Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义

目的:探究Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义。方法:将取自因原发性膝骨性关节炎(KOA)行全膝关节置换术(TKA)去除的30例患者的膝关节软骨组织设为观察组,将同期行下肢离断术去除的25例患者的膝关节软骨组织设为对照组。比较两组标本外观形态,HE染色、番红O-固绿染色、电镜扫描结果。通过免疫组织化学(IHC)染色、免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoA和ROCK蛋白及mRNA的表达变化。结果:观察组股骨髁软骨表面粗糙,缺损明显,呈溃疡状,染色不均匀,潮线不完整。对照组软骨面光滑平整,组织分层明显,颜色均匀。电镜扫描结果显示,观察组软骨组织毁损严重,结构不清;对照组表面光洁,软骨间质均匀。与对照组比较,观察组关节软骨组织中RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达量高于对照组(均P<0.05)。结论:RhoA/ROCK信号转导通路中的RhoA、ROCK蛋白及mRNA在KOA患者关节软骨组织中表达明显高于行下肢离断术患者,提示RhoA/ROCK信号转导通路与KOA软骨退变具有相关性,可能对KOA的发生与发展起到了重要作用。

植物对Hela细胞凋亡相关基因表达和信号转导通路的影响

宫颈癌占妇科恶性肿瘤发病的第一位．发病率有逐年升高和发病年轻化的趋势。其治疗方法主要有手术、放疗和化疗，化疗是子宫颈癌的常规治疗方案。大多数的化疗药物都是通过诱导细胞凋亡杀死肿瘤细胞。细胞凋亡是生物体内普遍存在的一种生理现象．是在体内复杂信号的调节下，

番茄红素调节RAS同源基因家族成员A/Rho相关激酶信号通路对氧化低密度脂蛋白诱导脑血管内皮细胞凋亡的影响

目的探讨番茄红素(LYC)调节RAS同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关激酶(ROCK)信号通路对氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的脑血管内皮细胞(EC)凋亡的影响。方法未做任何处理的人脑微血管内皮细胞(HBMECs)设为NC组;采用ox-LDL处理的HBMECs分为ox-LDL组、LYC组(0.5μmol/L的LYC处理HBMECs)、溶血磷脂酸(LPA)组(5μmol/L RhoA/ROCK信号通路激活剂LPA处理HBMECs)、LYC+LPA组(0.5μmol/L的LYC以及5μmol/L LPA共同处理HBMECs);处理24 h后用于后续实验。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBMECs细胞因子水平;CCK-8法检测HBMECs增殖;流式细胞术检测HBMECs凋亡率;Western blot检测细胞血小板内皮细胞黏附分子-1(CD31)、平滑肌(SM)22α、BCL-2相关X蛋白(Bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2蛋白(Bcl-2)、裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase-3)、RhoA/ROCK通路相关蛋白表达。结果与NC组相比,ox-LDL组单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素(IL)-6、血管内皮细胞黏附分子1(VCAM-1)、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平升高,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平下降,差异有统计学意义(P<0.05);与ox-LDL组相比,LYC组MCP-1、IL-6、VCAM-1、HBMECs凋亡率、Bax、cleaved-Caspase-3、SM22α、RhoA、ROCK1蛋白水平降低,OD值、Bcl-2、CD31蛋白水平升高,差异有统计学意义(P<0.05),而LPA组趋势相反;LPA减弱了LYC对ox-LDL诱导的HBMECs凋亡的改善作用。结论LYC可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路来减轻HBMECs凋亡。

调补心肾方通过活化PI3K/Akt/mTOR通路促进阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性相关蛋白的合成

