卡培他滨联合顺铂对晚期胃癌患者疗效及胃癌细胞侵袭转移的影响

目的:探讨卡培他滨联合顺铂对晚期胃癌患者疗效及胃癌细胞侵袭转移的影响。方法:94例晚期胃癌患者随机分为对照组(47例)和观察组(47例)。对照组患者给予多西紫杉醇注射液65~75 mg/m^2,d_1,连续静脉滴注2 h+注射用顺铂15~20mg/m^2,d_(1-5),避光连续静脉滴注2 h。观察组患者给予卡培他滨片1 000 mg/m^2,口服,每日2次+注射用顺铂(用法用量同对照组)。两组均以3周为1个周期,共3个周期。观察两组患者的临床疗效,治疗前后的基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9水平,随访6、12个月生存率及不良反应发生情况。结果:两组患者总有效率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。观察组患者1~2级肝功能异常、血小板下降、恶心呕吐发生率均显著低于对照组,6、12个月生存率均显著高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组患者MMP-2、MMP-9水平比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。治疗后,两组患者MMP-2、MMP-9水平均显著低于同组治疗前,且观察组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:卡培他滨联合顺铂治疗晚期胃癌的疗效与多西紫杉醇联合顺铂相当,但在降低MMP-2、MMP-9及安全性方面优于多西紫杉醇联合顺铂。

Shh信号通路对结肠癌细胞侵袭转移的影响

目的探讨激活Shh信号通路对结肠癌细胞侵袭转移的影响。方法常规培养结肠癌细胞株HT-29细胞,分设对照组(培养液中加入PBS)、信号通路活化组(培养液中加入重组Shh配体,实验组)、信号通路阻断组(培养液中加入Shh信号通路抑制剂KADD-cyclopamine);采用MTT实验、Transwell侵袭小室法,建立人结肠癌术后局部复发裸鼠动物模型、人结肠癌术后肝转移动物模型,分别经尾静脉注射PBS、Shh配体和KADD-cyclopamine,分析Shh配体及Shh信号通路抑制剂KADD-cyclopamine干预Shh信号通路对结肠癌术后局部复发和肝转移的影响。结果 Shh配体激活Shh信号通路后检测到结肠癌细胞增殖、迁移及侵袭能力较对照组得到明显促进、增强且变化有统计学意义(P<0.05)。信号活化组与对照组和信号阻断组比较,裸鼠结肠癌术后复发率(50%比30%、30%,P<0.05)、肝转移率(100%比30%、23%,P<0.05)、平均肝转移瘤数目[(23.4±8.8)、(17.6±8.6)、(38.6±3.6)个,P<0.05]均显著升高。结论 Shh信号通路参与了结肠癌转移过程,激活Shh信号通路能够促进结肠癌术后局部复发和肝转移;抑制Shh信号通路能够降低结肠癌术后局部复发和肝转移。

T淋巴细胞侵袭转移诱导蛋白1在小鼠子宫内膜基质细胞-胚泡共培养体系中对胚泡黏附的影响

目的：检测不同浓度T淋巴细胞侵袭转移诱导蛋白1（Tiam1）抗体下，小鼠着床窗子宫内膜基质细胞内的Tiam1蛋白表达及其对基质细胞-胚泡共培养体系中胚泡黏附的影响，探讨Tiara1对小鼠胚胎着床的影响。方法：提取着床窗小鼠子宫内膜基质细胞并构建基质细胞-胚泡共培养体系；分别用免疫细胞化学和免疫印迹法检测不同浓度抗Tiam1抗体时着床窗基质细胞Tiam1蛋白的表达及其对胚泡黏附的影响。结果：抗体干预后着床窗基质细胞内的Tiam1蛋白表达水平降低；在不同抗体浓度下胚泡黏附率有差异。结论：随Tiam1抗体浓度增加，着床窗小鼠子宫内膜基质细胞Tiam1蛋白表达量及胚泡黏附率降低。表明Tiam1可能在胚泡植入过程起重要的作用。

