混合式教学在《细胞信号转导的分子机理》教学中的实践研究

目的探讨线上线下混合式教学模式对《细胞信号转导的分子机理》课程教学效果的影响。方法选择采取混合式和线上两种教学方式的2022级博士生(n=697)为研究对象,分别采取线下或线上教学方式的2021级博士生(n=692)为对照,对学生的期末成绩和调查问卷满意度进行分析和统计,评估教学效果。结果2022级线上线下混合教学效果优于2021级线下教学;在采用混合式教学改革的班级中,约90%的博士生对课程的目标、内容的应用性和添加最新研究进展方面满意,认为该课程有助于学生科研思维的培养和课题研究的开展。结论混合式教学模式能够提高本课程的教学效果,促进学生对理论知识的深入理解和应用,得到了学生们的认可。

细胞信号转导抑制剂介导Th1/Th2免疫偏移对血吸虫虫卵肉芽肿的影响

目的 观察酪氨酸蛋白激酶(TPK)、蛋白激酶C(PKC)和磷酯酰肌醇-3-激酶(P13-K)特异性抑制剂(分别为tyrphostin-25、D-sphingosine和wortmannin)对日本血吸虫感染小鼠虫卵肉芽肿病变的影响,并探讨其作用机制。 方法 于小鼠感染日本血吸虫后第35天起,经尾静脉分别注射3种信号转导分子抑制剂,连续5 d。在小鼠感染后6和8wk,观察小鼠肝肉芽肿病变,并用ELISA夹心法和硝酸还原酶法分别测定小鼠血清IFN-γ、IL-4和一氧化氮(NO)水平。结果 感染小鼠应用TPK和PKC抑制剂后均可显著抑制肝肉芽肿病变,PKC抑制剂可使肉芽肿减少率达56.2％～63.4％(P<0.01)。PKC抑制剂主要抑制Th2细胞因子IL-4的表达,其抑制率为34.1％和65.6％(P<0.01),而对NO水平的检测结果进一步证明了PKC抑制剂对IL-4表达的抑制作用。 结论 在日本血吸虫感染早期应用PKC抑制剂干预T淋巴细胞信号转导可显著抑制小鼠肝肉芽肿病变,其机制可能是由于抑制了Th2优势应答并介导Th2向Th1免疫反应偏移。

黄芪多糖对小鼠免疫细胞信号转导相关分子的影响

为探讨黄芪多糖(APS)免疫调节的作用机理,观察了黄芪多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)生成、对体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞内游离钙离子水平和蛋白激酶C(PKC)活性的影响。结果显示黄芪多糖能明显促进小白鼠腹腔巨噬细胞NO生成,显著升高小鼠脾淋巴细胞内游离钙离子的水平,引起细胞PKC活性明显升高。提示黄芪多糖通过NO介导信号传递通路,调节脾淋巴细胞内游离钙离子的浓度,升高细胞蛋白激酶活性而影响机体免疫细胞的信号转导,发挥其免疫调节作用。

温针灸对神经痛大鼠脊髓白细胞介素-6及细胞信号转导抑制因子3的影响

目的观察温针灸对神经痛大鼠脊髓白细胞介素-6(IL-6)、细胞信号转导抑制因子3(SOCS3)的影响,探讨其治疗神经痛的作用机制。方法实验大鼠随机分为正常组、模型组、温针组、IL-6组,每组6只。模型组建立坐骨神经慢性限制性损伤神经痛模型,不干预;温针组造模成功第5日后,选取"脾俞""肾俞"温针灸治疗,共10次;IL-6组造模成功第5日起,脊髓鞘内注射重组IL-6,共3次。电子触觉测量机械痛行为学,ELISA和RT-PCR检测脊髓IL-6、SOCS3 m RNA及小胶质细胞活化标记物Iba-1的表达。结果与模型组比较,温针组机械痛阈值明显升高(P<0.01),Iba-1含量明显降低(P<0.01),脊髓背角IL-6 m RNA表达明显降低(P<0.01),SOCS3 m RNA表达明显升高(P<0.01)。结论温针灸能减轻神经痛大鼠痛敏反应,其机制可能与抑制脊髓小胶质细胞活化、下调IL-6表达和上调SOCS3表达有关。

