小鼠肺细小动脉平滑肌细胞原代培养和鉴定以及低氧对其增殖与凋亡的影响

目的：建立一种方法简单、重复性好、培养周期短的小鼠肺细小动脉平滑肌细胞（PASMCs）原代培养及传代方法,并初步探索低氧下小鼠PASMCs的增殖与凋亡情况。方法：无菌条件显微镜下分离小鼠肺细小动脉,经胶原酶I消化结合血清铺底法培养PASMCs。传代过程中弃除对细胞损伤大的离心步骤。倒置相差显微镜观察细胞形态,免疫细胞化学法和免疫荧光染色法进行α-平滑肌肌动蛋白鉴定,CCK-8显法及TUNEL法测定低氧下PASMCs的增殖与凋亡情况。结果：形态学观察、免疫细胞化学法和免疫荧光染色法鉴定均表明培养的细胞为PASMCs。与大鼠传代后的PASMCs典型的＂峰-谷＂样生长相比,传代后的小鼠PASMCs形态各异,没有此典型＂峰-谷＂规律。原代培养后5～7 d即传代,依据细胞活性可传3～5代。CCK-8法显示,与常氧组24 h比较,低氧组A值升高（P〈0.05）。TUNEL法结果显示低氧24 h后凋亡率较常氧组下降（P〈0.05）。结论：胶原酶I消化结合血清铺底法培养小鼠PASMCs,方法简单,培养周期短,重复性好,是一种值得推广的小鼠PASMCs体外培养方法。低氧可以促进小鼠PASMCs的增殖,抑制小鼠PASMCs的凋亡。

大鼠细小动脉平滑肌细胞分离培养的新方法

目的：探讨大鼠细小动脉平滑肌细胞分离培养的新方法。方法：取大鼠肺分支动脉，先切成小块进行胶原酶的消化，约 ８ ｈ，而后用含２０％小牛血清的 ＤＥＭＥ培养基贴块培养。结果：培养 ２４ ｈ，可见有大量细胞游出贴瓶底生长，７２ｈ已融合成片，呈典型的“谷峰”样长势。尚有少量内皮细胞，通过消化传代除去。取传第三代细胞进行抗α－ａｃｔｉｎ免疫组织化学染色，大量饮泡，基膜下有密斑，密体。免疫组化鉴定培养细胞纯度为９６％。结论：应用消化贴块法培养的大鼠平滑肌细胞，方法简单，结果可靠，具有应用价值。

大鼠肺细小动脉和大动脉平滑肌细胞的分离培养及其增殖特性比较

肺动脉高压（PAH）主要组织病理学改变在肺细小动脉，尤其是肌性细小动脉内膜-中膜的肥厚、无肌细小动脉的肌化，在PAH的发生发展过程中起着重要作用。但引起PAH中肺细小动脉改变的病理学机制尚不明确，而又因实验大鼠肺细小动脉难以定位和取材，使大鼠肺细小动脉平滑肌细胞（RPMC）不易分离和培养，