雷帕霉素对宫颈癌患者HeLa细胞侵袭转移抑制作用的实验

目的:研究雷帕霉素对宫颈癌患者HeLa细胞侵袭转移抑制作用。方法:取宫颈癌患者HeLa细胞标本进行实验,空白组不加雷帕霉素,雷帕霉素组加入雷帕霉素30 nmol/L,分别培养48 h后,采用MTT法检测细胞活力(计算细胞生长抑制率)、Transwell法检测细胞迁移侵袭能力,以及采用Western blot法检测蛋白激酶B(Akt)和兔抗雷帕霉素靶蛋白(mTOR)的磷酸化水平以及兔抗基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、兔抗基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、波形蛋白(Vimentin)与钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平。结果:雷帕霉素组患者宫颈癌HeLa细胞生长抑制率、E-cadherin表达率明显多于对照组(P<0.05),且宫颈癌HeLa细胞迁移和侵袭数量、Akt与mTOR磷酸化水平、MMP-2、MMP-9与Vimentin表达明显少于对照组(P<0.05)。结论:雷帕霉素能抑制宫颈癌HeLa细胞的侵袭转移,主要是通过Akt/mTOR信号通路发挥作用。

宫颈癌组织中DACT2启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的关联

目的:探究宫颈癌组织中β-环连蛋白抑制基因2(DACT2)启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的相关性。方法:选择2020年1月—2022年3月在南阳市第一人民医院就诊的60例宫颈癌患者作为观察组,再选择同期60例健康体检者作为对照组,采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和实时荧光定量RT-PCR检测DACT2 mRNA的表达,并对DACT2进行免疫组化观察;通过甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和亚硫酸氢盐基因组测序(BGS)分析DACT甲基化水平。采用Pearson检验法,分析DACT2启动子甲基化与宫颈癌细胞侵袭和转移的关联性。结果:对比宫颈癌患者的病理特征中分期、有无细胞转移以及宫颈浸润深度患者所占百分比,差异有统计学意义(t=4.747、5.368、0.834,P<0.05),而年龄和肿瘤大小比较,差异无统计学意义(t=1.004、0.895,P>0.05);宫颈癌组织、癌旁组织和正常组织中DACT2去甲基化发生率分别为45.00%、6.67%和5.00%,差异有统计学意义(χ^(2)=26.454,P<0.05);宫颈癌甲基化组DACT2 mRNA和蛋白表达水平显著低于宫颈癌非甲基化组,差异有统计学意义(t=11.332、8.543,P<0.05);相关性分析结果表明,DACT2启动子甲基化是引发宫颈癌细胞侵袭和转移的因素,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:宫颈癌细胞侵袭和转移主要影响因素就是DACT2启动子甲基化,且DACT2启动子甲基化率越高,细胞侵袭和转移程度就越高。因此临床应密切监测患者DACT2启动子甲基化情况,有助于优化宫颈癌患者的治疗方案。

可调控型反义基质金属蛋白酶9表达抑制人黑色素瘤细胞侵袭转移表型的研究

目的 探讨基质金属蛋白酶 (MMP) 9与肿瘤转移的相关性。方法 利用基因重组技术构建反义MMP 9cDNA四环素可调控型表达载体 ,用脂质体法转染反义MMP 9至转移性人黑色素瘤细胞株WM4 5 1(高表达MMP 9)。检测转染后细胞MMP 9表达水平的改变以及体外生长、侵袭、裸鼠体内成瘤及自发转移能力的变化。结果 转染反义基因后 ,WM4 5 1细胞MMP 9的表达及活性明显下降 ,同时MMP 2的表达也受到一定抑制 ,细胞生长速度、体外侵袭能力及裸鼠体内成瘤性及自发转移能力均受到一定程度抑制 ;运用四环素可以抑制四环素负调控逆转录病毒载体上的外源基因的表达。结论 反义MMP 9基因下调MMP 9的表达 ,可使人黑色素细胞转移能力受到一定程度的抑制 ,说明MMP 9在人黑色素瘤细胞转移过程中起重要作用。同时 。

