Fura-2/AM荧光法测定日本血吸虫培养细胞内游离钙离子浓度

目的 研究用钙荧光探剂 (Fura- 2 / AM)检测静息状态下日本血吸虫培养细胞内的游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i) ,以及β-巯基乙醇对培养细胞 [Ca2 + ]i的影响。方法 将 18d虫龄的日本血吸虫童虫制成细胞悬液 ,贴壁法接种于 30 ml培养瓶中 ,培养液为 RPMI- 16 4 0含 2 0 %小牛血清及常量抗生素。在培养的 0 - 3d,制备日本血吸虫细胞悬液 ,采用 Fura- 2 / AM钙荧光探剂测定正常静息状态下及加入β-巯基乙醇后日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 + ]i。结果 正常静息状态下 ,培养 0 d的日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 + ]i为 188.2 nmol/ L ;培养 1- 3d的 [Ca2 + ]i两两比较差异无显著性(P>0 .0 5 ) ,它们的平均值为 (187.0± 10 .7) nm ol/ L ,与培养 0 d的 [Ca2 + ]i比较 ,差异也无显著性(P>0 .0 5 )。β-巯基乙醇可使日本血吸虫培养细胞内 [Ca2 + ]i明显升高 (P<0 .0 1) ,并随浓度的增加而升高。结论 培养 1- 3d,静息状态下日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 + ]i比较稳定 ,β-巯基乙醇能影响日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 +

槲芪散及槲寄生提取物对肝癌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨方剂槲芪散及其君药槲寄生提取物多糖、总碱对人肝癌细胞HepG2生长的抑制作用及其对细胞内游离钙离子浓度的影响。方法采用MTT法测定槲芪散对细胞增生的抑制作用;利用流式细胞仪分析细胞周期、凋亡;利用激光共聚焦显微镜测定细胞内游离钙离子浓度。结果槲芪散及槲寄生提取物有较好的抑制肿瘤细胞增生的作用,高剂量组除了槲芪散和槲寄生总碱48 h时间点外,OA值均较对照组明显降低(P<0.001),呈现出时间-剂量依赖性;经药物作用48 h后,槲寄生多糖及总碱组G1期细胞比例增加,S期细胞和G2期细胞比例降低,槲芪散组G1期细胞比例无明显变化,S期比例降低,G2期比例增加,3者均使细胞凋亡增加;加入不同浓度的槲芪散、槲寄生多糖及总碱,低浓度时荧光增强不明显,而高浓度均导致细胞内荧光强度瞬间增强,升高到一定水平后,基本维持在一高水平,除槲寄生总碱组有略微下降外,其余2组未见明显下降趋势。结论槲芪散、槲寄生多糖及总碱均能抑制肿瘤细胞增生,促进细胞凋亡,且这3种药物引起胞内钙超载可能是诱导HepG2凋亡的机制之一。

石棉表面改性对石棉所致人胚肺细胞内游离钙离子浓度改变的抑制作用

为了探讨研究温石棉及用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠预处理的温石棉对人胚肺(HEL)细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的影响。用Flou3/AM标记体外培养的HEL细胞内Ca2+后,将不同浓度的温石棉及用柠檬酸铝、混合稀土或亚硒酸钠溶液浸泡过的温石棉与HEL细胞作用1h,荧光分光光度计测定细胞内[Ca2+]i。结果显示,20、40、80μg/ml温石棉单独作用于HEL细胞1h,可使HEL细胞内[Ca2+]i浓度分别升高3.0%、53.1%和116.7%,且具有明显的剂量-效应关系(r=0·976,P=0·024)。经三种化合物预处理的温石棉组HEL细胞内[Ca2+]i浓度均明显低于未处理温石棉组。得出结论,温石棉可致人胚肺细胞内游离钙离子浓度升高,但用三种化合物预处理温石棉,均可抑制温石棉所致人胚肺细胞内游离钙离子浓度的升高。

