不同代数永生化支气管上皮细胞中蛋白质的分布特征

目的:采用凝胶分离、高效液相色谱/质谱联用技术对不同代数的永生化支气管上皮细胞加以研究,说明不同代数导致的蛋白质分布变化。方法:实验在大连化学物理研究所生物技术部生物分子高效分离与表征实验室完成。实验所用的样品MP49和MP188来自中国医学科学院,由程书钧院士友情提供。M细胞是中国医学科学院自行建立的永生化支气管上皮细胞系的第49代和188代,利用该实验室配制的无血清培养基进行常规细胞培养,收集培养液。采用凝胶分离、高效液相色谱/质谱联用技术对分泌到培养液中的分泌蛋白质进行特征分析。结果:MP49的蛋白的相对分子质量分布较广,几乎在10000～100000范围内都有蛋白质分布;MP188的蛋白主要集中在高分子量范围和低分子量范围内(Mr>60000,<10000)。MP49酶解产物中疏水性肽明显多于MP188。结论:在支气管上皮的恶性演变过程中寻找可能的癌症早期诊断蛋白质标记物,从亲水性较强的高分子量或低分子量蛋白质入手可能会得到更好的结果。

运用蛋白质组学研究三氧化二砷诱导K562细胞凋亡过程中核基质蛋白的变化

目的:探讨三氧化二砷 (As2O3 )在体外对慢性粒细胞性白血病细胞系K562细胞核基质蛋白的影响。方法:用DNA梯度电泳观察As2O3 作用后K562细胞凋亡的情况。单向、双向电泳观察As2O3 对K562细胞核基质蛋白分布影响。结果: 2. 5μmol/LAs2O3 处理 72h后,DNA电泳已能检测到发生凋亡的K562细胞,但早在As2O3 处理 48h时, 即能观察到核基质蛋白分布的改变,此时尚不能观察到凋亡特征性的DNA片段梯形条带。双向电泳可检测出 200多个核基质蛋白点,其中约 18个点与As2O3 处理相关。结论:As2O3 对K562细胞的影响是时间和剂量依赖性的。双向电泳检测As2O3 对K562核基质蛋白分布的影响较DNA梯度电泳检测更为敏感。核基质蛋白成分可能是砷作用的靶蛋白,并且可能是药物发挥抗癌作用的关键点之一。

乳腺癌细胞中p27^(kip1)分子相互作用蛋白质谱的改变

p27kip1是细胞周期重要的负性调控因子,在乳腺癌等多种肿瘤发生发展过程中发挥重要作用.乳腺癌细胞中p27kip1蛋白通常是低丰度表达和错位分布,导致这种分布和表达改变的确切机制并不明确.已有研究表明,p27kip1磷酸化是重要的调节途径之一,细胞内外信号分子通过多种途径调节p27kip1的分布和表达.为了进一步阐明肿瘤细胞内调节p27kip1功能的分子机制,必须首先明确p27kip1在肿瘤细胞与正常细胞中相互作用蛋白质谱的差异.包括细胞周期素、周期素依赖性激酶、CRM1、jab1、Skp2等在内的多种分子可以与p27kip1发生相互作用.在乳腺癌细胞中还有几种特异的作用分子.在不同细胞周期和不同细胞内分布状态下,p27kip1蛋白有不同的相互作用蛋白质谱.因此,我们推断在乳腺癌细胞内p27kip1分子相互作用蛋白质谱的差异可能是导致其低表达和错位分布的主要机制.