长链非编码RNA-UFC1通过GSK-3β/β-catenin信号轴促进肝癌细胞的侵袭和转移

目的探讨长链非编码RNA-UFC1在肝癌侵袭和转移中的作用及机制。方法应用lincRNA-UFC1慢病毒载体转染人肝癌细胞株Huh7构建lincRNA-UFC1过表达组和对照组;应用lincRNA-UFC1干扰载体转染人肝癌细胞株BEL-7402构建lincRNA-UFC1干扰组和干扰对照组(scramble),通过实时定量PCR实验分析两种肝癌细胞中lincRNA-UFC1的表达水平。Transwell及划痕实验检测lincRNA-UFC1过表达组及干扰组相比对照组侵袭迁移能力的变化。Western blot检测lincRNAUFC1过表达组及干扰组相比对照组中GSK-3β/β-catenin蛋白的表达变化。利用GSK-3β/β-catenin信号通路抑制剂XAV939阻断后,观察Transwell及划痕实验中lincRNA-UFC1过表达对肝癌细胞侵袭迁移能力的影响。结果在肝细胞癌中,过表达lincRNA-UFC1相较于对照组,肝癌细胞的侵袭转移能力明显增加(P<0.001),而沉默lincRNA-UFC1的表达相较于scramble组,肝癌细胞侵袭转移能力明显减弱(P<0.001)。Western blot结果显示,过表达lincRNA-UFC1与对照组相比较,侵袭转移相关蛋白β-catenin和p-GSK-3β表达明显上调(P<0.001),而lincRNA-UFC1沉默表达后,结果相反。利用GSK-3β/β-catenin信号通路抑制剂XAV939处理肝癌细胞可以逆转lincRNA-UFC1促进肝癌细胞侵袭转移的功能(P<0.001)。结论在肝细胞癌中lincRNA-UFC1通过上调磷酸化GSK-3β及β-catenin促进肝癌细胞侵袭转移。

基质硬度与肝癌细胞增殖及侵袭转移的关系

目前肝细胞肝癌的细胞增殖及侵袭转移机制尚未完全阐明,治疗方面也缺乏令人满意的有效方法。近年来,随着模拟基质硬度的细胞培养平台的建立和逐步改进,基质硬度等生物力学因素及其影响的研究逐渐受到重视。细胞外基质硬度的改变,可通过一系列分子机制调控细胞行为,促进肝癌细胞增殖和增强其侵袭转移能力,本文对其相关机制的研究现状进行综述,希望为肝癌治疗新靶点和新策略的开发提供线索。

蝙蝠葛活性成分抑制胃癌SGC-7901细胞转移侵袭作用

目的探讨蝙蝠葛活性成分对人胃癌SGC-7901细胞的运动能力及其机制。方法采用划痕试验、transwell迁移实验、transwell侵袭实验观察蝙蝠葛活性成分对人胃癌SGC-7901细胞的运动能力、降低SGC-7901细胞转移侵袭作用的影响。结果与对照组相比较,蝙蝠葛活性成分处理之后,细胞修复该划痕的能力减低。蝙蝠葛活性成分作用之后人胃癌SGC-7901细胞通过聚碳酸酯膜的迁移运动能力下降,并且与对照组相比其差异具有统计学意义(P<0.05)。蝙蝠葛活性成分作用之后,人胃癌SGC-7901细胞通过涂抹matrigel胶的聚碳酸酯膜的能力下降,并且与对照组相比其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论蝙蝠葛活性成分能够抑制胃癌SG07901细胞的运动能力、迁移能力以及侵袭能力。

miR-139-5p靶向转化生长因子-β1抑制肝癌细胞侵袭、转移的机制

目的:探究miR-139-5p靶向转化生长因子-β1(TGF-β1)抑制肝癌细胞侵袭、转移的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测30例患者肝癌组织和癌旁组织中RmiR-139-5P的表达情况,采用免疫组化技术检测其肝癌组织和癌旁组织中TGF-β1的表达情况,并对检测的结果进行分析,总结miR-139-5p靶向TGF-β1抑制肝癌细胞侵袭、转移的机制。结果:30例患者肝癌组织中TGF-β1的阳性表达率为83.33%,其癌旁组织中TGF-β1的阳性表达率为13.33%,二者相比差异有统计学意义(P<0.05)。miR-139-5p在癌旁组织中呈高表达,在肝癌组织中呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05)。TGF-β1在肝癌组织中呈高表达,在癌旁组织中呈低表达,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-139-5p可能通过下调TGF-β1的表达来抑制肝癌细胞的侵袭、转移。

细胞因子诱导的杀伤细胞对人胃癌高侵袭腹膜转移细胞株体内外杀瘤过程中多种细胞因子的影响

目的:观察细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK细胞)自分泌细胞因子及其体内外杀瘤过程中多种细胞因子含量的变化,探讨CIK细胞对抗肿瘤的作用机制。方法:取正常人的外周肝素抗凝血分离外周血单个核细胞(PBMC),体外诱导成CIK细胞;同时建立人胃癌高侵袭转移瘤(OCUM-2MD3)细胞裸鼠腹膜移植模型。检测CIK细胞中白介素-2(IL-2)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFN-γ)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)等细胞因子的分泌及其对OCUM-2MD3细胞株体内外杀瘤时上述细胞因子的变化。结果:①CIK细胞培养过程中其上清液IL-2、TNF-α、INF-γ、GM-CSF含量随时间增长而升高,至2周左右达最高峰,随后下降;②体外培养CIK细胞以E﹕T=25﹕1对OCUM-2MD3肿瘤细胞作用后,IL-2含量减低明显(P<0.05),TNF-α、GM-CSF含量均降低,INF-γ含量升高;③体内抗瘤实验结果表明,CIK治疗组血清中IL-2、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF的含量均较生理盐水对照组显著增高(P<0.05)。结论:CIK细胞分泌的细胞因子在2周左右具有最大生物学活性;CIK细胞可能通过其自身分泌IL-2、TNF-α、IFN-γ、GM-CSF等细胞因子参与抗肿瘤作用。

