泌尿生殖道炎细小脲原体PCR检测结果临床研究

目的探讨细小脲原体(Up)在泌尿生殖道炎中的临床特点。方法对1 477例泌尿生殖道分泌物进行Up、沙眼衣原体(Ct)、人乳头状瘤病毒(HPV)、单纯疱疹病毒(HSV)和淋球菌PCR检测和解脲脲原体(Uu)和人型支原体(Mh)培养。1 240例分泌物进行了涂片革兰染色。结果 1 477例泌尿生殖道分泌物检测病原体阳性854例,检出率为57.82%(854/1 477)。Up阳性占26.70%(228/854),其中占男性17.53%(64/365),占女性33.54%(164/489),男女Up阳性率差异有统计学意义。随着分泌物涂片革兰染色分级的增加,泌尿生殖道病原体阳性率也增加,且对比差异有统计学意义,说明分泌物涂片革兰染色对临床感染程度有一定的提示作用。结论 Up是泌尿生殖道炎主要病原体之一。Up感染可见于病人体弱者,在感染病原体量大、感染时间长等条件下可引起临床症状。PCR法检测Up对泌尿生殖道感染高危人群及有临床症状者能够做到诊断准确、快速,有临床应用价值。

细小脲原体感染量与胎膜早破及新生儿肺炎的相关性分析

目的探讨细小脲原体(UP)与胎膜早破及新生儿肺炎的相关性。方法随机选取2016年1月至2017年10月在深圳市罗湖区妇幼保健院住院分娩的产妇及其所产新生儿205对,对产妇产前宫颈分泌物及新生儿口咽部分泌物采用实时荧光定量PCR法检测UP含量,结合病历综合分析UP感染载量与胎膜早破及新生儿肺炎发生率的相关性。结果①产妇UP阳性与UP阴性比较,UP感染未增加胎膜早破发生率,UP阳性胎膜早破发生率似更低(χ~2=4.164,P<0.05),且感染载量与胎膜早破无明显直接相关性(r=0.124,P>0.05),反之,有胎膜早破与无胎膜早破的UP垂直传播率比较差异无统计学意义(校正χ~2=0.110,P>0.05);②产妇宫颈分泌物的UP载量与新生儿肺炎发生率无明显直接相关性(r=0.732,P>0.05),仅与垂直传播率呈正相关性(r=0.866,P<0.05);③新生儿口咽部分泌物UP阳性与UP阴性相比,新生儿肺炎发生率差异有统计学意义(校正χ~2=8.889,P<0.01),且新生儿口咽部UP感染载量与新生儿发生率呈正相关(r=0.908,P<0.05)。结论产妇UP感染与胎膜早破无明显直接相关,胎膜早破亦未增加UP垂直传播风险;产妇宫颈分泌物的UP载量越高,垂直传播率越高;新生儿UP感染载量与新生儿肺炎发生率呈正相关,对低载量感染患儿予以密切关注,对感染载量在10~5及以上者尽早干预,可能会更有效地降低不明原因的新生儿肺炎发生率。

细小脲原体与新生儿肺炎的相关性分析

目的 探讨细小脲原体与新生儿肺炎的相关性。 方法 随机选取本院阴道分娩或剖宫产并有胎膜早破的产妇及新生儿205对，应用荧光定量PCR法对产妇宫颈分泌物及新生儿口咽部分泌物检测细小脲原体，根据检测结果分为母儿双阳、母儿双阴、母阳儿阴3组，比较3组中新生儿肺炎发生率。 结果 产妇宫颈分泌物的细小脲原体检出率为52.19%，新生儿口咽部分泌物细小脲原体检出率为16.10%，阳性母亲所产新生儿口咽部分泌物的细小脲原体检出率为30.84%。母儿双阴、母阳儿阴两组新生儿肺炎发生率无显著性差异（ P 〉 0.05），而母儿双阳组较另外两组有显著性差异（ P 〈0.05）。 结论 新生儿细小脲原体感染与新生儿肺炎发生率关系密切。产前给予孕妇生殖道细小脲原体筛查，可以做到早期发现。对筛查阳性的产妇所产新生儿出生后立即进行口咽部细小脲原体核酸检测、并对检测阳性的新生儿及早进行预防干预，可能是降低新生儿肺炎发生率的事半功倍的措施。

