具有肝转移倾向的结肠癌细胞亚系的筛选与鉴定

目的筛选人结肠癌SW480细胞中具有特定肝脏转移倾向的亚克隆,比较它与母系生物学特性的差异,为结肠癌肝转移机制的研究提供基本的实验材料。方法采用外科原位接种、组织块细胞培养法从裸鼠体内获得SW480细胞系中具有肝脏转移倾向的亚克隆SW480/M5;体内体外实验验证它与母系细胞在生物学特性上的差异。结果体内实验证明SW480具有广泛转移的潜能,而SW480/M5细胞只具有向肝脏转移的潜能;SW480/M5细胞原位瘤的质量较SW480细胞大且皮下瘤生长速度较快;体外实验证明SW480/M5细胞的克隆形成能力,体外增殖能力、体外运动及侵袭能力较SW480细胞强,而对FN的粘附能力较SW480细胞弱。结论从结肠癌细胞系SW480中筛选出的细胞亚系SW480/M5转移方向明确,是结肠癌肝转移机制研究的理想细胞模型。

顺铂耐药性L1210细胞亚系的建立及特征

目的 建立肿瘤耐药机制研究及筛选抗肿瘤药物的体外实验模型。方法 应用药物连续作用并逐步提高药物浓度的剂量递增法及软琼脂细胞克隆技术 ,用拒染法测定药物的细胞毒作用 ,建立了一株对顺铂 (DDP)具有 40倍耐药性的L12 10细胞亚系 (L12 10 /DDP40 )。结果 DDP耐药细胞亚系在倍增时间、集落形成率、细胞周期、DNA指数和细胞形态等方面基本保持了亲代细胞 (L12 10 )的生物学特性。耐药细胞亚系在加药状态下冻存半年后复苏其耐药性仍然存在 ,解除药物作用后 5mon其耐药性仍维持原有水平。耐药细胞亚系对卡铂、丝裂霉素、噻替派、甲氨蝶呤、长春新碱和氮芥具有不同程度的交叉耐药性 ,对三尖杉酯碱和阿霉素无交叉耐药性 ,对阿糖胞苷和氟尿嘧啶仍较敏感。结论 DDP耐药性L12 10细胞亚系的建立 ,为深入研究肿瘤细胞耐药机制、寻找逆转耐药的措施提供了较好的体外实验模型。

不同转移潜能的人胰腺癌JF305单克隆细胞亚系的建立

为研究胰腺癌的转移机理，在我校原建立的人胰腺癌ＪＦ３０５ 细胞系基础上，利用细胞克隆，细胞电泳，流式细胞仪及人癌裸小鼠原位移植技术，建立了具有不同转移潜能的人胰腺癌ＪＦ３０５ 单克隆细胞亚系和具有不同转移潜能的人胰腺癌单克隆细胞亚系裸小鼠原位移植模型。结果表明该单克隆细胞亚系及其肿瘤移植模型的建立，为探讨胰腺癌转移机理提供了较理想的研究方法。

两种不同淋巴转移能力小鼠肝癌细胞亚系的建立和生物学特性

通过单细胞分离(克隆)培养和局部淋巴结转移灶筛选的方法,建立两种不同淋巴转移能力HepA肝癌细胞亚系,分别命名为HepA-H和HepA-L,并比较其生长、游走和贴壁能力等生物学特性。瘤细胞接种于小鼠足垫后,同侧腘窝淋巴结转移率,HepA-H为83.3%,HepA-L为16.7%,两者具有显著差异(p<0.01)。两种细胞亚系均未见肺、肝、脾、肾等脏器转移灶。体外实验显示,HepA-H的生长、游走和贴壁能力均强于HepA-L。HepA肝癌不同淋巴转移能力亚系的建立,为研究肿瘤经淋巴管转移机理提供了良好的肿瘤淋巴转移动物模型。

人膀胱癌多药耐受性细胞亚系BIU87PR的建立及生物学特征

多药耐受肿瘤细胞系是研究肿瘤多药耐受性的良好实验模型。本研究通过使用单一浓度阿霉素短时冲击诱导的方法,历时5月,成功地诱导建立了人膀胱移行上皮癌多药耐受细胞亚系BIU-87PR。生物学鉴定表明,BIU-87PR对阿霉素的耐药性较敏感细胞BIU-87提高了2.1倍。对足叶乙■的耐药性提高了4倍.对长春新碱的敏感性提高了2.4倍.BIU-87PR的生物学特性与BIU-87相似,生长速率较慢,融合密度略降低,细胞轻度异形性,染色体分析显示双微体略增多.

