细胞内分裂及细胞内复制诱导

以中国雄性仓鼠饰成纤维细胞(Don细胞株)为实验材料,用二乙基己烯雌酚(DES)作诱导物,诱使细胞进行细胞内复制和细胞内分裂。实验采用不同剂量、不同处理时间和恢复时间,取得了良好的结果。在18个试验组中,有50％的试验组获得成功,最高诱导频率达56％,是前人研究结果的2.4倍,同时降低了诱导物质的毒性,加大了有效诱导剂量与毒害剂量间的差距,使有效诱导剂量的变化,高低相差10倍;使发生诱变的细胞大量存活,同时进行分裂活动。

拟南芥肌动蛋白相关蛋白基因AtARP5和AtARP6共同参与DNA复制

染色质重塑因子是一类利用ATP水解的能量主动重塑染色质结构的蛋白质,其中的INO80亚家族包括两个在进化中高度保守的重要成员,INO80和SWR1.两者通过结合包括肌动蛋白相关蛋白(Actin-Related Protein,ARP)在内的多个亚基,以复合物的形式对染色质结构动态调控,在真核生物的多个表观遗传调控途径中发挥重要的功能.尽管都属于ARP成员,ARP5是INO80重塑复合物的特异性成员,而ARP6是SWR1重塑复合物的特异性成员.在模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)中,AtINO80和AtPIE1(拟南芥SWR1)基因缺失的双突变体致死.我们构建了AtARP5和AtARP6缺失突变体的双突变体atarp5-2 atarp6-1,用以研究两者在植物生长发育中的功能互作.我们发现,相对于野生型植物和各自的单突变体,双突变体atarp5-2 atarp6-1植物生长明显受抑制.细致的细胞观察显示,双突变体植物叶肉栅栏细胞大小和数量都减小,植物细胞核倍性下降,细胞周期和DNA复制相关基因的转录水平异常上调.Pull-down实验和BiFC实验证实,AtARP5和AtARP6都能够与DNA解旋酶RVB1结合.由于RVB1对于细胞增殖和植物生长至关重要,因此两个不同的肌动蛋白相关蛋白可能依赖于RVB1协同调控DNA复制以及相关细胞周期进程.

乙型肝炎病毒持续感染患者细胞内病毒复制的研究

用Southern blot技术对乙肝病毒感染肝脏和外周血白细胞的情况进行了对比研究,发现白细胞的阳性率为44％,肝组织的阳性率为46％,两者无统计学差异。根据琼脂糖凝胶电泳速度可将病毒DNA分子分为游离型、整合型和混合型,配对检查两者亦无明确相关性,说明外周血白细胞是乙肝病毒攻击的靶细胞,亦是病毒复制的场所。白细胞中病毒DNA游离型与血清学指标HBeAg(+),HBV DNA斑点杂交(+)关系密切,而整合型除与上述指标有关外,还和抗-HBe(+)有关,表明病毒在乙肝发病过程中复制和部分静止的差异。

鼠伤寒沙门菌中假定转录调控因子的筛选

目的·基因组信息学分析结合分子生物学实验对鼠伤寒沙门菌中假定转录调控因子进行筛选,以期发现新的转录调控因子和调控机制。方法·通过沙门菌基因组信息分析筛选得到30个假定转录调控因子,利用λ-Red同源重组系统敲除各目的基因。酸耐受实验检测各敲除株在对数期酸耐受应答中的差异;细胞感染模型检测各敲除株上皮细胞入侵能力和巨噬细胞内复制能力;利用realtimePCR检测突变株中pho P及其下游基因的转录水平。结果·成功构建30个敲除株。ΔSTM14_0739、ΔSTM14_2717和ΔSTM14_1646对数期酸耐受能力较WT增强,ΔSTM14_1878、ΔSTM14_4338和ΔSTM14_1965则较WT减弱。ΔSTM14_0739和ΔSTM14_2717对He La细胞的入侵率降低,ΔSTM14_1878和ΔSTM14_2717在RAW264.7细胞内的24 h复制率提高。Realtime-PCR结果显示STM14_2717敲除并不影响pho P转录。结论·研究发现了新的转录调控因子,为深入研究沙门菌致病机制提供新的方向。

黏附侵袭性大肠杆菌在炎症性肠病中的致病作用

炎症性肠病（ inflammatory bowel disease, IBD）是肠道的一种慢性复发性炎症性疾病，主要包括溃疡性结肠炎（ulcerativecolitis，UC）和克罗恩病（Crohn’Sdisease，CD）两种类型。其发病机制目前仍不清楚，肠道菌群作为重要的致病因素，直接或间接地参与了包括IBD在内的诸多消化系统疾病的发生发展。其中黏附侵袭性大肠杆菌 （ adherent-invasive Escherichia coli, AIEC ）是近年来受到广泛关注的一种IBD可能致病菌。该文就黏附侵袭性大肠杆菌作为条件致病菌在炎症性肠病的发病机制，其对肠道屏障及巨噬细胞、自噬相关影响作一综述。