靶向人白细胞介素17受体C的特异性shRNA表达载体的构建及鉴定

目的构建同时靶向人白细胞介素17受体C(IL-17RC)的小发夹状干扰RNA(shRNA)真核表达载体。方法设计并合成针对人IL-17RCcDNA的寡聚DNA引物,退火并连接至载体pGenesil-1,将重组质粒转染至293T细胞,提取转染或未转染293T细胞的mRNA,逆转录成cDNA,经荧光定量PCR检测细胞IL-17RC基因表达水平,最后用流式细胞仪检测转染阳性细胞表面IL-17RC的表达。结果1.限制性酶切和测序结果表明成功构建了人IL-17RC的特异性shRNA真核表达载体shRNA-IL-17RC。2.流式细胞仪显示pGenesi1-IL-17RC的转染效率大于40%,并能显著抑制细胞IL-17RC的表达。结论shRNA-IL-17RC的构建为深入研究IL-17在骨关节炎(OA)中的功能以及针对细胞因子受体设计新的治疗OA的药物奠定基础。

Runx2和白细胞介素-17受体C基因多态性与后纵韧带骨化症发病风险和预后的相关性

目的探讨Runx2和白细胞介素-17受体C(interleukin-17 receptor C, IL-17RC)基因多态性与后纵韧带骨化症(ossification of posterior longitudinal ligament, OPLL)发病风险和预后的关系。方法经手术治疗的OPLL患者74例为OPLL组,体检健康者74例为对照组,采用基因测序法检测2组Runx2和IL-17RC基因多态性,比较2组Runx2和IL-17RC基因不同位点基因型和等位基因分布频率;采用多因素logistic回归分析Runx2和IL-17RC基因多态性对发生OPLL的影响;术前和术后12个月,OPLL组患者采用日本骨科学会(Japanese Orthopaedic Association, JOA)评分评估颈椎功能,比较OPLL组患者术后12个月Runx2和IL-17RC基因不同基因型JOA评分改善率。结果 2组Runx2基因rs16873379、rs1321075、rs1406846基因型分布频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。2组Runx2基因rs967588、rs16873379、rs1406846和IL-17RC基因rs199772854、rs708567等位基因分布频率比较差异有统计学意义(P<0.05)。IL-17RC基因rs199772854位点A等位基因是OPLL发生的独立保护因素(OR=0.199,95%CI:0.065~0.606,P=0.004),Runx2基因rs1406846位点A等位基因是OPLL发生的独立危险因素(OR=7.145,95%CI:2.514~20.305,P<0.001)。术后12个月,Runx2基因rs16873379位点TT基因型JOA改善率[(61.73±9.04)%]高于CC型[(52.41±6.72)%](P<0.05);rs6908650位点AA基因型JOA改善率[(66.83±7.73)%]高于GG型[(57.42±6.77)%](P<0.05);rs1406846位点TT基因型JOA改善率[(66.08±7.03)%]高于AT型[(57.19±7.53)%]和AA型[(54.19±4.45)%],AT型高于AA型(P<0.05)。IL-17RC基因rs708567位点GG基因型JOA改善率[(62.57±8.39)%]高于GA型[(58.62±7.33)%]和AA型[(54.52±6.17)%],GA型高于AA型(P<0.05)。结论 Runx2及IL-17RC基因多态性与OPLL发病风险及预后具有明显相关性。