不同转移特性人成骨肉瘤MG-63细胞亚系的建立及特征

目的建立高低不同转移特性人成骨肉瘤MG63细胞亚系并研究其生物学特性。方法通过体外克隆技术和体内移植,筛选并建立了6个细胞亚系,测量其细胞电泳率、细胞增殖率,利用琼脂克隆形成实验和裸鼠体内成瘤实验,比较各细胞亚系的转移特性。结果A2、A3、A16亚系的细胞电泳率、细胞增殖率、琼脂克隆形成能力和肺转移灶形成率均明显高于A1、A6、A20亚系。结论通过体外克隆技术和体内移植的方法可建立不同转移特性的MG63细胞亚系,有助于骨肉瘤转移机理的进一步研究。

两种体外筛选不同转移潜力骨肉瘤细胞亚系方法的比较

目的:为建立不同转移潜力骨肉瘤细胞亚系寻找一种理想的体外筛选方法。方法:利用体外克隆技术分离出 20株骨肉瘤MG 63细胞亚系, 通过电泳率测定和体外迁移实验两种体外筛选方法,各筛选出 1个高转移和低转移潜力的细胞亚系 (A1、A2和B1、B2),再利用体外增殖、琼脂克隆形成和裸鼠体内移植实验,进一步比较和证实两种方法的优劣。结果:A1、B1的细胞增殖率、琼脂克隆形成能力和肺脏转移率均明显高于A2和B2, 有极显著性的差异(P<0. 01), A2的克隆形成能力和肺转移灶形成率均高于B2(P<0. 05)。结论:两种方法均能有效地筛选出高转移潜力的骨肉瘤细胞亚系, 在筛选低转移潜力的细胞亚系方面,体外迁移实验的方法明显优于电泳率测定的方法。

大肠癌HT-29细胞亚系与母系转移能力和相关因子的比较

目的 :探讨大肠癌细胞转移能力与肿瘤相关因素的关系。方法 :用结肠癌 HT- 2 9亚系 HT- 2 9c和 HT- 2 9d细胞在裸大鼠体内建立转移模型 ,比较其与母系的转移能力。用 ELISA法测定 3个大肠癌细胞系的尿激酶型纤溶酶原激活因子 (u PA)及纤溶酶原抑制剂 - 1(PAI- 1)含量 ;用免疫组化技术检测癌胚抗原和 3-磷酸肌醇激酶(PI3- Kinase)在体内外的表达 ;用流式细胞仪测定癌胚抗原表达。结果 :在裸鼠体内 HT- 2 9d细胞的肝转移率明显高于母系 HT- 2 9细胞 ,转移累及的脏器增多。在体外培养中 ,HT- 2 9d细胞的 u PA及 PAI- 1含量明显高于 HT- 2 9和 Wi Dr细胞。在裸鼠体内 ,HT- 2 9d细胞的 PI3- Kinase表达明显高于 HT- 2 9和 Wi Dr细胞。结论 :经裸鼠体内筛选的大肠癌 HT- 2 9细胞亚系表现出增强的肿瘤转移能力。UPA、PAI- 1的含量及 PI3- Kinase的表达与肿瘤转移能力有关。

hsa-mir-615过表达胰腺癌稳定细胞亚系的构建及功能初步验证

慢病毒（Lentivirus）载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上,从而达到持久性表达[1].本实验在对胰腺癌差异表达的microRNA进行研究时发现hsa-mir-615在胰腺癌组织和胰腺正常导管上皮组织中呈现差异表达[2],异常表达的microRNA可能具有生物学功能.因此,本实验构建hsa-mir-615过表达慢病毒载体并包装成慢病毒,感染人胰腺癌细胞MIA PaCa-2,建立hsa-mir-615过表达稳定细胞系,使用CCK-8法观察hsa-mir-615对胰腺癌细胞系生长的影响,为进一步研究hsa-mir-615的生物功能构建细胞模型.