目的探讨调补心肾方(党参、制首乌、枸杞子、黄芪等)对阿尔茨海默病5xFAD转基因小鼠突触可塑性的影响及机制。方法取5月龄雄性野生型(WT)小鼠和5xFAD转基因小鼠各18只,分别随机分为对照组(0.9%NaCl)、调补心肾方组(颗粒剂,4.18 g·kg^(-1))、安理申组(盐酸多奈哌齐,0.625 mg·kg^(-1)),每组6只。按照上述分组灌胃给药,每日1次,共60 d。采用透射电镜观察小鼠海马组织超微结构;Western Blot法检测小鼠皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1、NMDAR1、p-CaMKⅡa、CaMKⅡa、PI3K、p-Akt、Akt、p-mTOR、mTOR蛋白表达水平。结果与WT对照组比较,5xFAD对照组小鼠海马CA1区突触的超微结构不规则,线粒体萎缩、减少,线粒体嵴断裂、消失,突触膜弯曲不规则,突触囊泡减少,突触后致密物(PDS)变薄甚至断裂;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达均明显下调(P<0.05)。与5xFAD对照组相比较,5xFAD调补心肾方组小鼠海马CA1区突触的超微结构有明显变化,线粒体数量增加,突触囊泡增多,突触膜完整,突触后致密物有增厚现象;皮层组织中Synaptophsin、PSD-95、p-NMDAR1/NMDAR1、p-CaMKⅡa/CaMKⅡa、PI3K、p-Akt/Akt、p-mTOR/mTOR蛋白表达明显上调(P<0.05)。结论调补心肾方可能通过活化PI3K/Akt/mTOR通路,促进突触可塑性相关蛋白合成,进而改善AD的认知功能障碍。

受体相互作用蛋白1和受体相互作用蛋白3在细胞信号转导通路中的作用

受体相互作用蛋白(RIP)家族成员均含有1个丝氨酸-苏氨酸激酶结构域。RIP1被上游信号激活泛素化后可引起下游炎症通路的激活,而RIP1去泛素化并与RIP3结合后可激活下游的凋亡及坏死性凋亡信号通路。因此,研究RIP1和RIP3作为关键分子直接参与的炎症、凋亡及坏死性凋亡信号通路,可为治疗炎症性疾病、退行性疾病、肿瘤及衰老等提供新思路。未来作用于RIP相关信号通路的新的化学抑制剂的发现,有助于精细调控细胞信号转导过程,为临床诊疗提供新途径。

黄芪多糖对小鼠免疫细胞信号转导相关分子的影响

为探讨黄芪多糖(APS)免疫调节的作用机理,观察了黄芪多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮(NO)生成、对体外培养的小鼠脾脏淋巴细胞内游离钙离子水平和蛋白激酶C(PKC)活性的影响。结果显示黄芪多糖能明显促进小白鼠腹腔巨噬细胞NO生成,显著升高小鼠脾淋巴细胞内游离钙离子的水平,引起细胞PKC活性明显升高。提示黄芪多糖通过NO介导信号传递通路,调节脾淋巴细胞内游离钙离子的浓度,升高细胞蛋白激酶活性而影响机体免疫细胞的信号转导,发挥其免疫调节作用。

大豆异黄酮对AD大鼠海马CaM-CaMPK信号转导通路相关蛋白的影响

目的通过观察大豆异黄酮对阿尔茨海默病(AD)大鼠海马钙调蛋白(CaM)-钙调蛋白依赖性蛋白激酶(CaMPK)信号转导通路相关蛋白的影响,探讨大豆异黄酮治疗AD作用机制。方法采用Aβ双侧海马注射建立AD大鼠模型,分组后给予不同剂量大豆异黄酮,Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力的变化,ELISA法测定大鼠海马组织CaM、CaMPK含量,免疫组化SP法观察大鼠海马组织Ras蛋白的表达。结果大豆异黄酮可改善AD大鼠的学习记忆能力(P<0.01),显著降低AD大鼠海马组织CaM、CaMPK的含量(P<0.01),显著降低AD大鼠海马组织Ras蛋白的表达(P<0.01)。结论大豆异黄酮可能通过降低AD大鼠海马CaM-CaMPK信号转导通路相关蛋白的表达起到治疗AD的作用。

