNA沉默FLNA的效率可达70%以上,在体外支持细胞连接形成及体内屏障形成过程中,FLNA沉默组的F-actin与对照组相比排列紊乱、无序。结论 FLNA参与调节大鼠血睾屏障形成初期FLNA的排布。

细丝蛋白A及转化生长因子β1在乳腺癌组织中的表达及其关系的研究

目的分析细丝蛋白A(FLNa)及转化生长因子β1(TGF-β1)在乳腺浸润性导管癌组织中的表达及其临床意义。方法利用组织芯片通过免疫组织化学方法检测88例乳腺癌、30例非癌(癌旁正常)乳腺组织石蜡标本中FLNa和TGF-β1蛋白的表达。观察FLNa、TGF-β1蛋白的表达与乳腺癌临床病理特征的关系。采用Spearman等级相关分析乳腺癌组织中FLNa和TGF-β1表达的相互关系。结果 88例乳腺浸润性导管癌组织中,FLNa蛋白的阳性表达率为56.8%(50/88),TGF-β1蛋白的阳性表达率为64.8%(57/88)。肿瘤组织中FLNa和TGF-β1蛋白的表达均高于周围正常乳腺组织的表达(P<0.05)。FLNa和TGF-β1蛋白的阳性表达与患者年龄、肿瘤大小、肿瘤TNM分期及ER、PR状态无关。FLNa在腋窝淋巴结转移组中其阳性表达率高于无淋巴结转移组(P<0.05);同时TGF-β1蛋白的表达还与HER2状态相关(P<0.05);TGF-β1蛋白的表达也与淋巴结转移状态相关(P<0.05),而FLNa和TGF-β1蛋白的表达呈正相关(r=0.211,P=0.048)。结论 FLNa和TGF-β1蛋白在乳腺癌组织中处于活化状态,联合检测FLNa和TGF-β1蛋白有助于判断乳腺癌的恶性程度和生物学行为。