不同转移潜能癌细胞亚系分离鉴定和细胞克隆模型建立及在转移机理研究中应用

本成果是近几年来我组研究系统成果的汇总(1990～1995),包括论文20余篇及参加国内外重要会议的论文摘要8篇。为多项基金资助的课题,包括部分“八五”攻关课题和“自然科学基金”资助项目等。本成果以三个转移性癌细胞系为基础从每个转移性癌细胞系中分离出不同转移的克隆细胞株,并进行了鉴定,建立了较稳定的不同转移潜能癌细胞亚系和细胞克隆模型。利用这些克隆细胞株进行了各自与转移性相关因素的研究。

骨肉瘤高低不同转移特性细胞亚系差异表达基因的分析和意义

背景与目的:骨肉瘤转移机制密切相关的基因筛选是骨科领域研究的难点。本研究应用基因芯片技术筛选高低不同转移特性骨肉瘤细胞亚系的差异表达基因,并探讨其转移的分子机制。方法:提取骨肉瘤细胞亚系A1和A2的总RNA,反转录制备杂交探针,运用基因芯片进行杂交,杂交信号用Agilent Scanner扫描,用Im aGene 3.0软件和Genespring软件分析和处理数据。结果:对A1和A2的基因表达谱分析,发现两者表达差异显著的基因有222个,其中在A1中119个基因表达上调,103个基因表达下调,这些基因可以划分为6个主要功能群,其中49个基因的差异表达非常显著。结论:A1和A2存在多方面基因的表达差异,只有部分差异与骨肉瘤的转移机制密切相关;基因芯片技术能有效地分析各细胞亚系的基因表达谱、为研究骨肉瘤转移机制提供新的途径。

人卵巢癌细胞亚系M951的建立和生物学特性初步观察

采用体外侵袭小室的方法,以Matrigel模拟基底膜,NIH3T3细胞条件培养液作为趋化因子进行卵巢癌细胞亚系的分离,建立了亚系M951,其体外和皮下生长速度与母系相似,但腹腔播散率高于母系,表明M951细胞具有较高的恶性潜能。

VP-16诱导的鼻咽癌细胞亚系多药耐受表型的研究

经VP-16 大剂量短暂冲击加递增低浓度诱导方法建立了鼻咽癌耐药细胞亚系LCE/VP.用RT-PCR和FCM 免疫荧光法检测了耐药基因MRP和m dr1 在m RNA 水平和蛋白质水平的表达,并用MTT 法测定了LCE/VP对9 种化疗药物的敏感试验. 结果发现LCE/VP细胞MRP和m dr1 在m RNA水平均有表达,且前者明显高于后者,蛋白质水平的表达情况与m RNA 水平相一致;LCE/VP对9 种化疗药物中的6 种药物敏感程度均有不同倍数的增加. 这表明LCE/VP呈典型的MDR表型,并有耐药基因MRP和m dr1 的共表达。

Hela/MMC细胞亚系的建立及其耐药机制的探讨

目的 建立宫颈癌Hela MMC耐药细胞亚系 ,并探讨其耐药机制。方法 以人宫颈癌Hela细胞为亲本 ,采用丝裂霉素连续性药物作用 ,间隙性增加药量 ,逐步提高药物浓度的方法 ,分离出MMC耐药亚系(Hela MMC) ,并比较两种细胞生物学特性差异。结果 Hela MMC细胞对MMC有 5.0 2倍耐药 ,对DDP有2 .0 3倍交叉耐药 ,对VCR、ADM和 5 Fu保持敏感 ;耐药细胞核分裂指数增加 ;耐药细胞内丝裂霉素蓄积量比亲代细胞低 32 .64% (P <0 .0 1)。DNA链间交联指数降低 51.91% (P <0 .0 1)。结论 耐药细胞Hela MMC具有多药耐药特性且生长增殖能力强于亲代细胞 ,其对MMC耐药性与细胞内药物浓度降低和DNA链间交联减少有关。

生长特性差别的胃癌MGC803细胞亚系间细胞骨架、细胞通讯与癌基因表达的比较研究

肿瘤细胞表型差异是临床药物敏感性、抗原性、转移性、潜伏性和进展速度等差异的主要原因。为了弄清恶性表型差别的表现、相关性及调节机理、我们从胃癌MGC 803系分离了单细胞亚系,各亚系按克隆过程的时间差别归纳分组,选快组M 17、中组M 6和慢组M 3进行比较。软琼脂生长实验表明三者的恶性程度有显著差别;M17恶性度最高,M3最低,M6居中。与其它表型联系比较,证明细胞生长速度、细胞微丝、微管骨架破坏及细胞通讯功能抑制都与锚着不依赖性生长的恶性特征有平行相关性。同时,M 17和M 3原癌基因表达有明显差别。

