细粒棘球蚴囊液对外周血淋巴细胞的影响

目的研究细粒棘球蚴囊液对健康人外周血单个核细胞(PBMC)及JurkatT淋巴细胞等的影响。方法PBMC及JurkatT淋巴细胞用含不同浓度(1000、100和10μg/ml)囊液的DMEM培养基培养5d后,台盼蓝染色检测细胞活力。用含植物血凝素(PHA)的DMEM培养基培养PBMC,以MTT法观察PBMC增殖情况,用流式细胞仪检测CD4+、CD8+细胞数量及CD4+/CD8+值,用原位末端标记法和Hoechst33258荧光染色法检测PBMC细胞凋亡。结果各浓度囊液对PBMC和JurkatT淋巴细胞未显示出毒性作用。囊液不影响PHA对PBMC的增殖功能。在1000μg/ml囊液组CD4+、CD8+细胞数量与空白对照组(CD4+72.08±4.10,CD8+29.32±2.62)相比,CD4+(49.32±8.32)显著减少(P<0.05),CD8+数量(32.02±6.57)略增加(P>0.05),CD4+/CD8+比值减少。未见细胞凋亡现象。结论细粒棘球蚴囊液对外周血单个核细胞的生长无抑制作用,但可以使CD4+、CD8+细胞的数量和比例改变,向Th2免疫抑制方向转变。

大蒜素对细粒棘球蚴囊液诱导巨噬细胞氧化损伤的保护作用

目的 探讨大蒜素(Allicin)对巨噬细胞(RAW264.7细胞)氧化损伤的作用及其机制。方法 构建细粒棘球蚴囊液(EgCF)刺激RAW264.7细胞损伤模型。将RAW264.7细胞随机分成6组:对照组;EgCF诱导组(终浓度2 mg·mL^(-1)EgCF处理24 h);不同浓度Allicin预处理组(分别使用15、20、 30、40μg·mL^(-1)预处理20 h后,EgcF作用4 h)。CCK-8法检测细胞存活率;qRT-PCR检测核因子E2相关因子(Nrf2)、过氧化物酶(CAT)、血红素加氧酶(HO-1)、Cu-Zn超氧化物歧化酶(SOD-1)、Mn超氧化物歧化酶(SOD-2)、Kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(Gclc)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶调节亚基(Gclm)的mRNA表达;Western blot检测Nrf2蛋白表达;微板法检测总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、细胞丙二醛(MDA)含量;流式细胞术检测活性氧(ROS)变化。结果 与对照组相比,EgCF组中细胞存活率下降,Nrf2蛋白、MDA和ROS水平上调(P<0.05);与EgCF组相比,Allicin预处理组中细胞存活率、CAT、HO-1、SOD(1/2)、Gclm和T-AOC表达升高,Keap1、Gclc、MDA、ROS表达降低(P<0.05)。结论 Allicin对EgCF诱导RAW264.7细胞氧化损伤有保护作用,其机制可能与激活Nrf2/Keap1信号通路,提高胞内抗氧化酶活性,清除胞内过量ROS有关。

细粒棘球蚴囊液对小鼠脾淋巴细胞中CD4^(+)IL-9^(+)T细胞分化的影响

通过不同质量浓度细粒棘球蚴囊液(Echinococcus granulosus cyst fluid,Eg CF)体外刺激小鼠脾淋巴细胞,观察其对Th9细胞分化的影响。以100、200、400和800μg/m L Eg CF体外与小鼠脾淋巴细胞共培养后收集细胞,通过CCK8检测细胞增殖能力,流式细胞术检测各组CD3^(+)T、CD4^(+)T、CD4^(+)IL-9^(+)T细胞占比和凋亡率。CCK8检测结果显示,随着Eg CF质量浓度的增加,脾淋巴细胞增殖活性升高且成剂量依赖性(P<0.001)。细胞凋亡检测结果表明,随着Eg CF质量浓度的增加,小鼠脾淋巴细胞凋亡率增加(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,不同质量浓度Eg CF刺激促进脾淋巴细胞中CD3^(+)T细胞和CD4^(+)IL-9^(+)T细胞的分化,抑制CD4^(+)T细胞的分化,且均成剂量依赖性(P<0.05)。结果表明,不同质量浓度Eg CF刺激通过上调Th9细胞相关细胞因子IL-9,促进细胞增殖和凋亡,调控宿主的免疫细胞,对阐明细粒棘球蚴调节宿主免疫应答提供了理论依据,可为细粒棘球蚴病免疫预防提供新的研究思路。