原发性高血压患者尿微量白蛋白、超敏C反应蛋白、红细胞体积分布宽度间关系及临床意义

目的探讨原发性高血压患者尿微量白蛋白（MAU）、超敏C反应蛋白（hs—CRP）、红细胞体积分布宽度（RDW）间关系及MAU危险因素。方法选择原发性高血压患者111例，按血压分级分为3组，高血压1级组14例，2级组42例，3级组55例。检测患者三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL—C）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、hs—CRP、RDW、MAU、肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）、糖化血红蛋白（HbA1c）、腰臀比（WHR）、体质量指数（BMI），询问高血压病程，调查有无吸烟、饮酒、糖尿病、冠心病病史等危险因素。结果3组比较，年龄、TC、TG、LDL—C、HDL—C、高血压病程、Scr、BUN、HbA1c、WHR、BMI、性别、吸烟、饮酒、糖尿病、冠心病病史差异均无统计学意义；而3组间MAU、hs—CRP、RDW差异均有统计学意义，高血压3级组较1级、2级组明屁升高[MAU：高血压1级组：（6．00±4．87）mg／24h，2级组：（7．37±5．86）mg／24h，3级组：（10．80±7．24）mg／24h；hs—CRP：高血压1级组：（1．11±0．48）mg／L，2级组：（0．90±0．35）mg／L，3级组：（1．49±0．79）mg／L；RDW：高血压1级组：（12．09±0．57）CV％，2级组：（12．20±0．69）CV％，3级组：（12．51±0．47）CV％，均为P〈0．05]；hs-CRP与MAU、RDW均呈正相关（r=0．336，P=0．002；r=0．269，P=0．042），MAU与RDW亦呈正相关（r=0．278，P=0．044）；Logistic多元回归分析显示，Scr（OR=1．131，P=0．032）、hs—CRP（OR=4．752，P=0．048）、RDW（OR=9．888，P=0．028）、糖尿病（OR=29．398，P=0．009）进入回归方程，是MAU的独立危险因素。结论原发性高血压患者MAU、hs—CRP、RDW互为相关，廊Scr、hs—CRP、RDW和糖尿病是高血压患者MAU的独立危险因素。MAU用于评估高血压患者发生肾脏并发症的危险程度及其治疗效果具有重要意义。

信号肽序列及其在蛋白质表达中的应用

信号肽在蛋白分泌的过程中起重要作用,分泌性蛋白质合成后由信号肽引导其穿过合成所在的细胞到其他组织细胞中。可以利用因特网在线工具和信号序列捕获系统来判定基因序列中是否含有信号肽序列。外源蛋白的表达形式多为细胞内不溶性表达(包涵体),少数为细胞外分泌表达。利用信号肽来引导外源蛋白分泌可避免因包涵体复性带来的困难。研究表明,多种外源基因连接上信号肽后在原核表达系统如大肠杆菌、L型细菌、芽孢杆菌和乳酸杆菌中等都得到了分泌表达;信号肽也广泛应用于真核表达系统如毕赤酵母和昆虫杆状病毒表达系统,以提高蛋白的表达量。

2型糖尿病患者超敏C反应蛋白及红细胞体积分布宽度检测的临床意义

目的探讨超敏C反应蛋白(hs-CRP)及红细胞体积分布宽度(RDW)在2型糖尿病早期血管病变诊断中的临床意义。方法检测130例2型糖尿病患者(分为单纯糖尿病组91例及合并血管病变组39例)和65例健康者(对照组)RDW及hs-CRP。结果糖尿病各组与对照组比较,hs-CRP和RDW差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 hs-CRP和RDW的检测可为诊断糖尿病早期血管病变提供重要的临床依据。

以蛋白质作为传染因子的病

在生物学上曾认为传染性疾病的传播源必定要具有遗传物质——核酸（DNA、RNA）才会使寄主感染致病，就如病毒这样最简单的生命形式也是依靠将自己的核酸整合到寄主细胞的DNA上并复制自己的DNA（RNA）和蛋白质来进行增殖的。但在20世纪随着医学科学的发展和对一些特殊病例的研究，发现了一些特殊蛋白质（也有一些正常的蛋白质经诱导变形后）也会成为疾病的传染源。

