TWEAK调控巨噬细胞外泌体中miRNA-7的表达抑制卵巢癌细胞侵袭和迁移的研究

目的·检测TWEAK刺激后,巨噬细胞及其分泌的外泌体中miRNA-7的表达;探索TWEAK刺激后,巨噬细胞源性外泌体抑制上皮性卵巢癌细胞(HO8910-PM)侵袭和迁移的机制。方法·收集TWEAK刺激前后的巨噬细胞源性外泌体,并将其与HO8910-PM细胞共培养,real-time PCR检测巨噬细胞、巨噬细胞源性外泌体和共培养后HO8910-PM细胞中miRNA-7的表达;Western blotting检测共培养后HO8910-PM细胞中EGFR/AKT/ERK1/2信号通路的表达;Antagomi R-7处理降低巨噬细胞中miRNA-7表达后,收集TWEAK刺激前后的外泌体并进行transwell侵袭和迁移实验,观察HO8910-PM细胞侵袭和迁移能力的变化。结果·TWEAK刺激后,巨噬细胞内及其外泌体中miRNA-7的表达升高,并可上调HO8910-PM细胞中miRNA-7的表达,下调EGFR信号通路的表达。预先下调巨噬细胞中miRNA-7的表达后,巨噬细胞源性外泌体和共培养后HO8910-PM细胞中miRNA-7的表达降低,TWEAK刺激的巨噬细胞源性外泌体原先抑制HO8910-PM细胞转移的作用得到恢复。结论·miRNA-7在TWEAK刺激巨噬细胞分泌的外泌体中发挥重要作用,可通过抑制上皮性卵巢癌细胞中EGFR信号通路抑制其侵袭和迁移。

NF-κB信号通路参与miR-183抑制结肠癌细胞侵袭和迁移性研究

目的探讨miR-183抑制结肠癌细胞SW620侵袭和迁移能力的作用是否需要NF-κB信号通路的参与性研究。方法采用脂质体转染细胞,高表达或沉默miR-183基因和Ezrin基因,用Western blot分析细胞核内p65蛋白表达的改变,用Transwell实验观察细胞侵袭和迁移能力的变化。结果在结肠癌SW620细胞中,高表达miR-183的靶基因Ezrin蛋白的表达,细胞核内NF-κB亚基p65蛋白的表达上调;抑制Ezrin蛋白的表达,能够抑制p65的表达。高表达miR-183能够抑制细胞核内p65蛋白的表达;抑制miR-183的表达,细胞核内p65的表达上调。p65蛋白的细胞核内定位特异性抑制剂PDTC能够抑制由于miR-183降低或Ezrin蛋白表达上调引起的细胞侵袭和迁移能力改变。结论 miR-183抑制结肠癌细胞SW620侵袭和迁移能力的作用需要NF-κB信号通路的参与。

MicroRNA-25在喉鳞癌细胞侵袭转移中的作用探讨

背景导致喉癌患者死亡的主要原因是复发和转移,喉癌侵袭转移的分子机制已成为当前研究的重点。目的研究microRNA-25(miR-25)在喉鳞癌Hep-2细胞体外侵袭转移中的调控作用。方法应用微小RNA过表达载体(mimic)和抑制载体(inhibitor)转染Hep-2细胞,分别增加和抑制Hep-2细胞中miR-25的表达,Transwell法和细胞划痕实验检测Hep-2细胞侵袭迁移能力的变化,MTT法检测细胞增殖能力变化,绘制细胞生长曲线。结果上调Hep-2细胞中miR-25表达后,Transwell实验和细胞划痕实验显示Hep-2细胞的体外侵袭和迁移能力显著低于正常对照组(P<0.01),MTT检测结果显示过表达miR-25组Hep-2细胞增殖能力亦显著降低。而抑制miR-25表达后,Hep-2细胞体外侵袭、迁移和增殖能力均显著增强。结论miR-25的表达量显著影响喉鳞癌Hep-2细胞体外侵袭、迁移和增殖能力,提示miR-25可能是抑制喉鳞癌转移的一个有效靶点。