细粒棘球蚴囊液对HepG2肝癌细胞系细胞周期的影响

目的探讨细粒棘球蚴(Eg)囊液(HCF)在感染急性期对宿主肝细胞MAPK信号通路及细胞周期的影响。方法常规方法培养HepG2细胞,以HCF为刺激物,于不同时间点用Western blot检测p-ERK、增殖细胞核抗原PC-NA、细胞周期蛋白cyclin-D1、A、B1和E的表达水平,并与无FCS组比较。结果 Western blot检测显示,15%、30%HCF组p-ERK分别在换液培养3h和30min高表达(P<0.05),PCNA分别在3h和12h高表达(P<0.05),cyclin-D1在3h高表达(P<0.05),cyclin-A分别在3h和12h高表达(P<0.05),15%HCF组cyclin-E在3h高表达(P<0.05),15%、30%HCF组cyclin-B1在各时间点表达量微弱(P<0.05)。结论 HCF对体外培养的HepG2细胞无毒害,且对其增殖有一定的促进作用。

细粒棘球蚴囊液对大鼠肝星状细胞增殖的影响

目的:探讨细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)囊液(HCF)对大鼠肝星状细胞(HSC)T6细胞系增殖的影响。方法:HCF体外刺激T6细胞,通过MTT法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,Western Blot检测细胞外调节激酶(ERK1/2)磷酸化、细胞增殖核抗原(PCNA)及细胞周期蛋白(cyclin)D1、E、A和B1表达水平。结果:6 h和12 h,15%、30%和60%HCF组与对照组相比增殖显著(P<0.05);15%HCF组细胞增殖指数分别为57.9%和71%;Western Blot检测显示15%HCF组pERK、PCNA和cyclin E在0.5 h时的表达量较为对照组差异显著(P<0.05);cyclin D1在6 h时表达量较对照组差异显著(P<0.05)。结论:HCF可能是通过激活ERK后调控细胞周期相关蛋白的表达促进了HSC的增殖。

细粒棘球蚴囊液对HepG2细胞增殖的影响

目的探讨细粒棘球蚴囊液（HCF）对宿主肝细胞丝裂原活化蛋白激酶信号通路及细胞周期的影响。方法四甲基偶氮唑盐法检测不同浓度HCF对HepG2细胞的增殖作用。流式细胞仪检测细胞周期。Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶（P-ERK）、增殖细胞核抗原（PCNA）、细胞周期蛋白（cyclin）D1、cyclin A、cyclin B1、cyclin E的表达水平。对数据采用重复测量方差分析。结果在48、72h和96h，15％、30％和60％HCF组与无胎牛血清比较，能明显促进HepG2细胞的增殖护值均〈0．05）。Westem blot检测结果显示：15％HCF组p-ERK在48h高表达（F=1．916，P〈0．01），cyclin D1在24h高表达旷=3．901，P〈0．01），15％、30％HCF组PCNA分别在48h、72h高表达（F=91．140，P〈0．01），cyclinA分别在48h、72h高表达旷=18．587，P〈0．01），cyclinB1分别在48h、72h高表达（F=2．064，P〈0．01），30％HCF组cyclinE在96h高表达（F=1．068，P〈0．01）。结论HCF对体外培养的HepG2细胞无毒害作用，对其增殖有一定促进作用。

细粒棘球蚴囊液通过Toll样受体2调节细胞因子分泌的研究

目的探讨细粒棘球蚴囊液(EgCF)是否通过刺激巨噬细胞高表达Toll样受体2(TLR2),进而调节细胞因子的表达。方法培养获得腹腔巨噬细胞,用EgCF刺激小鼠腹腔巨噬细胞,用实时荧光聚合酶链反应检测不同时间点TLR2 mRNA的表达水平,用Western Blot法检测刺激不同时间TLR2信号通路中磷酸化的P38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38)、磷酸化的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)、磷酸化的细胞外调节蛋白激酶(p-ERK)和磷酸化的核转录因子κB-P65(p-NF-κB-P65)的表达水平。siRNA沉默TLR2后,用EgCF再次刺激腹腔巨噬细胞,用Western Blot法检测p-P38、p-AKT、p-ERK和p-NF-κB-P65的表达水平,用酶联免疫吸附实验法检测白细胞介素-6(IL-6)、IL-10和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平。结果巨噬细胞在EgCF刺激后TLR2 mRNA及p-P38、p-AKT、p-ERK、p-NF-κB-P65表达水平均升高。沉默TLR2后,p-P38、p-AKT和p-ERK表达水平均降低,但p-NF-κB-P65无改变。沉默组的IL-6和TNF-α表达水平均较EgCF刺激组升高,IL-10较EgCF刺激组降低。结论EgCF刺激巨噬细胞高表达TLR2,可能通过TLR2介导的信号通路抑制促炎因子TNF-α和IL-6分泌,促进抑炎因子IL-10的分泌。