细胞信号转导抑制剂对日本血吸虫感染小鼠Th1/Th2免疫偏移的调控

目的 观察酪氨酸蛋白激酶 (TPK)、蛋白激酶 C(PKC)和磷酯酰肌醇 - 3-激酶 (PI- 3K)特异性抑制剂(Tyrphostin- 2 5、D- sphingosine和 Wortmannin)分别特异性抑制 TPK、PKC和 PI- 3K后 ,对小鼠脾 CD4 + T淋巴细胞经虫卵可溶性抗原 (SEA)诱生 IFN- γ和 IL- 4的表达水平及对 Th1/Th2免疫偏移的影响。 方法 分别于小鼠感染日本血吸虫后 0、4、8和 12周 ,用单克隆抗体分离脾 CD4 + T淋巴细胞体外培养 ,并进行细胞信号转导抑制试验 ,用 EL ISA夹心法和硝酸还原酶法分别测定小鼠脾 CD4 + T淋巴细胞体外培养上清 IFN-γ、IL - 4和一氧化氮 (NO)表达水平。 结果 Tyrphostin- 2 5对 IFN-γ和 IL - 4水平的抑制作用均非常显著 (P<0 .0 1) ,D- sphingosine主要影响 IL - 4的表达 (P<0 .0 1) ,而 Wortmannin则主要影响 IFN-γ的表达 (P<0 .0 1) ,对反映 Th1/Th2免疫平衡的 Th2分化指数分析表明 ,D-sphingosine可使 Th2免疫应答优势减弱 ,而 Wortmannin则可使 Th2免疫应答优势增强。对脾 CD4 + T淋巴细胞培养上清 NO水平检测结果显示 ,NO水平动态与 IFN-γ相一致 ,NO水平主要受 TPK抑制剂 Tyrphostin- 2 5和 PI- 3K抑制剂Wortmaninn的影响 ,结合该两种信号分子抑制剂对 Th1/Th2细胞因子表达水平的作用结果分析 ,

原发性胆汁性肝硬化外周血Toll样受体和细胞因子信号转导抑制分子mRNA水平的表达及意义

目的探讨cytokine-TLR-SOCS通路在原发性胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis,PBC)发病机制中的作用。方法研究对象分为3组:32例PBC,30例慢性乙肝(chronic hepatitis B,CHB)和32例健康人(healthy controls,HC)。ELISA测定血清IL-6和IFNγ的变化,RT-PCR测定外周血单个核细胞的TLR和SOCS的表达。结果与HC组相比,PBC组的IL-6和IFNγ水平显著升高;PBC组的TLR4、TLR9、SOCS1和SOCS3 mRNA的水平均显著性高于HC,为HC组的1.48、2.51、3.43和1.48倍,TLR9和SOCS1的mRNA水平是CHB组的6.85倍和2.99倍(P<0.05)。结论 PBC患者处于炎性状态;TLR的过度激活可能与PBC的发生和发展有一定关系,SOCS作为通路的负调控蛋白可作为疾病免疫治疗的靶点。

细胞因子信号转导抑制分子与肾脏疾病

肾脏疾病的病因及发病机制较为复杂,免疫功能紊乱、感染、炎症信号通路等共同参与其发生、发展过程。近年来研究发现,JAK/STAT途径是人体内生理和病理反应的共同通路之一,与多种肾脏疾病的发病密切相关。而细胞因子信号转导抑制分子（suppressors of cytokine signaling,SOCS）主要通过JAK/STAT信号转导通路的负性调节作用而抑制细胞因子信号转导,从而参与机体多种生理与病理的发生、发展过程。

慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞中miR-155和细胞因子信号转导抑制分子1相对表达量与肝功能损伤程度的相关性