基因沉默RhoC联合雷帕霉素对肝癌细胞侵袭和转移影响的实验研究

目的:通过基因沉默RhoC联合雷帕霉素阻断mTOR通路对肝癌细胞侵袭和转移影响的实验研究,证明二者联合能显著抑制肝癌侵袭、迁移,寻找治疗肝癌的新分子靶点。方法:RhoC-siRNA质粒转染BEL7402细胞,荧光显微镜检测转染效率;Western blot方法鉴定RhoC的基因沉默效果。实验分为6组:空白对照BEL7402组、阴性对照Scramble-siRNA组、阴性对照Scramble-siRNA+Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组、RhoC-siRNA+Rapa组。采用半定量RT-PCR法检测侵袭相关因子MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、P27RF-Rho以及凋亡相关因子Survivin表达;免疫细胞化学法检测MMP2、MMP9的表达;采用划痕实验,细胞黏附实验,Transwell小室检测细胞的侵袭转移。结果:Scramble-siRNA+Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组MMP2、MMP9、TIMP1、TIMP2、p27RF-Rho、Survivin和空白对照BEL7402组、阴性对照Scramble-siRNA组比较表达降低(P<0.05),RhoC-siRNA联合Rapa组的表达显著降低(P<0.01);Scramble-siRNA+Rapa组、Rapa组、RhoC-siRNA组抑制肝癌细胞侵袭和迁移(P<0.05),而RhoC-siRNA联合Rapa组显著抑制肝癌细胞的侵袭迁移(P<0.01)。结论:RhoC-siRNA联合雷帕霉素能显著抑制肝癌细胞的迁移、侵袭,是治疗肝癌的良好分子靶点。

LNX1通过调控TIAM1/ERK信号通路抑制肾透明细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移

目的:探讨泛素链接酶LNX1(ligand of numb-protein X 1)对肾透明细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响及其可能的分子作用机制。方法:利用基因表达谱交互分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库分析LNX1 mRNA在肾透明细胞癌组织中的表达水平,及其与肾透明细胞癌患者预后的相关性。采用慢病毒感染的方法将携带特异性针对LNX1基因的shRNA(shLNX1)转入肾透明细胞癌细胞786-O和ACHN中;采用瞬时转染的方法将重组质粒flag-LNX1转入786-O和ACHN细胞中。分别采用CCK-8实验和细胞集落形成实验检测沉默或过表达LNX1对786-O和ACHN细胞增殖能力的影响,Transwell小室实验检测沉默或过表达LNX1对786-O和ACHN细胞侵袭和迁移能力的影响。采用生物信息学分析法筛选LNX1的下游靶基因,采用蛋白质印迹法检测沉默或过表达LNX1对T淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1(T-lymphoma invasion and metastasis-inducing protein 1,TIAM1)及其下游ERK信号通路中ERK及其磷酸化蛋白表达水平的影响。用蛋白酶体抑制剂MG132处理过表达LNX1的786-O和ACHN细胞,并且蛋白质印迹法检测TIAM1蛋白的表达水平。最后在过表达LNX1的细胞中同时转入重组载体myc-TIAM1,再用蛋白质印迹法、细胞集落形成实验和Transwell小室实验检测ERK信号通路中各蛋白的表达水平,以及同时过表达LNX1和TIAM1对786-O和ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移能力的影响。结果:肾透明细胞癌组织中LNX1 mRNA的表达水平降低(P<0.05),其表达水平与患者的生存时间呈正相关(P<0.001)。成功构建沉默LNX1基因的786-O和ACHN细胞,以及过表达LNX1的786-O和ACHN细胞。沉默LNX1基因后,786-O和ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显增强(P均<0.05);过表达LNX1后,786-O和ACHN细胞的增殖、侵袭和迁移能力明显减弱(P均<0.05)。生物信息学分析发现TIAM1为LNX1的潜在靶蛋白。沉默LNX1基因后,TIAM1和磷酸化ERK(phospho-ERK,p-ERK)蛋白的表达水平明显升高(P均<0.05),而ERK蛋白的表达水平不变;过表达LNX1后,TIAM1和磷酸化ERK蛋白的表达水平明显降低(P均<0.01),而ERK蛋白的表达水平未发生变化。使用蛋白酶体抑制剂MG132处理过表达LNX1的786-O和ACHN细胞后,TIAM1蛋白的表达水平升高(P<0.01和P<0.001)。在过表达LNX1的细胞中转入myc-TIAM1质粒后,p-ERK蛋白的表达水平升高,细胞的增殖、侵袭和迁移能力增强(P均<0.05),而ERK蛋白的表达水平不变。结论:LNX1通过降解TIAM1,进而调节ERK的磷酸化,最终抑制肾透明细胞癌细胞的增殖、侵袭和迁移。