红细胞参数和血浆蛋白对脑梗死早期进展及预后的影响

目的探讨脑梗死患者红细胞分布宽度及血浆白蛋白水平对脑梗死进展、预后及再发的影响。方法分析105例脑梗死患者临床资料,将病情在早期呈逐渐进展或阶梯式加重的患者归为进展型卒中组,其余归为完全型卒中组;根据脑梗死发生3个月、18个月后m RS评分情况分为短期和远期预后良好组及预后不良组;以18个月内是否再发脑梗死分再发组和未再发组。比较不同分组情况下患者的红细胞参数和血浆蛋白水平。结果进展型卒中组较完全型卒中组平均红细胞体积(f L:85.92±4.50 vs 83.79±4.64,t=2.164,P<0.05)、红细胞分布宽度(f L:13.50±2.45 vs 11.90±2.90,t=2.694,P<0.01)和球蛋白(g/L:27.46±4.33 vs 24.79±4.03,t=3.029,P<0.01)高,白蛋白低(g/L:39.00±3.86 vs 42.89±4.45,t=4.242,P<0.01),差异均有统计学意义;高红细胞分布宽度、低白蛋白水平是进展型卒中的危险因素;短期预后不良组红细胞分布宽度高于预后良好组(f L:13.90±2.45 vs 12.00±2.12,t=2.905,P<0.01);红细胞分布宽度与脑梗死3个月、18个月后m RS评分正相关(P<0.01)。结论高红细胞分布宽度和低白蛋白的脑梗死患者进展型卒中发生率增加,红细胞分布宽度对预测脑梗死预后具有一定的参考价值。

细胞内分布克隆——一种新的功能性基因克隆方法

明确蛋白质的细胞内定位对了解蛋白质的功能有很强的提示作用。近年来随着对蛋白质细胞内定位信号和转运机理的深入了解,建立了根据蛋白质分子在细胞内的特殊定位进行快速功能性基因克隆的方法,即细胞内分布克隆。其筛选基础可以是形态学的,也可以是功能上的。利用这些方法克隆了许多定位于特定细胞器但功能未知的蛋白基因。本文对这些方法及其进展进行综述。

2型糖尿病患者红细胞体积分布宽度与肾功能的关系

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者红细胞体积分布宽度(RDW)与肾功能的关系。方法检测并比较分析84例单纯T2DM患者、60糖尿病肾病(DN)患者和100例健康对照者RDW、血尿素(Urea)、血肌酐(Cr)、尿微量清蛋白(UmAlb)、尿微量清蛋白/尿肌酐比值(UmAlb/UCr)的水平,根据结果进行统计学分析。结果 DN组RDW、Urea、Cr、UmAlb、UmAlb/UCr水平均较单纯T2DM组和对照组显著升高(P<0.01);与对照组相比,单纯T2DM组RDW、UmAlb水平及UmAlb/UCr显著升高(P<0.01);相关性分析显示T2DM患者RDW与UmAlb/UCr(r=0.284,P=0.000)、病程(r=0.167,P=0.041)呈显著正相关。结论 RDW水平可反映T2DM患者的早期肾损伤,对DN的预防和诊断均有重要的临床价值。

红细胞分布宽度对急性胰腺炎严重程度及预后判断的价值

目的探讨红细胞分布宽度(RDW)对急性胰腺炎严重程度及预后判断的价值。方法选择急性胰腺炎患者122例,根据疾病严重程度分为重症急性胰腺炎(SAP)组59例、轻型急性胰腺炎(MAP)组63例。比较两组RDW、降钙素原(PCT)、C反应蛋白(CRP)、APACHEⅡ评分的差异。逆向收集SAP患者中存活者与死亡者的RDW、PCT、CRP、APACHEⅡ评分,并分析RDW与PCT、CRP、APACHEⅡ评分的关系。结果SAP组RDW、APACHEⅡ评分、PCT、CRP均较MAP组明显升高(P均<0.05);在SAP患者中,死亡者RDW水平高于存活者(P<0.01)。相关分析显示,SAP患者RDW与PCT、CRP、APACHEⅡ评分均呈正相关(r分别为0.804、0.601、0.723,P均<0.05)。结论 RDW可作为评估急性胰腺炎严重程度的指标,并且对判断患者预后有较高价值。

