miR-194对人非小细胞肺癌细胞系A549增殖、凋亡的影响及其机制

目的 观察微小RNA-194(miR-194)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法 取A549细胞和人正常肺上皮细胞16HBE,采用qRT-PCR法检测两种细胞miR-194。常规培养A549细胞,经脂质体分别转染miR-194抑制物、miR-194模拟物(mimics)、对照48h(分别计为A、B、C组),采用qRT-PCR验证转染效果,MTS法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Western blotting法检测细胞JAK2、pSTAT3、活化的Caspase-3蛋白。结果 A549、16HBE细胞中miR-194相对表达量分别为1.00±0.10、8.17±0.14,两者比较,P<0.05。A、B、C组miR-194相对表达量分别为0.31±0.11、8.35±0.31、1.00±0.10,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A组转染24、48、72h的OD值分别为0.494±0.069、0.843±0.084、1.111±0.109,B组分别为0.355±0.026、0.510±0.049、0.706±0.087,C组分别为0.427±0.022、0.664±0.068、0.906±0.060,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A、B、C组细胞克隆数目分别为(232.12±10.82)、(43.67±10.97)、(127.33±6.43)个,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。与C组比较,A组细胞凋亡现象及数目明显减少,B组细胞凋亡现象及数目明显增多;A、B、C组细胞凋亡率分别为4.58%±1.01%、21.45%±1.78%、10.23%±1.65%,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A组JAK2、pSTAT3、活化的Caspase-3蛋白相对表达量分别为5.97±0.24、4.52±0.18、0.11±0.04,B组分别为0.34±0.03、0.21±0.02、7.21±0.79,C组分别为1.00±0.10、1.00±0.10、1.00±0.10,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。结论 miR-194能抑制A549细胞的增殖、克隆形成能力,并诱导细胞凋亡,其机制可能与调控JAK2/STAT3信号通路并促进活化的Caspase-3蛋白表达有关。

非整倍体与肿瘤细胞增殖表型关系的初步研究

目的探讨非整倍体与肿瘤细胞增殖表型的关系.方法采用平板克隆形成实验检测人胶质瘤细胞系BT325和大鼠胶质瘤细胞系C6单个细胞的增殖能力,应用常规染色体分析方法检测这些细胞系的核型.结果 BT325和C6细胞系中具有最强增殖能力的细胞分别占8.0%和13.0%左右,具有中等增殖能力的细胞比例分别占17.0%和27.0%,不具有增殖能力或增殖能力很低的细胞分别占75.0%和60.0%.连续细胞克隆形成实验发现,只有具有最强增殖能力的细胞能够连续传代.核型分析结果表明这些细胞系都是非整倍体核型,细胞系BT325的众数范围是47～57,C6的众数范围是32～41,众数范围的细胞比例分别是72.6%和73.4%.结论单纯从非整倍体出发不可能合理解释肿瘤细胞增殖表型的异质性现象,提示有其它机制参与癌变过程.

参灵抗癌方经PI3K/AKT通路调控Bim表达逆转胃癌细胞失巢凋亡抵抗的作用及机制

目的观察参灵抗癌方(SLKAF)逆转胃癌细胞失巢凋亡抵抗作用,并从磷脂酰肌醇-3-激酶/丝苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)调控Bcl-2细胞死亡调解子抗体(Bim)表达为切入点探讨其作用机制。方法采用梯度剂量的SLKAF(0,1,2,4,8,16 mg/mL)与SGC-7901胃癌细胞共培养,MTT法检测胃癌细胞活力,GraphPad Prism7.0计算半数抑制浓度(IC50),并以1×IC50、2×IC50分别作为SLKAF干预SGC-7901细胞的低剂量和高剂量。运用RNA干扰技术将Bim-siRNA转染SGC-7901细胞,qPCR技术检测Bim表达,观察对Bim表达的抑制效率;以SLKAF低、高剂量分别与SGC-7901细胞和经Bim-siRNA转染的SGC-7901细胞共培养,分别采用qPCR和Western Blot检测PI3K、AKT的表达,流式细胞技术检测细胞凋亡率,软琼脂克隆形成实验检测细胞克隆形成能力。结果SLKAF对SGC-7901细胞增殖有显著的抑制作用(P<0.01),并呈明显的量—效应关系,IC50为7.626 mg/mL,故确定8、16 mg/mL分别作为低剂量和高剂量。Bim-siRNA转染SGC-7901细胞可抑制Bim表达(P<0.05)。SLKAF高、低剂量均降低SGC-7901细胞PI3K、AKT表达(P<0.05,P<0.01),提高胃癌细胞凋亡率(P<0.05,P<0.01),降低胃癌细胞克隆形成能力(P<0.01);与低剂量比较,高剂量SLKAF作用下的SGC-7901细胞/经Bim-siRNA转染的SGC-7901细胞表达PI3K、AKT均降低(P<0.01),胃癌细胞凋亡率升高(P<0.05),细胞克隆形成数降低(P<0.05);在SLKAF相同剂量下,SGC-7901细胞和经Bim-siRNA转染的SGC-7901细胞表达PI3K、AKT比较,差异无统计学意义(P>0.05),但细胞凋亡率和细胞克隆形成能力差异均有统计学意义(P<0.01)。结论SLKAF经PI3K/AKT调控Bim表达逆转胃癌细胞失巢凋亡抵抗。