Tiam-1基因在人大肠癌侵袭转移中的作用

目的分析T淋巴瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam-1)基因对人体大肠癌侵袭转移产生的作用。方法以裸鼠为试验品,将人的大肠癌细胞株SW480/EGFP+和SW480/EGFP+/Tiam-1-使用绿色的增强荧光蛋白(EGFP)进行标记,通过静脉注射与结肠原位接种。并设立细胞株侵袭转移动物模型。结果经过对裸鼠的细胞进行鉴定,SW480/EGFP+和SW480/EGFP+/Tiam-1-均发现有绿色的EGFP表达,Tiam-1的基因干扰率为70%。在体外增值能力的比较中,SW480/EGFP+和SW480/EGFP+/Tiam-1-无显著差异(P>0.05);在体内增殖能力的比较中,SW480/EGFP+/Tiam-1-在细胞中的侵袭转移率比SW480/EGFP+明显降低(P<0.05)。结论 Tiam-1基因对大肠癌的侵袭和转移可能具有很强的抑制作用,为大肠癌的临床治疗提供了重要的依据。

大肠癌裸鼠移植瘤实验模型的建立及T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1封闭载体的治疗作用

目的通过建立大肠癌SW620细胞裸鼠皮下移植瘤模型，观察T细胞淋巴瘤侵袭和转移诱导蛋白1（Tiaml）封闭载体在动物体内的治疗作用。方法构建编码一条短发夹RNA的Tiaml质粒表达封闭载体，并用之转染SW620细胞；应用Hoechst33342荧光染色技术观察细胞形态学变化。将皮下接种SW620细胞的裸鼠分为3组，每组8只，在接种后第2周分别瘤内注射生理盐水（对照组）、HK错配链（HK组）和Tiaml封闭载体（Tiaml组）。第16天处死各组裸鼠，取出移植瘤移重。结果通过DNA测序证实封闭载体构建成功。SW620细胞经Tiaml封闭载体转染后，细胞核可见凋亡小体。对照组平均移植瘤重量（2．84±0．27）g，HK组（2．89±0．18）g，Tiaml组（1．47±0．20）g，Tiaml组与其他2组比较差异有统计学意义（P〈0．01），而HK组和对照组之间比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论所构建的Tiaml封闭载体能有效抑制大肠癌裸鼠皮下移植瘤生长。

miR-4295靶向结合PTEN促进EMT和鼻咽癌细胞的侵袭

目的 探讨miR-4295在鼻咽癌细胞侵袭、转移过程中的作用及相关的分子机制.方法 首先通过PCR检测鼻咽癌细胞系中miR-4295的表达,通过用重组逆转录病毒介导建立稳定高表达miR-4295的鼻咽癌细胞株5-8F/miR-4295.分别应用Transwell侵袭实验、划痕损伤修复实验及三维培养实验检测过表达miR-4295后细胞株5-8F的迁移、侵袭能力;WB和QPCR方法检测E-Cadherin、Fibronectin、Vimentin在5-8F/miR-4295及5-8F/vector细胞中蛋白及miRNA的表达水平;荧光素酶活性检测miR-4295与PTEN靶向结合情况.结果 miR-4295在鼻咽癌细胞系中高表达,通过Transwell侵袭实验、划痕损伤修复实验、三维培养实验均显示过表达miR-4295后5-8F细胞的体外迁移及侵袭能力明显增强;WB及QPCR结果显示：过表达miR-4295后,5-8F细胞上皮细胞分子标志物E-Cadherin表达下调,间质细胞分子标志物Fibronectin、Vimentin表达上调;过表达miR-4295后PTEN蛋白表达抑制荧光素酶活性降低.结论 miR-4295靶向调节PTEN蛋白促进上皮细胞间质化的过程增强鼻咽癌细胞的转移及侵袭.