tRNA核质动态分布与细胞命运

旺盛的细胞核、质间的物质运输(nuclear-cytoplasmic transport)是真核细胞代谢的基础.核质运输不仅将蛋白质运到目的地,还能通过在特定时间、地点结合靶分子,改变其在胞内的局部浓度,调控诸如有丝分裂等重要细胞活动.tRNA是细胞中最重要的大分子之一,合成于细胞核,在细胞质中参加蛋白质翻译.一直以来,学术界认为tRNA只是蛋白质合成的参与者,tRNA核质运输是tRNA跨越核膜进入细胞质是单向主动运输过程.然而,最近的研究成果在颠覆传统观念,tRNA不但能被转运出核,还能被逆向转运入核.2008年,新概念"tRNA核质动态分布"(tRNA nuclear-cytoplasmic dynamics)被提出,取代tRNA核质运输,描述tRNA在细胞核、质间的流动.在酿酒酵母中tRNA核质动态分布可以调控蛋白质翻译,锁定细胞周期.此领域内的最新研究正在改变着教科书中有关tRNA的传统论断.

维持性血液透析患者红细胞分布宽度与蛋白质能量消耗的相关性研究

目的探讨维持性血液透析(MHD)患者红细胞分布宽度(RDW)与蛋白质能量消耗(PEW)之间的关系。方法采用多中心横断面研究,收集2018年6-8月贵州省8家血液透析中心MHD患者的一般资料、实验室指标,同时进行物理测量及人体成分分析。根据血常规中RDW的四分位间距将研究对象分为4组,比较组间各指标的差异,采用Logistic回归分析RDW与PEW发病的关系,同时应用ROC曲线评估RDW对MHD患者PEW的预测价值。结果共纳入资料完整的研究对象594例,按RDW四分位分组(Q1、Q2、Q3、Q4)。通过Logistic回归分析,在未校正模型中,Q4组MHD患者的PEW发病风险为Q1组患者的2.583倍(95%CI 1.588~4.202, P<0.001);在校正年龄、性别、糖尿病、透析龄、血红蛋白、血磷、丙氨酸氨基转移酶、天冬氨酸氨基转移酶的模型中,RDW与MHD患者PEW发病风险仍有关,Q4组PEW发病风险为Q1组患者的2.197倍(95%CI 1.306~3.698, P<0.005)。采用受试者工作特征曲线(ROC曲线)分析,RDW对MHD患者PEW发病最佳预测阈值为15.6%,灵敏度、特异度分别为40.35%、78.72%,曲线下面积为0.611(95%CI 0.570~0.650,P<0.0001)。结论 RDW与MHD患者PEW的发生有关,对MHD患者PEW发病有预测价值。

人肾小球足细胞表达Nephrin的体外研究

目的:观察人足细胞在体外表达Nephrin的分子量大小、细胞内分布。方法:体外培养人肾小球足细胞,采用间接免疫荧光法、免疫蛋白印迹研究原代培养人足细胞表达Nephrin的分布、蛋白质的分子量,逆转录PCR(RT-PCR)法检测Nephrin的mRNA表达等,RT-PCR产物进行序列分析加以确定。结果:体外原代培养的人足细胞可以表达Nephrin,间接免疫荧光显示其沿足细胞的细胞膜、细胞骨架和细胞核分布,并且在细胞内有一聚集中心。免疫蛋白印迹示人足细胞表达2种分子量的Nephrin,其中135kD的分子量与预期分子量一致,180kD的分子量与肾小球蛋白提取物一致,RT-PCR从基因水平确定了该蛋白的表达。结论:人足细胞在体外培养的条件下表达不同分子量的Nephrin,并且在细胞内分布具有一定的规律,为进一步研究其在自身细胞和肾脏病中的作用提供了可靠的实验方法。

细胞相接种加速污泥颗粒化过程研究

为研究污泥接种对好氧颗粒污泥形成过程的影响,采用原生污泥和污泥去除胞外聚合物(EPS)后的细胞相(pellet)对反应器进行接种。结果表明,pellet接种培养出的好氧颗粒污泥比原生污泥接种培养的污泥颗粒更大,且生成速率更快,即pellet可以加速好氧颗粒污泥的培养过程。2种接种条件下的蛋白质、多糖的相对分子质量分布对比结果进一步表明,超声波处理去除包裹在细胞外的EPS后,加速了pellet中细胞对新基质的利用,形成了更多的大分子有机物,致使pellet接种培养加速了好氧污泥颗粒化过程。