水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞内游离钙离子的影响

目的观察水蛭提取液对视网膜色素上皮细胞(retinal pigment epithelium,RPE)内游离钙离子(Intracellular liber calcium ion,[Ca2+]i)浓度的影响。方法利用体外培养的视网膜色素上皮细胞,采用双波长荧光分光光度计测量法测定视网膜色素上皮细胞内[Ca2+]i浓度。结果空白组(A)133.4517±13.17789、凝血酶组(A1)192.2037±4.54292、水蛭组(A2)96.9935±8.80148、水蛭和凝血酶同时加组(A3)142.0867±26.47195、先加水蛭后加凝血酶组(A4)162.7284±29.13950、先加凝血酶后加水蛭组(A5)130.4810±20.48673。结论水蛭提取液能使RPE细胞内游离Ca2+浓度下降,为进一步深入研究水蛭提取液抑制RPE细胞增殖的作用机制,防治增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreo-retinopathy,PVR)提供了实验室依据。

Urocortin致心肌细胞肥大作用由细胞内游离钙离子升高诱导

目的探讨Urocortin(UCN)致心肌细胞肥大作用与细胞内游离钙离子([Ca2+]i)之间的关系。方法使用UCN0.1μmol.L-1诱导体外培养乳鼠心肌细胞肥大模型,通过计算机图像分析系统检测心肌细胞体积,荧光显微镜法测定细胞[Ca2+]i,Lowry法测定总蛋白水平,RT-PCR法测定ANP mRNA水平。结果与对照组相比UCN处理组细胞[Ca2+]i明显提高,细胞体积明显增大,所含总蛋白含量增加明显,ANP mRNA水平明显提高,且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 UCN能引起心肌细胞肥大,其过程与其引起的[Ca2+]i提高有一定关系。

新生儿缺氧缺血性脑病过程中红细胞内游离钙离子浓度的变化

新生儿缺氧缺血性脑病（hypoxic—ischemic encephalopathy，ⅢE）是由于各种围产因素引起的脑缺氧和脑血流减少或暂停而导致的胎儿和新生儿的脑损伤。钙离子内流和细胞内钙超载是其重要的发病机制之一。本研究在此基础上进一步研究缺氧损伤的重要机制“钙超载”．精确测定红细胞胞质内游离钙离子的绝对浓度。

硼对百合花粉萌发过程中细胞内游离钙离子的影响

利用激光共聚焦显微镜观察低温装载有钙离子荧光探针 fluo- 3的百合花粉细胞内游离钙离子与培养基中硼酸的关系 ,发现硼酸处理的百合花粉细胞内游离钙离子浓度明显高于无硼酸处理 ,而且硼酸浓度有关。 10 0μmol.L-1的硼酸处理在 10 min内显著诱导增加细胞内游离钙离子浓度 ;而培养某中加入有 Ca2 + 螯合剂 EGTA或非特异性质膜钙离子通道抑制剂 L a3 + 则不能诱导游离钙离子浓度升高。结果表明硼能促进细胞外的钙离子进入细胞内 。

