沉默TRPM7对大鼠心肌细胞游离Mg^(2+)影响的研究

目的:探讨沉默TRPM7对大鼠心肌细胞内游离Mg^(2+)浓度的影响。方法:大鼠心肌细胞原代培养、小干扰RNA技术(siRNA)、Western blot法检测TRPM7蛋白质表达情况,荧光显微镜检测细胞内Mg^(2+)浓度变化情况。结果:相比Nc siRNA组,TRPM7 siRNA转染大鼠心肌细胞48h后,TRPM7蛋白质的沉默效率为50.11%(P<0.05),胞内Mg^(2+)浓度降低33.05%(P<0.01)。结论:转染siRNA可有效沉默TRPM7蛋白(P<0.05),沉默TRPM7后大鼠心肌细胞胞内游离Mg^(2+)浓度显著降低,TRPM7是调控大鼠心肌细胞Mg^(2+)浓度的重要离子通道。

灵芝多糖对小鼠T细胞胞浆游离Ca^(2+)浓度和胞内pH的影响

目的通过考察灵芝多糖（ＧＬＰ）对免疫细胞信号转导过程的影响，探讨ＧＬＰ免疫调节作用机制。方法采用激光扫描共聚焦显微镜（ＬＳＣＭ）技术，动态监测ＧＬＰ均一体组分ＧＬＢ７对小鼠Ｔ细胞胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋）和胞内 ｐＨ（［ｐＨ］ｉ）的影响。结果 ＧＬＢ７（２０ｍｇ·Ｌ－１）引起小鼠 Ｔ细胞中［Ｃａ２＋］；和［ｐＨ］；明显升高，１ｍｉｎ即分别升高至３３４．７０％±１６，４％（ｎ＝３）、１７１．６％ ± １０．４％（ｎ＝３），之后一直分别维持在该平台期，至 １０ ｍｉｎ仍维持高峰水平。加入ＥＣＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理后， １０ ｍｉｎ ＧＬＢ７ 引起 Ｔ细胞［Ｃａ２＋］；和［ｐＨ］；分别升高为 ２０２．４％± １３．６％（ｎ＝３）。１４０．２％±７．８％（ｎ＝３），与正常对照组比较差异有显著性（Ｐ＜０．０1）。以 ＥＧＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理后，再分别以 ｈｅｐ－ｅｒｉｎ和 ｐrocaine处理细胞 １０ ｍｉｎ，之后以 ＧＬＢ７刺激Ｔ细胞，１０ｍｉｎ［Ｃａ２＋］ｉ值分别为１５１．５％±９．４％（ｎ＝３）、１４３．２％± ８．１ ％（ ｎ＝ ３），与 ＥＧＴＡ和 ｖｅｒａｐａｍｉｌ处理组相比差异有显著性（ Ｐ＜ ０．０１）。

牛磺酸和茵陈素对顺铂引起的原代培养肾小管上皮细胞内游离Ca^(2+)浓度变化的影响

目的 研究牛磺酸、茵陈素对顺铂引起的原代培养肾小管上皮细胞 (PTC)内游离Ca2 +浓度变化的影响。方法 在体外培养PTC、顺铂与PTC共同保温 2 4h ,牛磺酸、茵陈素分别提前与PTC作用 2 4h ,然后再加入顺铂 ( 2 6 μmol·L- 1 )共同保温 2 4h。采用Fura 2 AM测细胞内游离Ca2 +浓度。结果 顺铂 ( 13,2 6 ,5 2 μmol·L- 1 )升高PTC细胞内游离Ca2 +浓度 ,牛磺酸 ( 1,10g·L- 1 )和茵陈素 ( 4 ,8mg·L- 1 ) ,可拮抗顺铂导致的PTC细胞内游离Ca2 +浓度超载。结论 顺铂可引起原代培养肾小管上皮细胞内Ca2 +超载 ,牛磺酸、茵陈素能拮抗顺铂导致的细胞内Ca2 +超载 ,起到细胞保护作用。

