细极链格孢菌蛋白激发子对棉株光合特性的影响

以湘杂棉3号F1为对象,用Li-6400光合作用测定仪测定了细极链格孢菌蛋白激发子(PEAT)诱导下的光合速率、气孔导度、蒸腾速率、外界光合作用有效辐射等指标.结果表明,PEAT诱导可以提高棉花生长功能叶的叶绿素含量、净光合速率、气孔导度、蒸腾速率、外界光合作用有效辐射等,延缓叶片的衰老和光合功能衰退,延长了叶片的光合功能期,使光合速率维持在一个较高的水平.

细极链格孢菌蛋白激发子诱导棉苗基因表达差减文库的构建及EST分析

利用细极链格孢菌蛋白激发子粗提蛋白液诱导棉花苗期相关基因表达，以清水喷施为对照样本，进行抑制差减杂交，构建棉花苗期基因表达文库。结果显示，插入片段的大小主要集中在200～1000bp。随机选取150个克隆进行菌液PCR检测与测序，并将所测序列与Gen-Bank dbEST库进行比对，共得到104个单一序列。其中，78个EST与其它物种已知基因部分区域的同源性为48．54％～100％，占总EST的75％；6条EST序列能在数据库中检索到同源性序列，但其功能尚不清楚，占5．77％；10个EST能在数据库中发现为推测蛋白，占9．6％；10个EST在GenBank中没有查到对应的同源序列，可能是新基因，占9．6％。同时，将所得到的104条EST序列在WEGO网站上进行功能分类，通过Gene ontology确定具体EST的分子功能。其中，在生物途径分类中，与生理途径和细胞过程相关的EST最多，分别为48个和45个；在细胞组份功能分类中，与细胞相关的EST最多，达到44个；在分子功能分类中，催化功能与分子绑定相关的EST数量最多，分别达到了30个和28个。由此可见，细极链格孢菌蛋白激发子诱导棉苗时涉及到植物的生理生化的多条途径，受到多个基因的调控，可能包括抗病与防御蛋白、信号传导蛋白、转录因子、能量代谢相关蛋白、抗逆相关蛋白、细胞保护机制蛋白、功能未知及其它蛋白等相关蛋白。

细极链格孢菌Hog1 MAPK(酵母)同源基因AtHOG1的克隆与功能分析

为阐明高渗透压甘油激酶在链格孢菌中的功能,通过遗传学手段,构建了细极链格孢菌(Alternaria tenuissi-ma)cDNA酵母表达文库,并对其进行筛选而获得细极链格孢菌高渗透压甘油蛋白激酶AtHOG1基因,该基因全长1 539 bp,编码355个氨基酸。AtHog1p含有MAPK保守的激酶激活区域"TGY",与来源于烟曲霉(Aspergillus fumigatus)AfOsm1p(XP-752664)、稻瘟菌(M.grisea)MG01822(XP-363896)及酿酒酵母(S.cerevisiae)ScHog1p(AAB67558)高度同源,相似性分别为94%,90%和80%。在高渗环境下,AtHOG1基因与ScHOG1基因功能相同。链格孢菌中存在HOG通路信号途径,AtHOG1基因可能与链格孢菌的逆境适应性调节密切相关。

细极链格孢菌蛋白激发子对棉花生长相关酶活性的影响

细极链格孢菌蛋白激发子是一种能诱导植物获得系统抗病性的新型蛋白激发子。在湘杂棉3号的主要生育期,用细极链格孢菌蛋白激发子(PEAT)蛋白粗提液进行叶面喷施后,对棉花叶片中酶保护系统的变化进行了研究。结果表明,经细极链格孢菌蛋白激发子诱导后,棉花叶片POD、SOD、NR的活性与C/N比对照显著增加,而MDA含量比对照显著减少。这可能是PEAT影响棉花细胞内微环境的氧化、还原状态激发植株体内酶保护系统,激活植物自身防卫系统与生长系统,从而使棉花产生对病虫害的抗性,促进了植株生长。

一种蛋白激发子产生菌细极链格孢菌的生物学特性研究

[目的]探讨蛋白激发子产生菌链格孢菌的基本生物学特性。[方法]研究不同温度、湿度、pH值、碳源及氮源对该菌菌丝生长及分生孢子萌发的影响。[结果]该菌菌丝生长最适温度28℃,最适pH值7~8 孢子萌发的最适温度28℃,最适相对湿度98%,最适pH值7~8。葡萄糖为最适碳源,最适氮源为蛋白胨,硫酸胺和氯化胺等会抑制菌丝生长。[结论]中温高湿环境利于链格孢菌的生长及孢子萌发,不同营养条件对该菌菌丝生长有显著影响。

