拟穴青蟹细丝蛋白C的生物信息学分析及重组表达

为了探讨抗原表位与细丝蛋白C(filamin C,FLN c)结构之间的构效关系,对FLN c进行生物信息学分析及分段重组表达。生物信息学分析结果表明,FLN c二级结构以β折叠及无规则卷曲为主,确定其具有9个结构域,三级结构呈免疫球蛋白样折叠,具有典型的细丝蛋白家族特征。基于生物信息学分析,将拟穴青蟹(Scylla paramamosain)FLN c通过分段原核表达,纯化出带有麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)标签的重组表达蛋白rFLN c1(AA:1-335)、rFLN c2(AA:336-531)、rFLN c3(AA:532-847)。血清学分析结果显示,rFLN c2与蟹类过敏患者血清IgE结合能力最强,推测此区域含有大部分抗原表位。因此,定位拟穴青蟹FLN c氨基酸336-531结构域为抗原表位优势区,rFLN c2可用于FLN c的晶体学研究。

细丝蛋白C对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨细丝蛋白C(filamin C,FLNC)对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法通过免疫组织化学分析了30例前列腺癌患者的癌组织及配对癌旁组织中FLNC的表达。根据FLNC蛋白的表达水平将30例前列腺癌患者分为FLNC低表达组(0~3分,n=9)和FLNC高表达组(4~12分,n=21),采用Kaplan-Meier法进行生存分析。对人前列腺癌细胞系(PC-3)转染抑制FLNC表达的小干扰RNA(siRNA-FLNC组)和阴性对照(siRNA-NC组),未转染的细胞作为对照组。通过MTT法检测细胞活力,Transwell实验进行迁移和侵袭分析。通过qRT-PCR或Western blot检测细胞中FLNC、Eotaxin-1、CCR3、p-ERK1/2、t-ERK1/2和MMP-3的表达。结果与癌旁组织相比,前列腺癌组织中FLNC的染色评分升高(1.43±0.86 vs 5.63±2.91,P<0.001)。FLNC低表达组和高表达组患者的TNM分期、淋巴结转移和生存时间差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,siRNA-FLNC组PC-3细胞中FLNC的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05),细胞活力降低(P<0.05),细胞迁移和侵袭数量降低(P<0.05)。与对照组相比,siRNA-FLNC组Eotaxin-1、CCR3、p-ERK1/2和MMP-3的蛋白相对表达量均降低(P<0.05),而t-ERK1/2的蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05)。结论FLNC在前列腺癌组织中高表达并且与患者预后相关。沉默FLNC可能通过抑制Eotaxin-1-CCR3-ERK1/2-MMP-3通路降低前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

中国汉族心肌病患者FLNC基因变异的家系研究

目的探究汉族心肌病患者细丝蛋白C(filamin C,FLNC)基因变异及表型特点,进一步完善FLNC变异谱。方法纳入150名肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)和50名扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)患者,进行外周血DNA全外显子组测序,并对测序结果进行分析和筛选,对携带FLNC基因变异的先证者及家属进行Sanger测序验证,收集先证者及家属的临床信息。结果在所有先证者中,共检测到6例患者携带FLNC变异,且均为未曾发表过的新变异,1例为家族性DCM,其余为散发病例,HCM患者均为错义变异,DCM患者均为截断变异。结论不同类型的FLNC变异通过不同机制参与多种心肌病的发生,本研究初步总结了不同变异与心肌病表型的关联,并进一步扩大了汉族心肌病患者FLNC的基因变异谱。

低氧对小鼠海马神经元发育相关分子表达的影响

目的:探讨低氧暴露对小鼠海马神经元发育相关蛋白表达的影响,为低氧导致认知功能障碍机制的研究提供新的靶分子。方法:低氧处理小鼠海马神经元来源的HT22细胞系24 h和48 h,收集细胞样本进行转录组测序筛查低氧易感分子,real time RT-PCR检测HT22细胞中低氧相关分子纤维连接蛋白1(Fn1)、细丝蛋白C(FLNC)和细胞周期蛋白F(CCNF)mRNA的表达水平,Western Blot检测HT22细胞中Fn1、FLNC和CCNF蛋白的表达水平。结果:转录组测序筛选出低氧相关分子,低氧暴露后HT22细胞中Fn1和FLNC mRNA和蛋白水平显著降低。结论:低氧暴露可导致HT22细胞中Fn1和FLNC表达发生改变,可能是低氧诱导神经元损伤的靶分子。