绞股蓝总黄酮对缺氧心肌细胞损伤标记物及细胞内游离Ca^2＋浓度的影响

探讨绞股蓝总黄酮(TFG)对缺氧心肌细胞损伤标记物及细胞内游离Ca2+浓度的影响.在离体乳鼠心肌细胞原代培养基础上制备心肌细胞缺氧模型,随机分为正常对照组、缺氧损伤组和绞股监总黄酮干预缺氧损伤组.分别测定各组心肌培养基中乳酸脱氢酶(LDH)、肌钙蛋白I(cTn I)的含量,心肌细胞内游离Ca2+的浓度(荧光探针法).缺氧损伤组心肌培养基中LDH和cTnI的含量及心肌细胞内游离Ca2+浓度较正常对照组明显增加(P<0.05或0.01);经TFG干预后细胞培养基中LDH利cTnI的含量及心肌细胞内游离Ca2+浓度较缺氧损伤组明显降低(P<0.05或0.01).TFG对缺氧心肌细胞具有保护作用,其机理可能与减轻心肌细胞内钙超负荷有关.

大枣中性多糖对小鼠腹腔巨噬细胞胞浆游离Ca^(2+)浓度的影响

目的 :探讨大枣中性多糖 (JDP N)对小鼠腹腔巨噬细胞 (MΦ)胞浆游离Ca2 +浓度 ([Ca2 +]i)的影响。方法 :采用激光扫描共聚焦显微镜技术 (LSCM )测定 [Ca2 +]i。结果 :JDP N能引起MΦ内Ca2 +浓度 [Ca2 +]i明显升高 ,[Ca2 +]i的升高是由胞外Ca2 +内流和通过IICR(IP3 inducedcalciumrelease)和CICR(calcium inducedcalciumrelease)机制释放细胞内贮存Ca2 +引起。结论 :[Ca2 +]i升高是JDP

二醋吗啡对大鼠心肌细胞游离Ca^(2+)浓度的作用

目的观察二醋吗啡对心肌细胞内游离Ca2+浓度的作用。方法取自1～3d的SD大鼠培养的心肌细胞,用荧光探针Fluo-3/AM负载心肌细胞,不同浓度及不同剂量的二醋吗啡作用心肌细胞,激光共聚焦显微镜下检测Ca2+的变化。结果不同剂量及浓度的二醋吗啡对心肌细胞内游离Ca2+浓度有不同作用,一定浓度的二醋吗啡使心肌细胞内游离Ca2+浓度呈剂量依赖性的升高、短时间内心肌细胞[Ca2+]i荧光强度增强,并产生[Ca2+]i峰。结论探索出二醋吗啡导致心肌细胞内Ca2+变化的有效浓度,为进一步深入研究打下了基础。

盐胁迫对甜菊细胞内游离Ca^(2+)浓度的影响(简报)

钙离子不仅是植物生长发育所需的一种大量元素,而且起了偶联细胞外刺激与胞内反应第二信使的作用,是多种受体激动后信息传递过程的中心环节。近年的研究表明:高温、干旱、触摸、低渗、低温、风、机械刺激、病原菌感染等多种环境胁迫均能引起胞质Ca^(2+)水平的改变。这种变化被认为是植物细胞感受环境胁迫的原初反应之一,它通过启动基因表达和胞内一系列生理生化过程调节细胞对环境改变的适应反应。胞质Ca^(2+)水平的改变有两种来源:胞外Ca^(2+)跨膜内流和胞内钙库如内质网中的Ca^(2+)释放。

长春新碱诱导的自噬性凋亡与细胞内游离Ca^(2+)浓度的相关性研究

目的 研究长春新碱 (VCR)诱导的L 0 2细胞自噬性凋亡时细胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 +]i)的变化 ,以及自噬特异性抑制剂 3 methyladenine(3MA)对此自噬性凋亡和 [Ca2 +]i的影响。方法 应用已建立的VCR诱导L 0 2细胞自噬性凋亡模型 ,使用电镜、流式细胞术检测细胞凋亡 ;用Fluo 3/AM荧光探针经流式细胞仪测定L 0 2细胞平均 [Ca2 +]i。结果 电镜及流式细胞术检测证实VCR诱导L 0 2细胞发生了自噬性凋亡 ,此凋亡过程中 [Ca2 +]i明显升高 ,以凋亡早期更为明显 :3MA可显著抑制VCR所致的 [Ca2 +]i升高并能降低凋亡细胞比例。结论 在体外条件下VCR可以诱导L 0 2细胞自噬性凋亡 ,其发生可能与VCR导致 [Ca2 +]i升高有关 ;3MA可能通过抑制 [Ca2 +]i升高而抑制自噬及VCR所致的自噬性凋亡。