海南粗榧内生真菌细极链格孢CH1307产高三尖杉酯碱的发酵条件

以海南粗榧内生真菌细极链格孢CH1307发酵产高三尖杉酯碱的产量为指标,采用响应曲面法分析葡萄糖质量浓度、硫酸镁质量浓度、复合维生素B质量浓度及摇床转速对该菌株液态发酵的影响。结果表明,细极链格孢CH1307液态发酵产高三尖杉酯碱的关键因子值分别为葡萄糖32.0226g·L-1,硫酸镁0.0966g·L-1,复合维生素B0.1239g·L-1,转速146.4742r·min-1时CH1307发酵最好,代入方程的HHRT产量为190.6370μg·L-1。

细极链格孢菌蛋白激发子对棉花种子萌发及幼苗生长的影响

探讨了激活蛋白对棉花种子萌发及幼苗生长的影响。结果表明,蛋白激发子处理棉种能促进棉种萌发,提高发芽率,尤以处理浓度3μg/mL,浸泡6h的处理效果最好。激活蛋白能明显促进根系发育,表现为根重增加、根长增长、茎增粗。

肉牛源细极链格孢菌的分离鉴定

为鉴定肉牛皮肤病病原及其致病性并筛选其敏感药物,本研究取患皮肤病肉牛病变部位皮屑、毛发和痂皮进行病原菌的分离,并对分离菌株进行了形态学鉴定、ITS序列分析、小鼠致病性试验和药敏试验。结果显示分离到1株形态特征与细极链格孢菌极其相似的菌株(PY2-1-2);经PCR扩增、测序和BLAST序列比对,结果显示分离株(PY2-1-2)的ITS基因序列与细极链格孢菌(MG975630.1)的ITS基因序列的相似性为99%,分离株PY2-1-2的ITS基因序列长度为543 bp,该片段包括ITS1、5.8S rDNA和ITS2的全部基因序列以及18S rDNA和28S rDNA的部分基因序列,提交GenBank(MH656780.1)。根据形态学结合ITS基因序列分析结果确定该分离株为细极链格孢菌。小鼠致病性试验结果显示该菌对小鼠有致病性。药敏试验结果显示:该菌对灰黄霉素、氟康唑、伊曲康唑、酮康唑的最小抑菌浓度(MIC)值分别为0.5μg/mL、4μg/mL、1μg/mL、1μg/mL。本研究为今后进一步探究细极链格孢菌引起的皮肤病诊治提供科学有效的参考。

细极链格孢菌peaT2基因在毕赤酵母中的表达及蛋白功能确定

从细极链格孢菌表达文库获得阳性克隆子,序列分析表明,克隆的DNA片段中含有完整的开放阅读框架,将该基因命名为peaT2(GenBank登录号为EF212880)。用PCR法扩增peaT2基因的编码序列并亚克隆到毕赤酵母表达系统的表达载体pPIC9K上,得到重组质粒pPIC9K/peaT2。重组质粒经SacⅠ线性化后用电穿孔法导入到毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115中,采用MD、G418-YPD平板和PCR法筛选Mut+表型,获得了分泌表达的重组毕赤酵母。随机挑取一菌株作为表达菌,用甲醇诱导PeaT2蛋白表达。SDS-PAGE及Western blot检测结果均表明PeaT2在毕赤酵母中成功地分泌表达。用peaT2基因的表达蛋白处理小麦种子,生物测定表明,表达蛋白能明显促进小麦的生长,具有蛋白激发子作用。

细极链格孢发育及其侵染铁皮石斛的显微观察

细极链格孢是引起铁皮石斛黑斑病的病原菌。文章观察病原菌的生长发育及其侵染铁皮石斛叶片过程。结果表明:细极链格孢发育速度较快,通过伤口侵染寄主植物,并能在叶片上萌发、生长和定殖,从而引起病害。分生孢子于12h时萌发,24h形成菌丝,第3-4d产生孢子梗,并在其上着生链状分生孢子,第5-6d时产生大量菌丝和分生孢子,并布满了整个伤口组织。