抗抑郁新化合物SIPI-C和SIPI-F对PC12细胞内游离钙离子浓度的影响

目的研究抗抑郁新化合物SIPI-C和SIPI-F对PC12细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响,初步探讨其神经毒性的机制。方法 接种PC12细胞于经胶原Ⅰ包被的培养皿,加入钙离子荧光探针Fluo-3/AM染色后,用激光共聚焦显微镜分别记录①有钙外液中,10μmo.lL-1的SIPI-A,B,C和F对PC12细胞[Ca2+]i的影响;②有钙外液中,1,10和100μmol.L-1的SIPI-C和SIPI-F对[Ca2+]i的影响;③有钙外液中,硝苯地平10μmo.lL-1对10μmo.lL-1的SIPI-C或SIPI-F作用的影响;④无钙细胞外液中,10μmo.lL-1SIPI-C和SIPI-F对[Ca2+]i的影响。结果 有钙外液中,SIPI-A 10μmol.L-1给药后[Ca2+]i下降,10μmol.L-1的SIPI-B,SIPI-C和SIPI-F分别使[Ca2+]i增加27%(P<0.05),84%(P<0.05)和87%(P<0.01);SIPI-C和SIPI-F明显升高[Ca2+]i;同时给予SIPI-C 10μmol.L-1和硝苯地平10μmo.lL-1或SIPI-F 10μmo.l L-1和硝苯地平10μmo.lL-1,给药后荧光强度立即上升达到峰值,随后下降,[Ca2+]i分别增加24%和15%(P<0.05)。在无钙外液中,SIPI-C和SIPI-F 10μmo.lL-1分别使[Ca2+]i增加16%和18%(P<0.01)。结论 抗抑郁化合物SIPI-C和SIPI-F可以引起PC12细胞中[Ca2+]i显著增加,此影响可能与其神经毒性有关。

维拉帕米对大鼠胰腺腺泡细胞内游离钙离子浓度的影响及对胰腺细胞保护作用的研究

目的对缺氧再复氧引起胰腺腺泡细胞损伤的机制及维拉帕米的保护作用进行研究.方法通过对离体胰腺腺泡细胞给予缺氧再复氧处理,观察不同阶段胰腺腺泡细胞的存活率,脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的变化.同时应用显微荧光分光光度计和图象分析系统检测被荧光标记物标记的细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的变化.结果对照组4h细胞存活率为78.09%,缺氧组4h细胞存活率54.50%(P<0.05),缺氧3h再复氧1h细胞存活率为35.90%(P<0.01),缺氧3h再复氧1h,细胞内[Ca]i较对照组明显升高(P<0.01).缺氧再复氧组MDA含量较对照组明显增多(P<0.01),且高于缺氧组(P<0.05).用药组细胞存活单比非用药组明显升高(P<0.05),MDA含量明显降低(P<0.05),细胞内[Ca2+]i;含量明显减少(P<0.05).结论缺氧再复氧可引起大鼠胰腺腺泡细胞明显损伤,细胞死亡率上升.比单纯缺氧造成的急性损伤更为严重.脂质过氧化反应的增加和细胞内[CA2+]i超载是胰腺腺泡细胞损伤和死亡的重要原因.维拉帕米可以减少腺泡细胞脂质过氧化反应并减少细胞内[Ca2+]i超载.

全氟辛酸对大鼠星形胶质细胞内游离钙离子的影响

目的探讨全氟辛酸(perfluorooctanoic acid,PFOA)对新生大鼠星形胶质细胞(astrocytes,As)内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的影响。方法星形胶质细胞取材于新生24 h内清洁级Wistar大鼠。传代细胞达到80%融合时进行染毒(PFOA终浓度分别为0、50、100、200、500μmol/L)。以Fura-2/AM荧光探针法测定PFOA染毒1、2、3 h后星形胶质细胞内的([Ca2+]i)。结果星形胶质细胞内的[Ca2+]i随着PFOA剂量的增加和染毒时间的延长而增加,染毒1 h时500μmol/L剂量组星形胶质细胞内的[Ca2+]i为353.57 nmol/L,染毒2 h时达到528.37 nmol/L,均高于对照组(161.86、155.03 nmol/L),差异均有统计学意义(P<0.01)。当染毒3 h时,50、100、200、500μmol/L剂量组星形胶质细胞内的[Ca2+]i分别为320.93、396.43、601.26、476.20 nmol/L,均显著高于对照组(164.62 nmol/L)(P<0.01),同时也显著高于相同剂量染毒1 h的[Ca2+]i(P<0.01)。结论 PFOA可通过增加新生大鼠星形胶质细胞内[Ca2+]i而影响中枢神经系统钙平衡。