缺氧对肉鸡心肌细胞内游离Ca^(2+)浓度的影响

【目的】检测缺氧对肉鸡心肌细胞内Ca2+浓度的影响,阐明缺氧对心肌细胞影响的机制。【方法】利用体外细胞培养技术,以Fluo-3/AM为Ca2+指示剂,用LSCM检测缺氧对体外培养的肉鸡心肌细胞内游离Ca2+浓度的影响【。结果】与常氧组比较缺氧显著引起心肌细胞内游离Ca2+升高(常氧99.3±13.1;缺氧129.4±24.3,P<0.01),钙通道拮抗剂Verapamil(Ver)和Nifedipine(Nif)可显著抑制缺氧引起的游离Ca2+升高(缺氧+Ver100.9±28.2,缺氧+Nif107.6±27.7)。【结论】缺氧能够增强心肌细胞的游离Ca2+跨膜转运导致细胞内Ca2+浓度升高,Ca2+通道拮抗剂能够减弱缺氧引起的心肌细胞膜上Ca2+的跨膜转运。

NK细胞胞浆内游离Ca^(2+)浓度和分布的测定

目的 :确定NK细胞胞浆内Ca2 +的浓度及分布的检测方法。方法 :应用共聚焦激光扫描显微镜(CLSM)观察人外周血中NK细胞胞浆内Ca2 +的分布 ,并用Fluo- 3/AM和PluronicF - 12 7对胞浆内游离Ca2 +的浓度进行测定。结果 :最佳负载条件是用 2 μmol/ml的Fluo - 3/AM在 37℃恒温下孵育 6 0分钟 ,同时加入 1μl/ml 2 5 %的PluronicF - 12 7以阻断Ca2 +荧光示踪剂Fluo - 3/AM的外排和房室化。静息状态下NK细胞胞浆内Ca2 +分布不均衡 ,Ca2 +浓度为 91 3± 4 8nM( x±s)。结论 :应用Fluo - 3/AM和PluronicF - 12 7结合CLSM技术是研究NK细胞胞浆内游离Ca2 +的准确 ,简单 ,灵敏的方法之一。

Trpm7下调对大鼠心肌细胞游离Ca^(2+)浓度影响的研究

目的 TRPM7是心肌细胞内一种阳离子通道,对Mg^(2+)和Ca^(2+)都具有通透性。为了深入研究TRPM7基因在心肌细胞的功能,本试验试图研究下调TRPM7后大鼠心肌细胞内Ca^(2+)浓度的变化。方法大鼠心肌细胞的原代培养,心肌细胞存活度的测定,小干扰RNA(siRNA)技术,大鼠心肌细胞胞内游离Ca^(2+)荧光强度的检测。结果经过胞内游离Ca^(2+)荧光强度的检测发现下调TRPM7后大鼠心肌细胞内Ca^(2+)浓度无显著变化。结论调TRPM7后对心肌细胞钙的代谢没有显著影响。

测定蚕豆保卫细胞胞质中游离Ca^(2+)的荧光染料孵育法

采用孵育法将Ca2 + 荧光探针Fluo 3AM引入蚕豆保卫细胞 ,结合激光共聚焦扫描显微技术 ,测定了胞质游离Ca2 + 及外源刺激引起的Ca2 + 的动态变化。测得的蚕豆保卫细胞胞质游离Ca2 + 的浓度为几十至上百nmol·L-1之间 ,与胞质游离Ca2 +

豚鼠耳蜗Hensen细胞的分离、活性鉴定及其胞内静态游离Ca^(2+)分布

使用酶消化法及机械分离法对 Hensen细胞进行分离 ,置于倒置显微镜下用碘化丙啶及钙敏荧光染料 Fluo-3进行细胞活性鉴定并在激光扫描共聚焦显微镜下观察静息状态 Hensen细胞内的游离 Ca2 +的时空分布。结果证明 ,每个豚鼠耳蜗可以得到单离的 Hensen细胞 5～ 12个。细胞活性良好 ,可保持 5～ 6h。当细胞变性、坏死时可见一系列的形态学变化。对此得出几点判断 Hensen细胞活性的标准 :(1)细胞体呈卵圆形或椭圆形 ,大小可不一致 ;(2 )细胞膜完整 ,细胞边界清楚 ,折光现象明显 ;(3 )细胞浆清澈透明 ,无布朗运动 ,无溢出 ;(4 )细胞浆内的脂滴清晰可辨 ,折光现象明显 ;(5 )细胞无水肿 (即无气球样变 )。在静息状态下 ,Hensen细胞内的 Ca2 + 在细胞内分布不均匀 ,脂滴所在部位没有 Ca2 + 的分布。随时间延长 ,细胞内的 [Ca2 + ] i可小幅度振荡 ,但基本处于一种稳定状态。本工作为进一步对

