拟穴青蟹细丝蛋白C的生物信息学分析及重组表达

为了探讨抗原表位与细丝蛋白C(filamin C,FLN c)结构之间的构效关系,对FLN c进行生物信息学分析及分段重组表达。生物信息学分析结果表明,FLN c二级结构以β折叠及无规则卷曲为主,确定其具有9个结构域,三级结构呈免疫球蛋白样折叠,具有典型的细丝蛋白家族特征。基于生物信息学分析,将拟穴青蟹(Scylla paramamosain)FLN c通过分段原核表达,纯化出带有麦芽糖结合蛋白(maltose binding protein,MBP)标签的重组表达蛋白rFLN c1(AA:1-335)、rFLN c2(AA:336-531)、rFLN c3(AA:532-847)。血清学分析结果显示,rFLN c2与蟹类过敏患者血清IgE结合能力最强,推测此区域含有大部分抗原表位。因此,定位拟穴青蟹FLN c氨基酸336-531结构域为抗原表位优势区,rFLN c2可用于FLN c的晶体学研究。

细丝蛋白C对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响

目的探讨细丝蛋白C(filamin C,FLNC)对前列腺癌细胞迁移和侵袭的影响。方法通过免疫组织化学分析了30例前列腺癌患者的癌组织及配对癌旁组织中FLNC的表达。根据FLNC蛋白的表达水平将30例前列腺癌患者分为FLNC低表达组(0~3分,n=9)和FLNC高表达组(4~12分,n=21),采用Kaplan-Meier法进行生存分析。对人前列腺癌细胞系(PC-3)转染抑制FLNC表达的小干扰RNA(siRNA-FLNC组)和阴性对照(siRNA-NC组),未转染的细胞作为对照组。通过MTT法检测细胞活力,Transwell实验进行迁移和侵袭分析。通过qRT-PCR或Western blot检测细胞中FLNC、Eotaxin-1、CCR3、p-ERK1/2、t-ERK1/2和MMP-3的表达。结果与癌旁组织相比,前列腺癌组织中FLNC的染色评分升高(1.43±0.86 vs 5.63±2.91,P<0.001)。FLNC低表达组和高表达组患者的TNM分期、淋巴结转移和生存时间差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,siRNA-FLNC组PC-3细胞中FLNC的mRNA和蛋白水平均降低(P<0.05),细胞活力降低(P<0.05),细胞迁移和侵袭数量降低(P<0.05)。与对照组相比,siRNA-FLNC组Eotaxin-1、CCR3、p-ERK1/2和MMP-3的蛋白相对表达量均降低(P<0.05),而t-ERK1/2的蛋白相对表达量无明显变化(P>0.05)。结论FLNC在前列腺癌组织中高表达并且与患者预后相关。沉默FLNC可能通过抑制Eotaxin-1-CCR3-ERK1/2-MMP-3通路降低前列腺癌细胞的迁移和侵袭能力。

膀胱癌组织细丝蛋白C的表达与临床病理特征及生存预后的关系

目的探讨膀胱癌组织细丝蛋白C(FLNC)的表达水平与膀胱癌患者临床病理特征及生存预后的关系。方法回顾性队列研究。纳入2013年9月—2018年9月蚌埠医科大学第一附属医院泌尿外科行根治性全膀胱切除术的膀胱癌患者55例, 其中男43例、女12例, 年龄65(56.5, 68.0)岁。对膀胱癌组织及癌旁组织行免疫组织化学染色检查及评分。观察指标:(1)观察FLNC在癌组织和癌旁组织中的表达情况;按照膀胱癌组织中FLNC免疫组织化学染色评分结果中位数, 将患者分为FLNC低表达组和FLNC高表达组, 观察分析FLNC表达水平与膀胱癌患者临床病理特征的关系;(2)纳入患者性别、年龄、肿瘤分化级别、肿瘤大小、T分期、N分期、美国癌症联合委员会(AJCC)分期和FLNC表达水平等临床病理特征进行单因素、多因素Cox比例风险回归模型分析;(3)采用Kaplan-Meier生存曲线计算临床患者累积生存率;(5)绘制受试者操作特征(ROC)曲线分析FLNC的检测对膀胱癌患者生存预后的预测价值。结果 (1)膀胱癌组织中FLNC免疫组织化学染色评分为2(2, 4)分, 高于癌旁组织的2(1, 3)分, 差异有统计学意义(Z=2.20, P=0.028)。(2)55例患者膀胱癌组织中FLNC免疫组织化学染色评分结果中位数为2分, 其中29例纳入FLNC低表达组(≤2分), 26例纳入FLNC高表达组(>2分)。FLNC低表达组T分期中T1~2期、T3~4期患者占比和AJCC分期中Ⅰ~Ⅱ期、Ⅲ~Ⅳ期患者占比分别为69.0%(20/29)、31.0%(9/29)和58.6%(17/29)、41.4%(12/29), FLNC高表达组分别为38.5%(10/26)、61.5%(16/26)和26.9%(7/26)、73.1%(19/26), 2组比较差异均有统计学意义(χ^(2)=5.15、5.60, P值均<0.05)。(3)单因素Cox比例风险回归分析结果表明, N分期、AJCC分期、FLNC表达水平是膀胱癌预后的影响因素[HR(95%CI)分别为4.345(1.724~10.948)、2.946(1.057~8.213)、3.991(1.492~11.147)]。多因素Cox比例风险回归模型分析结果表明, N分期、FLNC表达水平是膀胱癌生存预后的独立危险因素[HR(95%CI)分别为3.227(1.108~9.394)、3.409(1.198~9.700)]。(4)全组55例膀胱癌患者5年累积生存率为61.90%, 其中FLNC低表达组患者5年累积生存率为81.40%, 高于FLNC高表达组的40.60%, 2组比较差异有统计学意义(χ^(2)=8.11, P=0.004)。(5)ROC曲线结果表明, 曲线下面积(95%CI)为0.702(0.555~0.848), 约登指数为0.40, 灵敏度为0.74, 特异度为0.67, 预测价值较好。结论与癌旁组织比较, FLNC在膀胱癌组织中表达增高, 且其表达水平与肿瘤的T分期、AJCC分期有关;对于膀胱癌患者, FLNC高表达提示其生存预后不良。