人前列腺癌细胞PC-3M亚系u-PAR基因与蛋白质表达

为研究与人前列腺癌细胞 (PC- 3M)侵袭能力相关的靶分子 ,采用有限稀释法分离单克隆细胞株 ,并应用单层细胞侵袭等实验鉴定各亚系的体外侵袭能力 ;借助 RT- PCR和免疫组化的方法 ,分别在转录和翻译水平检测 5株侵袭能力不同的 PC- 3M亚系尿激酶型纤溶酶原激活物受体 (u- PAR)的表达。结果显示 :高侵袭亚系 u- PAR基因 m RNA的表达和蛋白质水平均明显高于低侵袭亚系。提示 :PC- 3M亚系 u- PAR的高表达与其较强的侵袭能力密切相关 ,而

放射抗拒肺癌细胞亚系D6-R的建立及其细胞周期研究

目的 探讨放射抗拒肺癌细胞系的放射抗拒机理。方法 应用X射线照射肺癌D6细胞系 8次 ,每次吸收剂量 6 5 0cGy ,对存活细胞单克隆化 ,采用克隆形成实验测定所得的新细胞亚系D6 R细胞及其亲本的放射敏感性 ,流式细胞术检测它们的细胞周期特征。结果 与亲本D6细胞相比 ,D6 R细胞显示出放射抗性 ,其D0 、Dq及N值增大 ,细胞存活曲线肩区增宽 ,在SF2 水平上 ,D6 R细胞的放射抗性是其亲本细胞D6的 1 6 5倍。D6 R细胞S期比例较其亲本D6细胞明显增高 ,而G2 /M ,G1 期比例则下降。结论 新的细胞亚系D6 R比其亲本对射线更加抗拒 ,并且显示出与亲本不同的细胞周期特征。

小鼠肺腺癌细胞系（LA－795）高、低转移潜能亚系的建立及其形态学比较

利用单细胞克隆化培养技术，对小鼠肺脓癌ＬＡ７９５细胞系进行单细胞克隆化培养，分离出８个亚系，体外培养３５代内生物学特性稳定，反复液氮冻存能复苏。将其中４个亚系细胞在裸鼠体内移植，结果命名为ＬＡ７９５－Ｃ６的细胞亚系较命名为ＬＡ７９５－Ｃ７的细胞亚系具有更大的肺转移能力，表明了母系确实存在转移潜能不同的异质细胞；将高、低转移潜能细胞体外培养，并进行形态学观察，发现高转移潜能细胞比低转移潜能细胞表现为更幼稚，且更具有生长活跃性的特点，说明高转移亚系ＬＡ７９５－Ｃ６和低转移亚系ＬＡ７９５－Ｃ７在体外培养存在着分化程度上的差异，且该肿瘤体内转移能力和体外培养细胞分化程度呈负相关。这提示体外培养的肿瘤细胞其分化程度和体内转移潜能有密切的矢系。

胃腺癌细胞侵袭亚系的筛选及母、亚两系生物学特性的比较

应用人羊膜成功地筛选了侵袭性较强的胃腺癌细胞亚系，并比较了母、亚两系某些生物学特性。实验证明亚系细胞体外移动性和体内移植瘤的生长率及转移率均明显高于母系细胞。结论：（１）羊膜基底膜可作为筛选某些肿瘤细胞亚系的有效侵袭滤膜；（２）胃腺癌细胞系具有肿瘤异质性；（３）筛选的亚系细胞较母系细胞具有明显的高侵袭力和高转移力。本文对肿瘤异质性与侵袭机理进行了探讨。

经典型霍奇金淋巴瘤中大细胞与小细胞亚系生物学特性比较

目的:探究经典型霍奇金淋巴瘤细胞系L428中大小细胞亚系生物学特性差异及其意义。方法:应用有限稀释法分离出L428中大小细胞亚系并进行传代培养,分别命名为L428-big和L428-small细胞。免疫细胞化学实验检测L428中大小细胞亚系CD15和CD30表达差异,MTT实验检测L428中大小细胞亚系增殖能力的差异;流式细胞术检测L428中大小细胞亚系的凋亡差异。结果:成功分离出L428细胞株中大小细胞亚系并进行传代培养;免疫组化显示L428-big细胞的CD15及CD30表达明显强于L428-small细胞;MTT实验显示,L428-big细胞和L428-small细胞之间增殖能力差异有统计学意义,F=565.273,P<0.001,L428-small细胞增殖能力高于L428-big细胞,P<0.001;流式细胞术显示,L428-big细胞的凋亡率为(3.3±0.1)%,明显多于L428-small细胞(0.4±0.1)%,P<0.001。结论:L428-small细胞增殖能力强,凋亡少,为经典型霍奇金淋巴瘤细胞起源的进一步研究提供一定的实验基础。