芹菜叶斑病病原菌细极链格孢药剂筛选

【目的】研究筛选对芹菜叶斑病(病菌为:细极链格孢Alternaria tenuissima)具有良好防治作用的药剂。【方法】采用菌丝生长速率法和琼脂片法分别用14种杀菌剂对细极链格孢(A.tenuissima)菌丝和孢子萌发做室内毒力测定并进行田间药效试验。【结果】14种杀菌剂中对病原菌菌丝抑制效果最好的分别为3%甲霜恶霉灵、5%香芹酚、10%苯醚甲环唑、其EC_(50)分别为10.8、19.9、26.2μg/mL;对孢子萌发抑制效果最好的分别为3%甲霜恶霉灵、25%嘧菌酯、43%戊唑醇,其EC_(50)分别为15.7、29.5、38.7μg/mL。只有3%甲霜恶霉灵具有最佳的防治效果。防效最好的药剂为3%甲霜恶霉灵和5%香芹酚,其防效分别为96.3%和83.9%。【结论】3%甲霜恶霉灵最适用于田间芹菜叶斑病的防治。

发生于免疫受损患者的皮肤细极链格孢感染1例

A 28- year- old man, on immunosuppressive therapy for a recent kidney- pancreas transplant, presented to our department with an unusual violaceous nodule on his right knee. A biopsy specimen showed a granulomatous response in the dermis, surrounding numerous fungal cells and septate hyphae. Fungal cultures yielded dark grey colonies, which were identified as Alternaria tenuissima. To our knowledge this is the first report of A. tenuissima infection reported in the U.K.

链格孢菌(Alternaria tenuissima)cDNA酵母表达文库的构建

为了解细极链格孢菌(Alternaria tenuissima)遗传学背景,克隆及研究该菌功能基因,根据Gateway技术构建了既能在酵母细胞中表达外源基因又能在原核细胞大量复制的酵母表达载体pRS-DEST42,构建了细极链格孢菌(A.tenuissima)cDNA酵母表达文库。经检测,文库的平均滴度为2.44×106cfu/ml,文库总容量为2.44×107cfu(colony-forming unit),阳性克隆率为100%,平均插入片段约为1.38kb。细极链格孢菌cDNA酵母表达文库是一个质量较高的表达文库,为克隆与分离全长目的基因及其功能奠定了坚实的基础。

引起云南省珠芽魔芋叶斑病的链格孢菌种类鉴定

珠芽魔芋Amorphophallus bulbifer是我国西南地区广泛种植的一种特色经济作物,自2015年开始云南省德宏州及西双版纳州珠芽魔芋种植区发生了一种魔芋新病害。典型症状为早期叶片上出现具黄色晕圈圆形斑点,逐渐形成大斑块,最终整个叶片枯死。本研究采用温室接种致病性测定、形态及分子鉴定等方法对珠芽魔芋叶斑病病原进行研究。结果表明:从各种植区采集的37份叶部病样中分离得到37个生长较一致的真菌分离物;致病性试验证实,均为珠芽魔芋叶斑病病原菌,显微镜下观察该病原菌具有细极链格孢Alternaria tenuissima的形态特征;将其rDNA-ITS、EF-1ɑ和β-tubulin基因序列在GenBank中进行同源性比对分析显示,其序列与A.tenuissima的相似性为99%~100%,分子鉴定与形态学鉴定结果一致。这是国内首次发现由细极链格孢侵染所引起的珠芽魔芋叶斑病。

交链格孢菌EST-SSR信息分析与分子标记通用性评价

为了弄清交链格孢菌(Alternaria alternata)EST数据库中的SSR信息资源,并开发可用于研究近缘种细极链格孢(Alternaria tenuissima)遗传多样性的EST-SSR分子标记。从NCBI数据库下载A.alternata表达序列标签(Expressed sequence tag,EST)共727条,经过研究分析发现,A.alternata EST中SSR含量非常丰富,每5.343 kb含有1个SSR位点。根据SSR两端保守序列,设计合成13对EST-SSR引物,对来自新疆不同地区不同寄主的38株A.tenuissima进行通用性检测。检测结果显示共有5对引物能扩增出多态性条带,扩增多态率为55.56%。因此,基于A.alternata EST数据库开发的SSR分子标记,在开展近缘种A.tenuissima遗传多样性研究时具有较好的通用性。