白花蛇舌草总黄酮通过下调NOX4表达对前列腺癌细胞侵袭、迁移、EMT的影响

目的研究白花蛇舌草总黄酮对前列腺癌pc-3细胞侵袭和转移的影响并探讨其分子机制。方法本研究于2019年3—10月在枣庄矿业集团中心医院实验室进行。分别以0.1 g/L、0.25 g/L、0.5 g/L浓度的白花蛇舌草总黄酮,10μmol/L尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)的抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(DPI)(阳性对照)作用于体外培养的前列腺癌pc-3细胞,细胞计数试剂(CCK-8)法分别在24 h、48 h后检测pc-3细胞增殖情况,筛选合适药物作用时间;以Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测白花蛇舌草总黄酮对pc-3细胞侵袭迁移能力的影响;采用免疫印记(WB)法检测上皮间质转化(EMT)标志蛋白钙黏蛋白E(E-cadherin)、波形纤维蛋白(Vimentin)和NOX4及两面神激酶2(JAK2)/信号转导及转录活化因子3(STAT3)信号通路相关蛋白的表达。结果与空白对照组相比,白花蛇舌草总黄酮和DPI都能在24h、48h抑制其细胞活力(24h:(92.6±1.62)%比(100.0±1.31)%、(76.9±1.54)%比(100.0±1.31)%、(63.9±1.64)%比(100.0±1.31)%、(61.3±1.44)%比(100.0±1.31)%),差异有统计学意义(P<0.05),且白花蛇舌草总黄酮各浓度之间有浓度依赖性,白花蛇舌草总黄酮高浓度组与DPI组相比,差异无统计学意义(P>0.05),根据CCK-8实验结果选择药物作用pc-3细胞16h继续后续实验;与空白对照组相比,白花蛇舌草总黄酮各浓度和DPI处理pc-3细胞后,pc-3细胞侵袭迁移能力[侵袭(120.32±18.51)个比(174.81±20.13)个、(71.60±10.12)个比(174.81±20.13)个、(32.08±5.17)个比(174.81±20.13)个、(38.13±8.32)个比(174.81±20.13)个;迁移(830.24±80.16)个比(1241.78±120.12)个、(510.23±61.34)个比(1241.78±120.12)个、(280.29±30.18)个比(1241.78±120.12)个、(298.91±40.31)个比(1241.78±120.12)个]降低,E-cadherin蛋白表达[(0.83±0.18)比(0.41±0.12)、(1.26±0.16)比(0.41±0.12)、(2.08±0.19)比(0.41±0.12)、(2.11±0.13)比(0.41±0.12)]升高,Vimentin、NOX4蛋白表达[(0.90±0.18)比(1.21±0.11)、(0.46±0.13)比(1.21±0.11)、(0.28±0.20)比(1.21±0.11)、(0.21±0.23)比(1.21±0.11)]和JAK2/STAT3信号通路相关蛋白p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3降低,差异有统计学意义(P<0.05),且白花蛇舌草总黄酮各浓度之间有浓度依赖性,白花蛇舌草总黄酮高浓度组与DPI组相比,差异无统计学意义(P>0.05)。结论白花蛇舌草总黄酮能降低前列腺癌pc-3细胞侵袭转移能力,可能是通过下调NOX4表达实现的。

细胞迁移相关蛋白酶的研究进展

蛋白酶在胚胎发育、免疫防御、损伤修复、血管新生及肿瘤转移等相关细胞迁移过程中发挥关键作用.近年,蛋白酶影响肿瘤细胞侵袭、迁移的机制研究渐成热点,但肿瘤细胞免疫逃逸、增生、迁移、侵袭、异位定植等机制仍不明确,因此对相关蛋白酶的功能和作用机制的研究愈显重要.本文从蛋白酶的正常生理功能入手,综述肿瘤细胞迁移中相关蛋白酶的研究进展,以期为靶向肿瘤浸润和迁移过程的蛋白酶抑制剂类新药筛选和研发提供线索和新思路.

癌细胞体外实验模型及成型技术现状和展望

传统的癌症研究是通过观察实验小白鼠的活体组织切片了解肿瘤的形成及癌症的各阶段发展情况,相比于活体实验,癌细胞的体外实验因为可以灵活地操控实验变量和实时观测癌细胞生长和发育的特点从而得以快速发展.但进一步的研究发现,在诸如培养皿二维环境中培养的细胞的行为在很大程度上与其实际所处的三维环境中的细胞行为有着巨大的差异.因此借助于微加工和微流体技术以及近年来蓬勃发展的生物3D打印技术、飞秒激光直写技术和水凝胶的紫外光固化等技术,越来越多的癌细胞体外三维实验模型得以制造并用于癌症的研究.但同时,现有的技术也面临着精度与速度的矛盾和模型材料的生物相容性等问题.本文讨论了二维及三维癌细胞体外侵袭转移实验的模型及制造技术的优缺点,简要介绍了最新的研究进展,分析提出了未来几年三维实验模型成型技术的发展方向,为相关研究提供新的实验思路.

