大鼠腰椎终板软骨干细胞的分离及分化

背景:细胞克隆筛选系统ClonePix能快速有效的挑选出经低熔点琼脂糖悬浮培养获得的细胞克隆团,能够解决生物治疗所需种子细胞数量不足的问题。目的:分离和鉴定大鼠腰椎终板软骨干细胞。方法:取4周龄SD大鼠10只,解剖显微镜下获得其腰椎终板软骨,采用胰酶与Ⅱ型胶原酶消化获得原代软骨细胞,将原代软骨细胞在低熔点琼脂糖培养基中悬浮培养,细胞克隆筛选系统ClonePix挑取细胞克隆团进行体外扩增,扩增后观察其细胞形态,然后进行成骨、成脂肪及成软骨方向诱导,并检测单克隆形成能力。结果与结论:(1)利用低熔点琼脂糖悬浮培养法能够获得大鼠腰椎终板软骨细胞克隆团,细胞克隆团经体外扩增培养后形态呈梭形;(2)诱导后经茜素红、油红O及番红染色证明具有成骨、成脂肪及成软骨分化能力;(3)将细胞克隆团的单个细胞接种于10 cm培养皿,经过12 d的体外扩增培养,肉眼可观察到细胞集落。随着细胞接种密度的增大,细胞集落形成数目减少,以100个细胞密度接种时,集落形成能力最强,可以形成数目大于20个的细胞集落;(4)结果表明,经低熔点琼脂糖悬浮培养法获得的细胞克隆团具有多向分化能力和高增殖能力。