胃癌细胞中JAK-STAT和ras-MAPK信号通路相关基因的表达及意义

目的通过检测不同分化程度胃癌细胞中ras、STAT3、p38MAPK的表达,分析各基因表达的关系。方法采用RT-PCR和蛋白印迹分析法检测人胃癌细胞株MKN45、SGC7901、MKN28中ras、STAT3、p38MAPK核酸和蛋白的表达水平。结果人低分化胃癌细胞株MKN45中ras、STAT3、p38MAPK的mRNA表达水平明显高于人中分化胃癌细胞株SGC7901(P<0.05)和人高分化胃癌细胞株MKN28(P<0.01);人低分化胃癌细胞株MKN45中ras、STAT3、p38MAPK的蛋白表达水平明显高于人中分化胃癌细胞株SGC7901(P<0.05)和人高分化胃癌细胞株MKN28(P<0.01)。ras与STAT3(r=0.94,P<0.01)、p38MAPK(r=0.89,P<0.01)mRNA的表达均呈显著正相关;STAT3和p38MAPK mRNA的表达呈正相关(r=0.76,P<0.05);ras与STAT3蛋白的表达水平呈显著正相关(r=0.97,P<0.01);ras与p38MAPK蛋白的表达水平呈正相关(r=0.72,P<0.05);STAT3和p38MAPK蛋白的表达亦呈正相关(r=0.69,P<0.05)。结论 ras、p38MAPK和STAT3的过度表达在胃癌的发生、发展、分化过程中起重要作用,ras-MAPK和JAK-STAT通路的平衡失调可能是导致胃癌发生的重要原因。

化学所在细胞信号转导相关蛋白的单分子实时成像方面取得重要进展

化学研所分子纳米结构与纳米技术院重点实验室研究人员在国家自然科学基金委重大研究计划、科技部纳米科学重大科学研究计划和中科院等相关项目的支持下，近期与清华大学生物系合作，通过活细胞单分子成像，在转化生长因子受体聚集状态和激活模式的研究方面取得重要进展。

细胞信号转导通路中药物作用靶分子研究进展

细胞内有许多信号转导通路,交织成一个大的细胞信号转导网络系统,该网络系统是非常有序和复杂的.受外环境的干扰和基因突变等因素的影响,细胞信号转导系统的有序在肿瘤细胞中被打乱,某些信号转导途径出现异常.美国MIT肿瘤研究中心的ras基因发现者Robert A Weinberg教授认为有四种细胞信号转导途径的异常与肿瘤的生长有密切关系,它们包括TGF-周期素(transforming growth factir-cyclin)途径、p19-p53途径、端粒酶(telomer-ase)途径和RasMARP途径,这些信号转导途径既独立又相互影响.

MicroRNA与细胞信号转导通路研究进展

成熟的microRNA(miRNA)是一种长约22 nt的非编码RNA,通过与靶基因的3′非翻译区(3′UTR)结合来调控靶基因的表达。直至目前,在不同物种中发现的miRNA达6 397个。miRNA的发现为基因表达调控研究打开了新的窗口。目前研究者不仅证实miRNA在生物体生长、发育和疾病发生等过程中发挥着重要的作用,而且开始进一步探寻其发挥作用的分子机理。综述了miRNA与细胞信号转导途径之间的关系,从而有助于从基因水平上理解疾病的发生机制,为疾病的诊断、治疗提供依据。