目的分析慢性乙型肝炎(chronic hepatitis C,CHB)患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中miR-155和细胞因子信号转导抑制分子1(suppressor of cytokine signaling 1,SOCS1)的表达水平,并探讨其与肝功能损伤程度的相关性.方法连续纳入2016年3月至2018年6月于南京中医药大学附属南京医院就诊的95例CHB患者为研究对象(CHB组),根据患者肝组织病理学检查结果分为轻度CHB组(31例)、中度CHB组(38例)和重度CHB组(26例).另选取同期健康体检者50例作为对照组.采用RT-PCR检测受试者外周血PBMC中miR-155和SOCS1 mRNA相对表达量,ELISA法检测CHB患者血清肝功能指标[丙氨酸氨基转移酶(alanine transaminase,ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(aspartate aminotransferase,AST)和总胆红素(total bilirubin,TBil)],分析外周血miR-155和SOCS1 mRNA相对表达量与CHB严重程度及肝功能指标的相关性.结果 CHB组患者miR-155相对表达量(0.64±0.15)显著低于对照组(0.86±0.27),SOCS1 mRNA相对表达量(1.25±0.37)显著高于对照组(0.69±0.18),差异均有统计学意义(t=6.314,P<0.001;t=10.081,P<0.001).重度CHB组miR-155相对表达量为0.52±0.13,显著低于中度CHB组(0.65±0.16)和轻度CHB组(0.73±0.20);SOCS1 mRNA相对表达量为1.50±0.25,显著高于中度CHB组(1.21±0.33)和轻度CHB组(1.09±0.31),差异均有统计学意义(P均<0.05).CHB患者miR-155和SOCS1 mRNA表达水平呈显著负相关(r=-0.695,P<0.01).重度CHB组血清ALT、AST、TBil水平分别为(95.97±11.98)U/L、(75.93±10.27)U/L、(22.21±4.09)μmol/L,均显著高于轻度CHB组[(79.73±10.86)U/L、(61.57±9.16)U/L、(18.06±3.14)μmol/L]和中度CHB组[(86.05±12.14)、(66.66±9.38)U/L、(19.73±3.52)μmol/L],差异有统计学意义(P均<0.05),中度CHB组血清ALT、AST、TBil水平与轻度CHB组相比,差异无统计学意义(P均>0.05).CHB患者miR-155相对表达水平与ALT、AST、TBil水平呈负相关(r=-0.457、-0.531、-0.389,P均<0.05),SOCS1 mRNA与ALT、AST、TBil水平呈正相关(r=0.419、0.520、0.371,P均<0.05).结论 CHB患者PBMC中miR-155和SOCS1 mRNA的异常表达与肝功能损伤程度密切相关.

细胞信号转导抑制因子3特异性shRNA的构建及鉴定

目的构建针对大鼠细胞信号转导抑制因子3(SOCS-3)基因的短发夹RNA(shRNA)表达载体,选取最有效shRNA模板序列。方法设计并合成编码的shRNA的2条寡核苷酸序列,经退火成互补双链,再克隆至pGPU6/GFP/Neo中构建重组表达载体,转化DH5α菌株,进行序列测定;转染至骨骼肌细胞中。Real-time PCR和Western blot检测各组SOCS-3的表达情况。结果测序证实重组质粒构建成功。4对shRNA模板序列对SOCS-3的表达抑制与空白及阴性对照相比差异均有统计学意义(均P<0.05),且以SOCS-3-shRNA a干预效果较好。结论 SOCS-3特异性shRNA重组表达载体构建成功,能有效抑制大鼠骨骼肌细胞SOCS-3的表达,为后续研究及代谢综合征的基因治疗奠定了基础。

细胞信号转导通路中药物作用靶分子研究进展

细胞内有许多信号转导通路,交织成一个大的细胞信号转导网络系统,该网络系统是非常有序和复杂的.受外环境的干扰和基因突变等因素的影响,细胞信号转导系统的有序在肿瘤细胞中被打乱,某些信号转导途径出现异常.美国MIT肿瘤研究中心的ras基因发现者Robert A Weinberg教授认为有四种细胞信号转导途径的异常与肿瘤的生长有密切关系,它们包括TGF-周期素(transforming growth factir-cyclin)途径、p19-p53途径、端粒酶(telomer-ase)途径和RasMARP途径,这些信号转导途径既独立又相互影响.