尼莫地平治疗妊娠高血压综合征及其对血小板细胞内游离钙离子浓度影响的研究

目的 探讨尼莫地平 (nim odipine NIM)治疗妊娠高血压综合征 (简称妊高征 )的临床效果及其对血小板细胞内游离钙离子浓度 (PF[Ca2 +]i)的影响。 方法 将 48例中、重度妊高征患者随机分组 ,给予尼莫地平或硫酸镁治疗 ,观察治疗前后血压、尿蛋白、PF[Ca2 +]i 及自觉症状等变化 ,比较两组妊娠结局。 结果 (1)尼莫地平治疗 1/ 2、1、2 h时血压较用药前明显下降 ,母心率增快 ,胎心率无明显变化 ;(2 )使用尼莫地平后 PF[Ca2 +]i 从用药前 (188± 30 ) nmol/ L降至用药后 (15 3± 19)nmol/ L(P<0 .0 0 1) ,PF[Ca2 +]i 降低值与平均动脉压下降值之间呈正相关关系 (r=0 .79,P<0 .0 0 1) ;(3)尼莫地平组先兆子患者自觉症状消失时间 (1.3± 1.5 ) h,较硫酸镁组 (3.2± 1.9) h短(P<0 .0 5 )。 结论 (1)尼莫地平与硫酸镁相比降压效果强且持久 ,能显著扩张脑血管 ,改善脑缺氧 ,快速缓解先兆子患者自觉症状 ,副作用小 ;(2 )

不同局麻药对新生大鼠原代心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

布比卡因快速入血或剂量过大可产生心肌毒性，甚至导致循环衰竭和心跳骤停，且药物复苏和心脏起搏成功率较低。左旋布比卡因、罗哌卡因与布比卡因相比麻醉效果相似、心脏毒性较小。钙离子是启动兴奋，收缩耦联过程的主要离子，细胞膜去极化时随钙通道开放钙离子跨膜内流，促使肌浆网钙离子释放，在局麻药心肌毒性中起重要作用。本实验拟研究不同局麻药对新生大鼠原代心室肌细胞内游离钙离子浓度（[Ca2＋]4）的影响。

脂氧素对脂多糖诱导的巨噬细胞游离钙浓度变化及活性氧的影响

近年来越来越多的研究资料表明炎症反应的及时消退是炎症治疗的重要环节.脂氧素对多种炎症细胞和炎症相关基因有显著的负性调节作用,是体内重要的内源性脂质促炎症消退介质.细胞内游离钙离子浓度变化为巨噬细胞活化的重要第二信使.但脂氧素对巨噬细胞内游离钙浓度变化了解较少.为此,本研究采用细胞内钙离子特异性荧光探针Fluo3-AM和活性氧特异性荧光探针DCFH-DA同时标记小鼠巨噬细胞,用激光共聚焦显微镜同时动态观察脂多糖引起巨噬细胞胞内游离钙浓度和活性氧变化及脂氧素的影响作用.

4-氨基吡啶对皮层神经元细胞内游离钙的影响

目的研究4-氨基吡啶(4-AP)对体外培养的皮层神经元细胞内游离钙浓度([Ca2+]i)的影响,了解4-AP的药理学作用机制.方法荧光探针Fluo-3-AM标记体外培养的皮层神经细胞内游离钙后,用共聚焦显微镜观察记录4-AP及L型谷氨酸对小鼠原代培养的皮层神经元[Ca2+]i的影响.结果4-AP与谷氨酸均能提高[Ca2+]i,两者峰值与持续时间存在差异,共同作用于细胞时的上升曲线与单用谷氨酸时相仿.结论4-AP的药理作用机制可能与提高神经细胞[Ca2+]i有关,其中机制与兴奋性氨基酸的[Ca2+]i升高作用可能不同.