中国汉族心肌病患者FLNC基因变异的家系研究

目的探究汉族心肌病患者细丝蛋白C(filamin C,FLNC)基因变异及表型特点,进一步完善FLNC变异谱。方法纳入150名肥厚型心肌病(hypertrophic cardiomyopathy,HCM)和50名扩张型心肌病(dilated cardiomyopathy,DCM)患者,进行外周血DNA全外显子组测序,并对测序结果进行分析和筛选,对携带FLNC基因变异的先证者及家属进行Sanger测序验证,收集先证者及家属的临床信息。结果在所有先证者中,共检测到6例患者携带FLNC变异,且均为未曾发表过的新变异,1例为家族性DCM,其余为散发病例,HCM患者均为错义变异,DCM患者均为截断变异。结论不同类型的FLNC变异通过不同机制参与多种心肌病的发生,本研究初步总结了不同变异与心肌病表型的关联,并进一步扩大了汉族心肌病患者FLNC的基因变异谱。

抑制细丝蛋白A促进前列腺癌C4⁃2细胞迁移

目的探讨细丝蛋白A(FLNA)对前列腺癌细胞迁移的影响。方法设计并构建靶向FLNA的shRNA敲低质粒pSIH⁃H1⁃shFLNA。包装慢病毒后感染前列腺癌C4⁃2细胞,获得敲低FLNA的稳定细胞系C4⁃2⁃shFLNA。Western印迹检测前列腺癌C4⁃2细胞中FLNA蛋白表达和PC⁃1蛋白表达;实时荧光定量PCR(qPCR)检测FLNA以及PC⁃1 mRNA表达水平;Western印迹检测敲低FLNA对磷脂酰肌醇⁃3⁃激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)信号通路的影响;划痕实验和Transwell实验检测C4⁃2细胞体外迁移能力。结果前列腺癌C4⁃2细胞敲低FLNA后FLNA mRNA和蛋白水平明显下调,PC⁃1 mRNA水平和蛋白水平表达增加,同时AKT磷酸化水平显著升高。划痕及Tran⁃swell实验证实在前列腺癌C4⁃2细胞中敲低FLNA后细胞迁移能力增强。结论前列腺癌细胞中敲低FLNA能够激活PI3K/AKT信号通路,促进前列腺癌细胞迁移。

低氧对小鼠海马神经元发育相关分子表达的影响

目的:探讨低氧暴露对小鼠海马神经元发育相关蛋白表达的影响,为低氧导致认知功能障碍机制的研究提供新的靶分子。方法:低氧处理小鼠海马神经元来源的HT22细胞系24 h和48 h,收集细胞样本进行转录组测序筛查低氧易感分子,real time RT-PCR检测HT22细胞中低氧相关分子纤维连接蛋白1(Fn1)、细丝蛋白C(FLNC)和细胞周期蛋白F(CCNF)mRNA的表达水平,Western Blot检测HT22细胞中Fn1、FLNC和CCNF蛋白的表达水平。结果:转录组测序筛选出低氧相关分子,低氧暴露后HT22细胞中Fn1和FLNC mRNA和蛋白水平显著降低。结论:低氧暴露可导致HT22细胞中Fn1和FLNC表达发生改变,可能是低氧诱导神经元损伤的靶分子。

小鼠胎肝干细胞抗原阳性细胞移植后向神经组织细胞分化

目的了解小鼠胎肝干细胞是否具有向神经组织细胞分化的潜能。方法 采用免疫磁珠法分离雄性胎鼠肝脏的千细胞抗原1阳性(Sca-1+)细胞;将8-10周的C57BL/6J雌性小鼠用致死剂量(10.0Gy)放射线照射,然后尾静脉注射Sca-1+细胞2.0×103。Sca-1+细胞移植后2、4、6个月后,将受者脑组织作免疫组织化学和FISH双染色检测。结果移植后雌性受鼠脑组织内存在大量Y染色体阳性细胞;统计比较移植后2、4、6个月时,受者脑组织中Y染色体阳性细胞百分数无明显差别。免疫组织化学分析显示,这些Y染色体阳性细胞表达神经组织细胞特异标志,如神经元核特异蛋白(Neu N)、神经纤维细丝蛋白(NF-M)、微管蛋白Ⅲ(TuJ-1)或者胶质纤维酸性蛋白(GFAP) 等。Y染色体阳性细胞约占脑组织总细胞数的(4.5±0.5)%.其中Y染色体和Neu N均阳性的细胞为(1.2±0.3)%、Y染色体和GFAP均阳性的细胞为(1.0±0.2)%。结论经尾静脉移植小鼠胎肝Sca 1+细胞能迁移进入经致死剂量全身照射的雌性小鼠脑组织,并且能分化成神经组织细胞,且能长期存活(存活至少6个月以上)。