淋病奈瑟菌、沙眼衣原体、细小脲原体多重荧光定量PCR检测方法的建立及临床应用

目的建立淋病奈瑟菌（Neisseriaagonorrhoeae，NG）、沙眼衣原体（Chlamydiatrachomatis，CT）、细小脲原体（Ureaplasmaparvum，uP）多重荧光定量PCR（fluorescentquantitativePCR，FQ—PCR）检测方法。方法选择NG保守基因porA、解脲支原体（Ureaplasmaurealytieum，uu）保守基因UPq及cT保守基因￡rp作为目标检测基因，设计引物及TaqMan探针，制备重组质粒标准品，绘制标准曲线，建立多重VQ．PCR检测方法，并验证其敏感性、特异性及重复性。用建立的方法对203份泌尿生殖道感染NG、CT、UP的临床样本进行同步检测，并与单重VQ—PCR法、常规PCR法及基因测序结果进行比较。结果重组质粒标准品经双酶切及测序鉴定，证明构建正确；建立的标准曲线起始DNA拷贝数与0值之间的线性关系良好，相关系数为0．998～1．000；该方法检测NG、CT和uP的灵敏度均可达10：copies／ml，检测范围可达10。～10。copies／ml，相关系数分别为1．000、0．999和0．995；不与生殖道其他菌群如阴道霉菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、人型支原体、单纯疱疹病毒I型、Ⅱ型及人乳头瘤病毒（16／18型）发生交叉反应；检测的203份样本中，多重VQ—PCR检测NG、CT、UP的阳性检出率分别为34．48％、30．54％、18．71％，与单重VQ．PCR法、基因测序法比较，差异无统计学意义（P〉0．05），3种方法阳性检出率均高于常规PCR法；与基因测序法相比，多重FQ—PCR法灵敏度为100％，3种病原体检测特异性均高于98．50％。结论已成功建立NG、CT、UP多重VQ．PCR检测方法，该法检测时间短，特异性强，灵敏性高，适合于临床快速诊断；

胎膜早破与下生殖道病原体感染相关性分析

目的探讨胎膜早破与下生殖道病原体感染的相关性。方法随机选取2014年3月至2016年3月在粤北人民医院产科产检并住院分娩的胎膜早破孕妇200例资料(研究组),选取同期在产科住院分娩的胎膜未破正常孕妇200例(对照组),分别对两组的入院C-反应蛋白(CRP)、白带常规、细菌性阴道病(BV)、沙眼衣原体(CT)、细小脲原体(UP)、人型支原体(MH)、B族溶血性链球菌(GBS)检测资料进行分析。结果研究组CRP值高于对照组(t=3.221,P=0.001);研究组UP、CT、BV、MH、GBS、白色念珠菌、滴虫及混合感染的发生率均高于对照组(χ~2=49.520,4.810,5.498,12.210,9.421,4.815,4.592,41.813,均P<0.05),其中UP、MH及混合感染的发生率组间差异具有统计学意义(P<0.05),下生殖道总感染率研究组(60%)高于对照组(26%)(χ~2=47.160,P=0.000);研究组新生儿早产、新生儿肺炎、新生儿窒息及新生儿病理性黄疸的发生率均高于对照组(χ~2=17.330,33.006,9.355,4.891,均P<0.05),而低体重儿的发生率则差异无统计学意义(P>0.05);多元相关分析结果表明,UP、MH、GBS、CT及白色念珠菌与胎膜早破发生密切相关,其中UP为相关因素(P=0.000),BV和滴虫与胎膜早破的发生无相关性(P>0.05)。结论胎膜早破与下生殖道UP、MH、GBS、CT及白色念珠菌感染相关,细小脲原体感染为最主要的因素,有必要在孕前及孕期进行相关病原体筛查,针对病因采取相应防治措施,以降低胎膜早破的发生,减少母儿不良结局。

细小脲支原体Up3_c0507基因的原核表达及多克隆抗体的制备

目的构建目的基因细小脲支原体Up3c0507原核表达载体,进行原核感受态细胞的转化,诱导转化菌表达融合蛋白,制备其多克隆抗体并进行鉴定,为后续研究奠定基础。方法运用PCR从细小脲支原体菌株Up3基因组中扩增第c0507段基因,用限制性内切酶BamH I和Not I分别对目的片段和载体PGEX-6P2进行双酶切,利用T4连接酶进行连接,将其转化入E.coli BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达融合蛋白GST-Up3_c0507。将表达的GST-Up3_c0507融合蛋白采用商品化GST-Beads纯化。将纯化后的融合蛋白作为抗原,与Freund佐剂充分混合后免疫6周龄BALB/c雌性健康小鼠,制备多克隆抗体。应用Western blot鉴定多克隆抗体的特异性及相应的效价。结果成功构建细小脲支原体基因Up3c0507,全长363 bp,所编码的蛋白相对分子质量约为9 100,其表达融合蛋白GST-Up3_c0507相对分子质量约为38 100;将其对小鼠进行免疫后,成功制备出GST-Up3_c0507多克隆抗体;Western blot测得所制备的多克隆抗体特异性高,与其他蛋白无交叉反应,效价为1∶1 600。结论成功制备出特异性高且效价高的GST-Up3_c0507蛋白的多克隆抗体,为细小脲支原体的临床检验诊断试剂的研究奠定了基础。