NK4基因重组慢病毒载体的构建及在肝癌细胞中的表达

目的构建共表达人NK4基因和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因的重组慢病毒载体,转染人高侵袭转移肝癌细胞LM3(HCCLM3),观察其转染效率及表达情况。方法采用DNA重组技术,将NK4基因克隆至带EGFP的慢病毒表达载体pLenti6.3-内部核糖体进入位点序列(IRES)-EGFP中,并用脂质体介导法将慢病毒包装系统和带NK4基因的质粒pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP共转染293T细胞,包装慢病毒并测定滴度。以不同感染复数(MOI)的重组慢病毒感染293T细胞,筛选最适MOI,以最适MOI重组慢病毒感染HCCLM3细胞,观察转染效率。Western blot法测定细胞中NK4蛋白表达水平。结果成功构建共表达NK4基因和EGFP基因的慢病毒载体pLenti6.3-NK4-IRES-EGFP,并对其包装、纯化及浓缩后测定病毒滴度为1.08×108 TU/mL。重组慢病毒感染HCCLM3细胞筛选其最适MOI为7。转染后HCCLM3细胞中可见明显的NK4蛋白表达,而未转染细胞中无NK4蛋白的表达。结论成功构建了NK4基因的重组慢病毒载体,有效地转染HCCLM3细胞后可高表达NK4蛋白。

反义抑制Tiam 1对胃癌细胞形体重塑影响的实验研究

目的观察T淋巴细胞瘤侵袭转移诱导因子1(Tiam1)反义寡核苷酸(ASODN)转染对胃癌细胞形体重塑的影响。方法采用层粘连蛋白黏附法,由胃癌MKN-45细胞株(M0)中筛选获得高侵袭转移亚株(MH)。以脂质体介导将Tiam1ASODN转染至MH细胞中,并应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及流式细胞技术分别检测Tiam1mRNA和蛋白的表达。采用HE染色、细胞骨架蛋白染色及扫描电镜技术观察转染与未转染MH细胞在形态学方面的不同。结果与未转染组相比,应用0.43μmol/L Tiam 1 ASODN转染可特异性抑制胃癌MH细胞中Tiam 1 mRNA和蛋白的表达(P<0.01);转染MH细胞的膜表面突起及伪足变稀疏或缩短,细胞骨架结构紊乱程度降低,斑点状肌动蛋白小体减少。结论特异性ASODN转染可有效抑制Tiam1在胃癌细胞中的表达及胃癌细胞形体重塑,这可能对胃癌细胞的侵袭转移产生影响。

沉默LASP1对口腔鳞癌细胞生物学行为及3种抗肿瘤药物IC_(50)的影响

目的:评价LASP1对口腔鳞癌细胞增殖、转移、侵袭和周期的影响,并对3种抗肿瘤药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛的相关作用进行分析。方法:利用The human protein atlas数据分析LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后的关系。RT-PCR和Western免疫印迹检测LASP1在口腔鳞癌细胞系的mRNA和蛋白表达。慢病毒构建LASP1沉默的HN30稳转细胞株,CCK-8法检测细胞增殖,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,Transwell法检测细胞转移和侵袭能力,流式细胞仪检测细胞周期变化。建立裸鼠口腔鳞癌肺部转移瘤。CCK-8法分析3种药物顺铂、阿帕替尼和多西他赛在细胞中的IC_50变化。采用SPSS 11.0软件包对数据进行统计学分析。结果:LASP1与头颈部肿瘤生存率、预后密切相关。LASP1促进口腔鳞癌细胞系HN30增殖、克隆形成、转移和侵袭,促进细胞周期G2/M期过渡。沉默LASP1后,裸鼠肺部转移瘤显著减少,多西他赛IC_50显著下调,而顺铂和阿帕替尼IC_50无显著变化。结论:LASP1促进口腔鳞癌细胞增殖、平板克隆、转移和侵袭,细胞周期G2/M期过渡,促进裸鼠体内肺转移瘤形成和多西他赛耐药。