基于细胞色素b序列差异的细胞种属鉴别及种属间细胞交叉污染的快速检测方法

目的:建立一种优于传统方法的、简单快速和灵敏度高的细胞种属鉴别及种属间细胞交叉污染的PCR检测方法。方法:以细胞色素b(cytochrome b)作为研究内容,设计并优化针对10种不同动物种属的引物,进行单种属引物和混合种属引物PCR反应的比较研究。结果:本文设计出可通过混合引物单PCR方式高效、敏感地检测10种常见动物种属细胞,并有效判断种属间细胞交叉污染的PCR检测方法。结论:本方法明显优于传统的细胞种属鉴定及种属间细胞交叉污染的方法,能显著提高对细胞资源库细胞、生产用细胞基质及治疗性细胞产品的质控能力。

STR分型法鉴定人SW-13、293T及AGS细胞系种内及种间污染

目的检测研究所使用的人肾上腺皮质癌细胞SW-13、人胚肾细胞293T及人胃癌细胞AGS 3种细胞系污染情况,并探索短串联重复序列(short tandem repeat,STR)分型方法检测人类细胞系污染的可靠性。方法人类基因组上的微卫星位点携带着大量STR,每个STR核心序列的重复次数随个体不同存在差异,作为一种DNA标记使得细胞系在DNA水平上具有个性化。通过荧光聚合酶链式反应体系扩增STR位点,检测的数据与DSMZ细胞库进行匹配以对细胞系进行鉴别。结果比对得出SW-13基本匹配,其中20个STR基因位点中只有TH01位点的两个等位基因重复数为7和8,与DSMZ细胞库中此等位基因重复数7和7有差异,其余均一致在可接受范围内。细胞系293T、AGS等位基因的重复数与DSMZ细胞库完全匹配。结论 STR分型检测方法被ATCC、DSMZ等权威机构推崇,且此研究采用20位点检测法涵盖ATCC-9位点及中检院-16位点检测法,该法权威可靠。本所3种细胞系遗传稳定,均无种内或种间污染。

细胞系错误识别与交叉污染及其检测方法

细胞系错误识别和交叉污染对科学研究及临床应用等造成了严重危害,并已成为长期困扰国内外学者的问题。细胞交叉污染是指细胞在分离、培养和使用过程中,混入了来源于种属内或种属外的非目标细胞而造成的污染。细胞系错误识别和交叉污染的检测是确保体外培养过程中目标细胞及其产品质量的关键控制环节,是细胞治疗相关临床研究和细胞产品审批的必检项目。但目前仍缺乏一套可靠的细胞系错误识别和交叉污染的检测体系及评价标准。该文从形态学特征、染色体核型分析、同工酶谱分析、人类白细胞抗原分型、基于DNA的鉴定和细胞专属特性分析等方面,系统地分析总结了体外培养中错误识别和交叉污染的细胞系的鉴定方法研究现状及存在的问题,以期为科研用和治疗用细胞及其相关产品质控体系的建立提供参考。

二代测序技术在用于脊髓灰质炎病毒分离的细胞系交叉污染鉴定中的应用

目的应用二代测序(Next generation sequencing,NGS)技术鉴定用于脊髓灰质炎(脊灰)病毒分离的RD和L20B细胞种属来源,以判断细胞间是否存在交叉污染。方法选用新复苏的RD和L20B细胞作为对照组,传代多代的RD和L20B细胞作为实验组,观察在接种两种非脊灰肠道病毒株后的细胞形态和细胞病变(Cytopathic effect,CPE),检测细胞的支原体和细胞对脊灰病毒的敏感性;利用NGS技术对细胞进行高通量测序和比对,以鉴定细胞的种属来源、识别交叉污染。结果与对照组RD细胞相比,实验组RD细胞形态出现膨胀、条柱形等变化,实验组L20B细胞形态相似;接种两种非脊灰肠道病毒毒株后,对照组RD细胞发生CPE而L20B细胞未发生CPE,实验组两种细胞均发生CPE。对照组和实验组两种细胞支原体检测均阴性,且敏感性结果均处于正常范围内。经NGS技术鉴定,实验组RD和L20B细胞均属于人源细胞,L20B细胞的种属来源与预期不符。结论实验组RD和L20B细胞间存在交叉污染;NGS技术能够快速、准确、全面地鉴定细胞系的种属来源,及时识别细胞间交叉污染,可进一步推动脊灰病毒分离用细胞系质量控制工作。