染料木素对AD大鼠海马CaM-CREB信号转导通路相关蛋白的影响

目的:通过观察染料木素对Aβ25-35致阿尔茨海默病(AD)模型大鼠CaM-CREB信号转导通路相关蛋白的影响,探讨染料木素预防阿尔茨海默病的作用机制。方法:SD雌性老龄大鼠120只,随机分为空白组、模型组、染料木素高、中、低剂量组、雌激素阳性对照组,每组20只。预给药7 d后,采用β-淀粉样肽(Aβ)双侧海马注射建立阿尔茨海默病大鼠模型,继续给药21 d。采用Morris水迷宫实验观察大鼠学习记忆能力的变化,HE染色观察大鼠海马组织形态学变化,ELISA法检测大鼠海马钙调蛋白(CaM)含量,免疫组化SP法检测大鼠海马环腺苷酸反应元件结合蛋白(CREB)、磷酸化CREB的表达。结果:与模型组比较,染料木素各剂量组AD大鼠的学习记忆能力提高(P<0.01),海马CaM含量、CREB和p-CREB的表达降低(P<0.05)。结论:染料木素可能通过影响海马CaM-CREB信号转导通路相关蛋白表达起到预防AD的作用。

微管相关蛋白1通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝细胞癌的早期复发

【据《Gut》2016年3月报道】题：微管相关蛋白1通过Wnt/β-catenin信号通路促进肝细胞癌的早期复发（作者Chen J等）肝细胞癌（HCC）是全球癌症死亡的第二大原因。HCC患者微管相关蛋白发生了变化。然而,这些变化背后的机制仍知之甚少。来自新加坡分子与细胞生物学研究所的Chen等研究了细胞分裂的调控者——微管相关蛋白（PRC）1在HCC发生和HCC早期复发中的作用。通过基因芯片、免疫印迹和免疫组化检测HCC样本中PRC1的表达。分子和细胞技术包括siRNA介导的和慢病毒载体介导的基因敲除,被用来阐明PRC1的功能和机制。PRC1的表达与HCC早期复发和较差的预后有关。

信号转导及转录激活因子3、垂体同源框1及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义

目的探讨信号转导及转录激活因子3(STAT3)、垂体同源框1(PITX1)及胶质瘤相关癌基因同源蛋白-1(Gli-1)在皮肤恶性黑色素瘤中的表达及临床意义。方法选取89例皮肤恶性黑色素瘤患者的肿瘤组织及癌旁组织。对患者进行随访,根据预后情况分为预后良好及预后不良。采用免疫组化法检测STAT3、PITX1、Gli-1蛋白表达情况,分析皮肤恶性黑色素瘤患者预后的影响因素。结果肿瘤组织中STAT3、Gli-1蛋白阳性表达率均明显高于癌旁组织,PITX1阳性表达率明显低于癌旁组织,差异均有统计学意义(P﹤0.01)。预后不良患者肿瘤组织中STAT3、Gli-1蛋白阳性表达率均高于预后良好患者,PITX1阳性表达率低于预后良好患者,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。肿瘤直径≥5 cm、STAT3阳性、PITX1阴性、Gli-1阳性均为皮肤恶性黑色素瘤患者预后不良的独立危险因素(P﹤0.05)。结论STAT3、PITX1及Gli-l蛋白在皮肤恶性黑色素瘤中存在异常表达,通过检测其水平能为临床治疗及预后提供新的思路与依据。

多药耐药相关ABC转运蛋白信号转导通路研究进展

ATP结合盒(ABC)转运蛋白表达和功能的异常是造成多药耐药(MDR)的重要原因之一,其中P-糖蛋白、乳腺癌耐药蛋白和MDR相关蛋白在MDR发生中起着重要作用,是ABC转运蛋白家族中研究热点。本文对近几年来这3种转运蛋白相关信号转导通路进行整理分析,如NF-κB信号通路、丝裂原活化蛋白激酶级联信号通路、磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B信号通路和音猬因子(sonic hedgehog)信号通路等,挖掘出信号通路中重要调控节点NF-κB、激活蛋白1、c-Jun和转录因子Gli等,具有成为MDR逆转剂作用靶点的可能性,以期为MDR机制研究及其逆转剂研发提供较系统的参考。