1,25-(OH)_2D_3对肺纤维化大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞中Ca^(2+)浓度和PI3K/AKT/mTOR通路的影响

目的特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis,IPF)是一种慢性炎症性疾病,病因不明,缺乏有效的治疗方法。文中旨在探讨肺泡Ⅱ型上皮细胞中Ca^(2+)和PI3K/AKT/mTOR通路在大鼠IPF中的作用,以及1,25-(OH)_2D_3对Ca^(2+)浓度和PI3K/AKT/mTOR通路的影响。方法 150只雄性SD大鼠随机分为:预防组(对照组Ⅰ、模型组Ⅰ、给药组Ⅰ,每组20只)和治疗组(对照组Ⅱ、模型组Ⅱ、给药组Ⅱ,每组30只)。对照组Ⅰ/Ⅱ行气管暴露手术,气管内给以200μL/只的无菌等渗盐水,并分别于第2和14天开始腹腔注射等渗盐水(200μL/只);模型组Ⅰ/Ⅱ气管内灌注博来霉素(5 mg/kg),并分别于手术后第2和14天开始腹腔注射维生素D3的溶剂(0.1%乙醇和99.9%的丙二醇,1μL/g体重);给药组Ⅰ/Ⅱ气管内灌注博来霉素(5 mg/kg),并分别于手术后第2和14天开始腹腔注射1,25-(OH)_2D_3(2μg/kg体重)。大鼠气管内注射博来霉素建立IPF模型,给药组腹腔注射1,25-(OH)_2D_3进行预防和治疗。检测各组大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量,分离肺泡Ⅱ型上皮细胞并用Fluo-3AM荧光负载,激光共聚焦显微镜检测细胞内Ca^(2+)浓度。RT-PCR方法检测PI3K、AKT、mTOR mRNA的表达水平。结果模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中大鼠肺组织中羟脯氨酸的含量、肺泡Ⅱ型上皮细胞内Ca^(2+)浓度以及PI3K、AKT、mTOR mRNA表达,在各时间点与相应对照组Ⅰ/Ⅱ相比均明显升高(P<0.05或P<0.01);给药组Ⅰ/Ⅱ与模型组Ⅰ/Ⅱ相比,上述指标均有显著降低(P<0.05或P<0.01)。模型组Ⅰ/Ⅱ和给药组Ⅰ/Ⅱ中Ca^(2+)浓度与PI3K、AKT、mTOR mRNA表达之间具有显著正相关(r=0.598 8、r=0.623 0、r=0.6603,P<0.01;r=0.7012、r=0.6323、r=0.7403,P<0.01)。结论 PI3K-AKT-mTOR通路在大鼠IPF的发生发展中起重要作用,1,25-(OH)_2D_3可以降低肺泡Ⅱ型上皮细胞内Ca^(2+)的浓度,抑制PI3K-AKT-mTOR通路,进而抑制IPF的发生发展。

低强度激光引起线粒体功能及细胞内游离Ca^(2+)的变化

目的 研究低强度激光对心肌细胞线粒体功能及细胞内游离Ca2 + 的影响 ,探讨低强度激光提高脂质体介导的心肌细胞基因转染可能的发生机制。方法 对体外培养的Wistar大鼠心肌细胞给予低强度激光照射 ,激光波长 5 10 6nm ,功率密度为 1、5、10mW cm2 ,照射时间为6 0 0、12 0 0s ,使能量密度分别为 0 6、1 2、3、6、12J cm2 。同时设对照组。照射后 4 8h采用四唑盐 (MTT)比色法和激光共聚焦成像技术 ,分别测定细胞线粒体功能及细胞内游离Ca2 + 。结果 所有照射剂量均能显著提高心肌细胞线粒体功能 ,其中以 1 2J cm2 组的效应最明显 ,其光密度 (opticaldensity ,OD)值较对照组提高了 9 39倍 (1 0 0 6± 0 0 6 9 0 10 7± 0 0 0 7,P <0 0 1) ;其余各组OD值提高了 1 4～ 2 2倍 (P <0 0 5 )。细胞内游离Ca2 + 测定 ,各实验组均显著降低 (P <0 0 5 )。结论 低强度激光对脂质体介导的心肌细胞基因转染率的提高 ,与其增强细胞线粒体的功能有关 ,也可能与降低了细胞内游离Ca2 + 的含量 ,继而促进微管的聚合 ,增强细胞骨架的运输功能有关。