细胞信号转导抑制因子与肺部疾病

细胞因子通过活化细胞表面受体复合物而发挥其在调控细胞生物学功能中的重要作用,信号转导被一些负性蛋白严格控制,其中以细胞信号转导抑制因子(SOCS)最为重要,SOCS主要通过抑制JAK/STAT信号通路对细胞因子的作用强度及持续时间进行调控。近几年研究显示,SOCS不仅与全身免疫疾病有关,而且在哮喘、肺癌、急性肺损伤等肺部疾病中起重要作用。

丝裂原激活蛋白激酶抑制剂对弓形虫速殖子侵入宿主细胞信号转导途径的阻断效应

目的观察丝裂原激活蛋白激酶(mitogen activated protein kinases,MAPK)抑制剂对弓形虫速殖子侵入细胞的影响。方法 IFA 荧光标记检测在不同剂量抑制剂作用下及在不同时间其宿主细胞感染速殖子的差异;SDS-PAGE 和 Western blot 分析 MAPK 的表达及其相对活性。结果在 PD980591μM 和10μM 作用下其感染率仅分别为对照组的18.00%(u=9.03,P<0.01)和14.80%(u=7.93,P<0.001);在 PD98059 50μM 作用下宿主细胞感染率在24h 和48h 分别为对照组的55.45%(u=3.58,P<0.01)和49.15%(u=4.08,P<0.01);与对照比较,其 MAPK 的相对活性明显下降,10μM 和50μM 组分别降低了43.03%(u=2.72,P<0.01)和78.79%(u=5.74,P<0.001)。结论 PD98059通过作用于 MAPK 信号转导途径而抑制速殖子侵入宿主细胞的过程。

信号转导分子smad4基因表达抑制体外培养人血管平滑肌细胞的增殖

目的:探讨细胞内转化生长因子β信号通路中信号转导分子Smad4与平滑肌细胞的增殖关系。方法:实验于2003-08/10在哈尔滨医科大学医学遗传学研究室完成。①取体质量200g左右的健康雄性SD大鼠,常规胶原酶消化法原代培养大鼠血管平滑肌细胞。用体积分数为0.2和0.05(去血清培养)胎牛血清和的Dulbecco改良的Eagle培养基,37℃,体积分数0.05CO2进行培养,2.5g/L胰酶消化传代。血管平滑肌细胞经锥虫蓝染色,存活细胞数在98%以上。形态学上出现典型的“峰和谷”样生长状态,抗平滑肌特异α-肌动蛋白免疫组织化学染色阳性。取3～8代细胞用于实验。②观察项目:转染前后细胞增殖能力和细胞凋亡能力的检测应用流式细胞分析仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法凋亡检测试剂盒完成。smad4的表达及部分与细胞周期调控相关基因(p16、细胞周期调控激酶4和细胞周期因子E)和细胞凋亡基因(半胱天冬酶2和半胱天冬酶3)表达变化应用免疫印迹法和荧光免疫组化方法检测。结果:①转染前后细胞增殖能力和细胞凋亡能力流式细胞分析仪和脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记法测定结果:smad4基因过表达调控人血管平滑肌细胞增殖能力下降DNA合成前期细胞明显增加[(72.33±4.35)%],正常培养细胞DNA合成前期细胞数相对较少[(45.88±1.58)%]。②smad4的表达及部分与细胞周期调控相关基因免疫印迹法和荧光免疫组化方法检测结果:转染后细胞凋亡能力增加;细胞周期抑制基因p16表达增加,细胞周期调控激酶4和细胞周期因子E表达下降,凋亡相关基因半胱天冬酶2和半胱天冬酶3表达增加。结论:smad4基因对血管平滑肌细胞增殖能力的抑制作用主要通过抑制细胞增殖和诱导细胞凋亡的发生而实现。转化生长因子β信号传导通路对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用除了能够有效阻滞细胞周期的演进外,还能够诱导细胞凋亡。