细绿萍黑腐病病原菌鉴定及其生物学特性和防治药剂筛选

为了明确引起细绿萍黑腐病病原菌种类,研究该病原菌的生物学特性及常用杀菌剂对其菌丝生长的抑制作用。形态学结合多基因联合发育分析结果表明,引起细绿萍黑腐病的致病菌为细极链格孢(Alternaria tenuissima)。生物学特性表明,细极链格孢菌丝生长和产孢的最适温度均为25℃,全黑暗条件下利于菌丝生长和产孢。pH值在6.0~8.0时更利于其产孢,在CMA培养基上生长速度最快,而在PSA培养基上产孢量最大。碳源选择上,在丙三醇上生长速度最快,而甘露醇最有利于其产孢;氮源选择上,在硝酸钾上的生长速度最快,且酵母浸膏最有利于其产孢。室内药剂毒力测定结果表明,供试5种杀菌剂对细极链格孢菌丝生长均有一定的抑制作用,其中32.5%苯甲嘧菌酯SC的抑制活性最强,EC 50为0.0012μg·mL^(-1)。

新疆万寿菊褐斑病病原鉴定、生物学特性及室内药剂筛选

为明确新疆万寿菊褐斑病的病原菌种类及其生物学特性,筛选出室内有效杀菌剂。对采自新疆莎车县的万寿菊病害标本采用组织法分离获得单孢纯化的病原菌,通过致病性测定结合形态学特征以及ITS、EF1-α、Alt a1多基因序列系统发育分析对病原菌进行鉴定,并采用菌丝生长速率法测定不同培养基、温度、pH值、碳源、氮源、光照、致死温度处理以及10种常用化学药剂对病原菌菌丝生长的影响。结果表明,新疆万寿菊褐斑病病原菌为细极链格孢(Alternaria tenuissima),通过十字交叉法测定病原菌生物学特性,病原菌菌丝在马铃薯葡萄糖培养基(PDA)生长最快,最适pH值为7,相对最适碳源为葡萄糖,最适氮源为蛋白胨,在24 h光照条件下生长最好,最适生长温度25℃,致死温度55℃10 min。采用菌落生长速率法,对病原菌进行室内药剂筛选,室内药剂筛选结果表明,25%吡唑醚菌酯和80%乙蒜素抑菌效果相对较好,EC50分别为0.0118μg/mL和0.3007μg/mL。

蓝莓茎褐斑病病原鉴定及药剂筛选

【目的】明确引起吉林省长春市蓝莓茎褐斑病的病原种类及其侵染特征,筛选对其菌丝生长有显著抑制作用的杀菌剂,为蓝莓茎褐斑病的科学防治提供参考。【方法】采用组织分离法获得蓝莓茎褐斑病病原菌,根据柯赫氏法则对分离纯化的病原菌进行回接验证,通过形态学结合分子生物学方法对病原菌进行分类鉴定,采用石蜡切片法观察病原菌对蓝莓茎组织的侵染特征,用生长速率法筛选高效抑制病原菌生长的杀菌剂。【结果】据鉴定,引起长春市莲花山蓝莓褐斑病的病原菌为细极链格孢(Alternaria tenuissima)。细极链格孢仅通过伤口侵染蓝莓幼茎,对多年生老茎无致病作用,且细极链格孢菌丝侵入到蓝莓幼茎后仅沿着表皮及皮层组织细胞向前扩展,不能侵染其皮层以内的细胞。室内药剂筛选结果表明,供试8种杀菌剂对细极链格孢菌丝的生长均具有抑制作用,其中氟啶胺的抑制作用最强,EC _(50 )为0.4422 mg/L;苯醚甲环唑抑菌活性次之,EC _(50 )值为0.7214 mg/L。【结论】蓝莓茎褐斑病由细极链格孢侵染引起,其对蓝莓茎为弱寄生性,氟啶胺和苯醚甲环唑对细极链格孢具有良好的抑菌效果。

月季黑斑病发生和危害及抗性育种的研究进展

月季黑斑病是由蔷薇双壳菌及细极链格孢侵染引发的一类严重影响月季观赏价值和生物产量的病害。综述了月季黑斑病的发生与危害及抗性育种的研究进展。

苍术黑斑病菌(Alternaria tenuissima)生物学特性研究

从苍术黑斑病叶片上分离得到黑斑病病原菌[AltPtnaria tenuissima （Kunze）Wiltshire]，对其生物学特性进行了研究。研究结果表明，病菌菌丝在15～35℃都能生长，最适温度为25℃；pH在4～11都能生长，最适pH为6．O～7．0。在Czapek培养基上，病原菌以葡萄糖和甘露醇为碳源生长最好，以硝酸钾为氮源生长最佳。30％苯醚甲．丙环乳油和lO％苯醚甲环唑水分散粒剂对菌丝生长有很好的抑制效果，而75％代森锰锌可湿性粉剂和75％百菌清可湿性粉剂对菌丝生长的抑制效果较差。