氧化性白内障中晶状体上皮细胞内Ca^(2+)浓度的变化

目的 通过测定过氧化氢诱发的白内障中晶状体上皮细胞内Ca^(2+)浓度的变化,探讨Ca^(2+)浓度的改变在氧化性白内障发生机制中的作用。方法 用过氧化氢诱发实验组离体培养的大鼠晶状体产生白内障,用Fura-2/AM荧光标记法测定晶状体上皮细胞胞浆内Ca^(2+)的浓度,并与对照组正常晶状体相比。结果 经过氧化氢作用的实验组,6、12和24h时,晶状体上皮细胞胞浆内Ca^(2+)浓度与对照组相比明显升高,差异有显著性(P=0.001,0.000,0.000)。结论 本研究证实过氧化氢作用于大鼠晶状体后,其上皮细胞内Ca^(2+)浓度明显升高,从而为Ca^(2+)依赖的蛋白水解酶如钙蛋白酶等的激活创造必要条件。

参麦注射液与氨茶碱对膈肌细胞Ca^(2+)浓度的影响

目的 :探讨参麦注射液与氨茶碱对膈肌细胞内游离Ca2 +浓度的影响。方法 :体外培养大鼠膈肌细胞 ,荧光光度法测定参麦注射液与氨茶碱处理前后细胞内Ca2 + 浓度的变化。结果 :氨茶碱可使膈肌细胞内的Ca2 + 浓度明显升高(P<0.01) ,维拉帕米或预先去除培养液中Ca2 + 可消除该作用。参麦注射液对膈肌细胞内Ca2 + 浓度无明显影响(P>0.05)。缺氧24h即可致膈肌细胞内Ca2 + 浓度明显升高(P<0.01) ,参麦注射液对缺氧24h所致的膈肌细胞内Ca2 + 浓度升高有抑制作用。结论 :细胞外Ca2 + 是氨茶碱导致细胞内Ca2 + 升高的关键因素 ,氨茶碱可通过促进细胞外Ca2 + 内流导致细胞内Ca2 + 升高。参麦注射液可抑制缺氧所致的膈肌细胞内Ca2 + 超载 ,对细胞有一定的保护作用。

低能量激光照射对受张力的成骨细胞周期和胞内Ca^(2+)浓度的影响

对成骨样细胞施加了周期性张力,探讨了成骨细胞MG-63受张力时的细胞周期和胞内Ca2+浓度的变化规律以及低能量激光照射(LLLI)对此变化规律的影响,揭示了LLLI促进骨形成的机制。实验首先将MG-63细胞随机分成对照组、加力组、激光加力组3组,用流式细胞术检测各组细胞周期。然后,将MG-63细胞分为张力组和激光张力组两组,对胞内Ca2+浓度变化进行测定,对2组细胞分别加力0,5,15,30,60min,再对激光张力组施加激光照射1min后收取细胞,并用荧光探针Fluo-3-AM测定成骨样细胞内Ca2+浓度和Ca2+阳性细胞百分比。结果显示:MG-63细胞加载张力后,细胞增殖指数提高,施加LLLI后受力的成骨细胞增殖指数进一步提高。张力引起胞内Ca2+浓度增加,变化剧烈,LLLI使变化曲线平缓,且胞内Ca2+浓度和Ca2+阳性细胞百分比增加。实验结果表明:LLLI可促进受张力的成骨细胞增殖,推测可能是通过调节成骨细胞内Ca2+浓度的变化规律和水平来完成的。

保卫细胞胞质中Ca^(2+)浓度变化与气孔开闭之间的关系

外界环境因素刺激 (环境胁迫、激素等 )引起保卫细胞内外Ca2 + 转移 ,进出胞质或进出液泡、内质网等细胞器 ,导致胞质中Ca2 + 浓度发生变化 ,从而最终制约着气孔的开闭。文章对保卫细胞胞质中Ca2 +