细胞信号转导抑制因子3影响青少年特发性脊柱侧凸畸形软骨内的成骨活性

背景:已有相关研究报道,瘦素与细胞信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling 3,SOCS3)表达异常在青少年特发性脊柱侧凸畸形发病中起重要作用。目的:探讨SOCS3是否通过瘦素信号传导通路调节软骨细胞内成骨活性。方法:①将人棘突软骨细胞分别以0(对照组),100μg/L瘦素刺激24 h,免疫组化染色观察Ⅱ型胶原表达。②将人棘突软骨细胞分9组培养,分别为空白对照组、转染pcDNA3.1-NC组、转染pcDNA3.1-SOCS3组、转染siRNA-NC组、转染siRNA-SOCS3组、瘦素+转染pcDNA3.1-NC组、瘦素+转染pcDNA3.1-SOCS3组、瘦素+转染siRNA-NC组、瘦素+转染siRNA-SOCS3组。置于培养箱中培养24 h后,实时荧光定量PCR法检测SOCS3 mRNA的表达量,MTT法检测细胞抑制率。结果与结论:①免疫组化染色显示,瘦素刺激组软骨细胞Ⅱ型胶原表达多于对照组。②实时荧光定量PCR检测显示,转染pcDNA3.1-SOCS3可显著提高软骨细胞SOCS3 mRNA表达量,转染siRNA-SOCS3可显著降低软骨细胞SOCS3 mRNA表达量,转染pcDNA3.1-NC、siRNA-NC对软骨细胞的SOCS3 mRNA表达量无影响;瘦素预刺激可提高转染pcDNA3.1-SOCS3、siRNA-SOCS3软骨细胞的SOCS3 mRNA表达量,对转染pcDNA3.1-NC、siRNA-NC软骨细胞的SOCS3 mRNA表达量无影响。MTT检测显示,转染pcDNA3.1-SOCS3可抑制软骨细胞内成骨活性,转染siRNA-SOCS3可增强软骨细胞内成骨活性;瘦素预刺激可提高转染pcDNA3.1-NC、pcDNA3.1-SOCS3、siRNA-NC、siRNA-SOCS3软骨细胞内成骨活性。③结果表明,瘦素刺激可提高软骨细胞内成骨活性,SOCS3表达上调可通过瘦素抵抗抑制软骨细胞内成骨活性。

细胞信号转导抑制因子-3通过抑制信号传导及转录激活因子-3磷酸化对半乳糖胺/脂多糖所致小鼠肝损伤发生的影响

本实验采用小鼠内毒素耐受动物模型,探讨内毒素耐受对半乳糖胺/脂多糖（Galn/LPS）诱发的急性肝损伤发生的影响,以及肝脏细胞信号转导抑制因子（SOCS）-3和信号传导及转录激活因子（STAT）-3的信号转导在内毒素耐受发生中的作用,现报告如下。

细胞因子信号转导抑制分子3与肿瘤关系的研究进展

细胞因子与相应的受体结合可导致信号传导通路的活化,而将细胞因子的信号由胞膜传到胞浆并最终传至胞核,并引起目的基因的表达。已经发现的10余条细胞因子信号传导通路,其中Janus激酶/信号转导和转录激活子（JAK/STAT）系统涉及细胞因子的范围较为广泛。过去研究细胞因子信号的传入较多,较少观察这些信号是如何中止或衰减。

分子生物学《细胞信号转导》翻转课堂教学设计

现今我国社会经济高速发展,不断完善和提高自身的教育教学水平是每一位高等医学院校教师应该认真思考和努力实践的重要课题。以《分子生物学》课程教学过程中的《细胞信号转导》章节内容为例,通过制作适合学生自主学习的内容提纲,并进一步融合翻转课堂教学模式对该部分教学内容进行新的设计和探索,旨在提升教学效果,推进教学效率的同时,积极引导和培养高等医学院校学生的学习主动性,提高学生自主学习的能力及学习效果。

转移抑制基因及其对肿瘤细胞信号转导的影响

转移是导致肿瘤患者死亡的重要原因之一。肿瘤转移的机制还没有完全研究清楚。一类新的基因——转移抑制基因——成为肿瘤转移研究新的方面,并有可能成为新的治疗方法。目前已经确定了8个抑制肿瘤转移而不影响肿瘤发生的基因,它们影响一些重要的信号转导通路,包括MAPK,RHO,RAC和G蛋白耦联和酪氨酸激酶受体通路,对于肿瘤治疗具有重要的意义。