敲减SRY相关高迁移率族盒蛋白9基因下调Wnt/β-连环蛋白信号对气道肉芽组织成纤维细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨敲减SRY相关高迁移率族盒蛋白9(SOX9)基因下调Wnt/β-连环蛋白信号对气道肉芽组织成纤维细胞增殖和凋亡的影响。方法应用基因芯片筛选出气道肉芽组织和气道正常黏膜组织差异表达的基因,用R软件进行分析,挑选最显著的差异基因SOX9作为研究对象,并借助逆转录聚合酶链反应技术验证气道肉芽组织及气道正常黏膜组织SOX9的表达。提取气道肉芽组织成纤维细胞,通过构建shRNA-SOX9慢病毒载体转染气道肉芽组织成纤维细胞,稳定感染shRNA-SOX9慢病毒的细胞标记为shRNA-SOX9(shRNA-SOX9组),稳定感染shRNA阴性对照的慢病毒的细胞标记为阴性对照组,无质粒载体加入的细胞设定为空白对照组。利用实时定量逆转录聚合酶链反应、蛋白质印迹法检测细胞内SOX9和Wnt/β-连环蛋白信号通路上下游基因表达情况;使用细胞计数试剂盒8检测成纤维细胞的活力;流式细胞术检测细胞凋亡率,组间做比较。结果SOX9在气道肉芽组织中呈高表达,shRNA-SOX9慢病毒转染气道肉芽组织成纤维细胞后,SOX9和Wnt/β-连环蛋白信号通路相关基因表达均低于阴性对照组和空白对照组;敲减SOX9后,气道肉芽组织成纤维细胞的增殖能力下降,转染24、48、72 h后,shRNA-SOX9组气道肉芽组织成纤维细胞增殖抑制率明显高于阴性对照组和空白对照组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。shRNA-SOX9组细胞凋亡率高于空白对照组和阴性对照组[(16.9±2.0)%比(9.1±1.2)%、(10.1±1.8)%],3组间差异有统计学意义(F=3.854,P=0.021)。结论敲减SOX9可以通过调节Wnt/β-连环蛋白信号通路抑制气道肉芽组织成纤维细胞的增殖、促进凋亡。

Hippo信号转导通路中Yes相关蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨Hippo信号转导通路中Yes相关蛋白(YAP)在乳腺癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学方法检测97例乳腺癌组织、32例癌旁正常乳腺组织中YAP的表达情况,分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系。结果YAP在正常乳腺组织中的表达率明显高于乳腺癌组织,两者差异有显著性(χ2=17.603,P=0.000)。乳腺癌组织中YAP的阳性表达与组织学分级、肿瘤大小和有无淋巴结转移之间无明显相关性(P>0.05)。结论 Hippo/YAP信号转导通路在乳腺癌的发生、发展中发挥着重要作用,可能为乳腺癌的早期发现与诊疗开辟新的途径。

基于芯片数据分析丝裂原激活蛋白激酶信号通路基因在不同证候H22肝癌小鼠肾上腺的表达差异

目的:探索丝裂原激活蛋白激酶(MAPK)信号通路基因在不同证候H22肝癌荷瘤小鼠肾上腺的表达特征。方法:采用小鼠标准化四诊及辨证方法,以及GeneChip Mouse Exon 1.0 ST Array等技术,检测H22肝癌小鼠早期邪毒壅盛证和气虚证、中期阳气虚证、中晚期气阴阳虚证共4个证候肾上腺基因表达的差异,分析不同证候小鼠肾上腺组织MAPK信号通路的表达特征。结果:与正常小鼠比较,①肝癌小鼠各证候中,ERK通路、p38/MAPK通路、ERK5通路基因在肾上腺中表达升高;②JNK通路基因在各证候肝癌小鼠肾上腺中表达下降;③其他级联激酶基因在MAPK信号通路中表达也下降。结论:H22肝癌小鼠肿瘤发生后,其肾上腺组织MAPK信号转导中与TGF-β相关的p38/MAPK通路被激活,而JNK通路被抑制;另外两条ERK与ERK5通路同样也被激活。提示不同证候肝癌小鼠的肾上腺组织主动参与了MAPK信号转导过程。