诃子提取物对不同转移性乳腺癌细胞株增殖、凋亡的影响

目的探讨诃子提取物对不同转移性乳腺癌细胞株增殖、凋亡的影响。方法选取不同转移性的乳腺癌细胞株即MCF-7(低转移性乳腺癌细胞)、MDA-MB-231(中转移性乳腺癌细胞)、MDA-MB-435(高转移性乳腺癌细胞)以及人正常乳腺上皮细胞HBL-100为研究对象,将对数生长期的MCF-7、MDA-MB-435、MDA-MB-231、HBL-100细胞分别进行分组,记为对照组(未处理的细胞)、诃子提取物高浓度组(125μg/ml)、诃子提取物中浓度组(93.75μg/ml诃子提取物)、诃子提取物低浓度组(62.5μg/ml诃子提取物)。流式细胞术检测各组细胞凋亡;Transwell实验检测各组细胞侵袭与迁移;MTT法检测各组细胞增殖情况;Western blot检测各组细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)、细胞周期素D1(CyclinD1)蛋白表达情况。结果诃子提取物对HBL-100细胞增殖无显著影响(P>0.05);与对照组相比,诃子提取物低、中、高浓度组乳腺癌细胞的侵袭和迁移数目、细胞增殖率、MMP-2、CyclinD1均显著降低,Bax蛋白表达、细胞凋亡率显著增加(P<0.05)。结论诃子提取物可以诱导不同转移性乳腺癌细胞株凋亡,抑制其增殖、侵袭和迁移。

SIK1作为miR-93新的靶基因抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移

该文探讨了SIK1作为miR-93新的靶基因对前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用。采用重组质粒pcDNA3.1-SIK1上调前列腺癌细胞中SIK1的表达后,利用CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖;利用细胞划痕和Transwell实验检测细胞侵袭和迁移;利用Western blot检测E-cadherin和Vimentin的蛋白表达。采用生物信息学方法预测靶向SIK1 mRNA的3’UTR的miRNAs并进行筛选;双荧光素酶报告实验和Western blot验证miR-93靶向调控SIK1。结果显示,上调SIK1的表达能抑制前列腺癌细胞的增殖、侵袭和迁移,并增加E-cadherin和减少Vimentin蛋白表达;miR-93能够靶向负调控SIK1。总之,SIK1可作为miR-93一个新的靶基因抑制前列腺癌细胞增殖、侵袭和迁移。

葫芦素抗肿瘤作用研究进展

癌症是全球主要的公共卫生问题,中国国家癌症中心的统计数据也表明癌症以逐年提升的发病率和死亡率成为威胁人类健康的重大疾病。癌症的发生发展机制复杂,涉及多阶段、多个基因及多条信号通路的异常,常规的放化疗及新兴的靶向治疗方法是肿瘤治疗的主要方式,但由于其毒副作用和耐药性的产生严重影响了患者的生活质量和持续有效的治疗效果,因此寻找安全有效的抗癌药物是全球关注的焦点。抗肿瘤植物药紫杉醇类、长春碱类、鬼臼素类、人参皂苷和多糖等的研发与应用给肿瘤治疗带来了新的希望。葫芦素是一种来源于中药葫芦科植物的高度氧化的四环三萜类化合物,药理作用广泛且机制复杂,在葫芦素家族中,目前针对葫芦素B,D,E,I抗肿瘤作用研究最多,已有大量研究证实,葫芦素B,D,E,I在治疗消化系统、呼吸系统、生殖系统、血液系统、泌尿系统等肿瘤疾病中发挥了重要作用,能够显著抑制肿瘤细胞增殖,而且在阻滞细胞周期、诱导细胞凋亡和自噬性死亡、抑制细胞迁移和侵袭、抑制肿瘤血管生成、调节活性氧的水平、调节免疫等方面作用显著,有望开发成为抗癌新药。基于当前国内外针对葫芦素抗多种肿瘤的作用及机制研究成果,笔者对葫芦素抗肿瘤作用研究进展进行了全方面综述,以期为葫芦素类抗肿瘤药物新药研发提供参考。

更正启事

《中国肿瘤》2019年第28卷第2期刊登的刘浩等作者的论著“miR-302c在胃癌中表达及对胃癌细胞侵袭和迁移影响的机制研究”,文中图3(Figure 3)和图6(Figure 6)有误,现予以更正,请以此为准。