敲低细丝蛋白B对小鼠颅顶成骨前体细胞增殖、迁移及凋亡的影响

背景:细丝蛋白B(FLNB)能将肌动蛋白细胞骨架交联成动态结构,对细胞的定向移动至关重要,可调控软骨细胞的增殖、分化及凋亡的发生。然而,细丝蛋白B对成骨细胞增殖、迁移及凋亡的影响尚未报道。目的:探究细丝蛋白B对MC3T3-E1细胞的增殖、迁移及凋亡的影响。方法:构建敲低细丝蛋白B表达的腺病毒载体(sh-FLNB1、sh-FLNB2、sh-FLNB3),感染小鼠颅顶成骨前体细胞(MC3T3-E1),嘌呤霉素药筛,通过Western Blot以及RT-PCR技术检测敲低效率,选取敲低细丝蛋白B效率最佳的MC3T3-E1细胞株作为稳转细胞株。将细胞分为Blank组、mc3t3组、sh-NC组(空载体)、sh-FLNB组(sh-FLNB慢病毒),Blank组为α-MEM完全培养基无细胞;mc3t3组为单纯α-MEM完全培养基培养;sh-NC组、sh-FLNB组为含有嘌呤霉素2.5μg/mL的α-MEM完全培养基培养。培养3 d采用CCK-8法和划痕实验检测MC3T3-E1细胞增殖和迁移能力;流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR进一步验证细胞凋亡相关基因的表达。结果与结论:①Western Blot及RT-PCR结果显示,sh-FLNB3组细丝蛋白B敲低效率最佳,差异有显著性意义(P<0.0001),以此作为后续实验稳转细胞株;②CCK-8数据显示,敲低细丝蛋白B后MC3T3增殖能力显著减弱(P<0.05);③划痕实验显示,敲低细丝蛋白B后MC3T3的迁移能力明显下降;④流式细胞仪及RT-PCR显示,敲低细丝蛋白B后,MC3T3-E1细胞凋亡率增加,促凋亡因子Bax表达显著上升,抑凋亡因子Bcl-2表达下降(P<0.05);⑤结果说明,细丝蛋白B敲低可降低MC3T3-E1细胞的增殖能力,细胞迁移能力下降,并增加细胞凋亡的发生。

细丝蛋白B在钙化性主动脉瓣疾病中的表达及其临床意义

目的 研究细丝蛋白B(FLNB)在钙化性心脏瓣膜中的表达及其临床意义。方法 2021年8月~2022年1月在我院手术切除的钙化性主动脉瓣标本9例,同期因主动脉夹层行手术切除的正常主动脉瓣膜标本8例作为对照。组织切片茜素红染色观察瓣膜钙化结节。采用免疫组化分析方法对瓣膜中细丝蛋白B的表达进行分析。利用冰冻组织标本进行蛋白质免疫印迹检测,验证相应分子表达水平间差异。结果 钙化瓣膜切片经茜素红染色可以看见明显钙化结节。免疫组化检查显示细丝蛋白B表达于细胞质,钙化瓣膜高于正常瓣膜,钙化组平均光密度为(6.57±1.65)%;对照组为(0.91±0.52)%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05),蛋白质免疫印迹结果与之一致。结论 细丝蛋白B在钙化瓣膜中表达增高,可能参与了瓣膜钙化的病理进程。

Filamin B在骨骼系统中的研究进展

细丝蛋白B(Filamin B,FLNB)是一种大的二聚体肌动蛋白结合蛋白,是丝蛋白(Filamins)家族中的一员。其可将肌动蛋白细胞骨架细丝交联成动态结构,为细胞运动和信号传递提供了重要的支架。然当FLNB发生突变后,可导致严重的遗传性骨骼相关疾病。基于FLNB在骨骼系统中突变所致疾病的基础和临床研究,本文通过从FLNB基因的生物功能及其突变后影响骨骼系统发育和所致疾病的致病机制入手,对FLNB在骨骼系统中的研究进行综述,提供FLNB在骨骼系统中最新的研究进展。