肾综合征出血热患者血小板内游离钙离子浓度的变化

目的探讨肾综合征出血热(HFRS)患者血小板内游离钙离子浓度([Ca2+]i)与疾病的相关性。方法用流式细胞仪检测细胞中Fluo-3的荧光强度,对42例确诊的HFRS患者血小板内[Ca2+]i进行测定,并以30例正常人作为对照。结果检测显示,多尿期HFRS患者的[Ca2+]i显著高于正常对照组(P<0.01),而发热期、少尿期及恢复期的[Ca2+]i与对照组之间无统计学差异(P>0.05)。结论HFRS发病过程中有多种因素可以活化血小板,多尿期患者的血小板处于活化状态,而发热期和少尿期患者的血小板可能由于各种原因的功能缺陷导致其[Ca2+]i并不升高。

三七总皂甙诱导MSCs分化为神经元样细胞时胞内钙离子浓度变化的研究

目的探讨三七总皂甙(tPNS)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化为神经元样细胞过程中细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。方法LDMEM冲洗SD大鼠股骨骨髓腔,培养大鼠MSCs。选用第5代MSCs进行诱导分化,用含10μg/L碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)的LDMEM培养液预诱导24h,加入含10μmol/LFluo3/AM的LDMEM培养液负载30min,最后更换成含三七总皂甙0.25g/L的无血清培养液,同时在波长为488nm激光下扫描观测细胞形态和荧光强度的变化。结果更换三七总皂甙诱导液后,细胞内荧光强度逐渐增加,到100s达高峰值,其后逐渐减弱,但20min时细胞荧光强度仍高于诱导前,此时可见MSCs开始向神经元样细胞分化。结论三七总皂甙在体外诱导MSCs分化为神经元样细胞过程中胞内游离钙离子[Ca2+]i浓度升高。

不同频率电磁场对胆囊癌细胞内游离Ca^2＋浓度的影响

目的探讨不同频率的低功率电磁场对胆囊癌细胞内游离钙离子水平的影响及其意义.方法采用流式细胞仪检测不同频率电磁场作用后,胆囊癌细胞内游离钙离子(Ca2+)水平的变化.结果经不同频率(0.1 MHz～40 MHz)电磁场作用后,各实验组均可见细胞内游离Ca2+浓度上升,0.1 MHz和20 MHz作用后游离Ca2+浓度上升最为显著,有显著统计学意义,1 MHz和40 MHz作用后游离Ca2+浓度上升不明显,无统计学意义.结论 0.1 MHz～40 MHz范围低功率电磁场作用后引起胆囊癌细胞内游离Ca2+浓度升高,不同频率电磁场对游离钙离子升高的影响有明显差异.细胞膜上的不同分子有不同的谐振频率,推测0.1 MHz、20 MHz两频率可能与Ca2+离子回旋谐振频率有关,或与之产生某种偶联,对Ca2+离子产生明显作用,进而在细胞和分子水平产生生物效应.

阿魏酸钠对血小板源生长因子和内皮素1诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响

为探讨阿魏酸钠对血小板源生长因子二聚体和内皮素 1诱导的血管平滑肌细胞迁移的影响 ,采用组织块外生法体外培养血管平滑肌细胞 ,采用改良的Boyden微孔膜双槽法进行细胞迁移实验 ,荧光染料Fura 2 /AM法测定细胞内游离钙离子浓度。结果发现 ,血小板源生长因子二聚体和内皮素 1均可诱导血管平滑肌细胞迁移 ,作用峰值浓度分别为 10 μg/L和 10 - 7mol/L。阿魏酸钠 (10 - 7～ 10 - 3mol/L)呈浓度依赖性抑制上述物质诱导的细胞迁移 ,10 - 3mol/L阿魏酸钠对血小板源生长因子二聚体和内皮素 1诱导的细胞迁移的抑制率分别为 85 .0 4 %和 81.92 %。血小板源生长因子二聚体和内皮素 1促进细胞内游离钙离子浓度升高 (P <0 .0 5 ) ,作用峰值浓度分别为 10μg/L和 10 - 8mol/L。阿魏酸钠明显抑制该作用 ,峰抑制率分别为 80 .14 %和 76 .6 9%。以上提示 ,阿魏酸钠可能通过抑制细胞内游离钙离子浓度的升高来抑制上述物质诱导的血管平滑肌细胞迁移。