双亮氨酸模体对NOK/STYK1蛋白的表达及细胞内分布特征的影响

NOK(novel oncogene with kinase domain)蛋白是一种新的在结构上比较独特的受体型酪氨酸蛋白激酶家族(protein tyrosine kinases,PTKs)成员,具有较强的促肿瘤形成及转移的能力,并参与细胞的内吞过程。基因结构序列分析结果表明,在NOK氨基酸序列中存在多处双亮氨酸模体(di-leucine motif)。有研究表明,双亮氨酸模体在细胞的内吞、膜泡运输以及细胞信号分拣等过程中具有重要作用。为此,该研究构建了一系列NOK蛋白双亮氨酸模体突变体,并在He La细胞中分析了其蛋白质表达水平及细胞内分布特征。结果表明,NOK蛋白的不同双亮氨酸模体的突变可导致NOK蛋白在细胞中表达量的改变。与对照相比,NOKL220P表达量明显提高,而NOKL237P表达量降低。从NOK蛋白在细胞内的分布特征来看,不同双亮氨酸模体的突变同样会引起NOK蛋白在细胞内分布的改变,包括NOK蛋白形成聚集体的细胞比例、在细胞中的分布位置以及聚集体的大小和数量的不同。特别是NOKL203P、NOK237P以及L299P三个位置的突变可以显著地降低NOK蛋白在细胞中的聚集。不仅如此,过量表达NOKL41P还表现出了更为明显的核膜定位特征,而L220P则表现出了更为明显的质膜定位特征。由此说明,NOK的不同双亮氨酸模体对其蛋白质表达水平以及在细胞内的定位分布具有重要的调节作用,该研究为阐明NOK蛋白促肿瘤形成及转移的分子机理提供了新的见解。

水牛卵母细胞在体外成熟中的CGs变化规律

用FITC-LCA标记不同体外成熟时间、体外受精时间的水牛卯母细胞的CGs,然后用激光共聚焦显微镜检测其分布情况。结果发现,CGs在水牛卵母细胞体外成熟培养前,70.1%卵母细胞的CGs呈现中间分布,体外成熟16 h后,CGs呈皮层分布的卯母细胞比例增多,达到22.1%。

细胞“腔”内隐藏导致疾病的线索

探明细胞(caveola)内小室(亦称微小洞穴)内的化学物质一直是研究者的本源矿脉。去年,细胞生物学家首先从细胞表面分离出这些“微小洞穴”。现在,两个研究组使用两种方法和两种类型的组织得到了相似的结论。

淀粉渣固态转化蛋白饲料

淀粉渣固态转化蛋白饲料该项技术是利用淀粉厂的废渣、废水、黄浆等下脚料经发酵技术转化而成单细胞蛋白饲料。本产品可代替鱼粉进行喂养家禽、家畜、鱼虾等，不仅扩大了饲料来源，而且减轻了环境污染，充分利用了废渣废料。实际生产中淀粉渣占玉米投料的２６％。相当于淀...

RDW与衰弱老年急性心肌梗死病人短期预后的关系

目的探讨红细胞体积分布宽度(RDW)与衰弱老年急性心肌梗死(AMI)病人短期预后关系。方法选取2012年12月—2016年12月入住我院并且诊断为AMI的衰弱老年病人669例,根据总体RDW的四分位数分为4组,比较4组病人的住院病死率。通过ROC曲线估算RDW的诊断截点,并根据此截点将病人分为2组进行生存分析,再通过寿命表法、COX回归分析评估RDW的预后预测价值。结果随着RDW的增大,病人的住院死亡率增加,差异有统计学意义(χ~2=30.230,P<0.01)。RDW的ROC曲线下面积为0.66(95%CI=0.556～0.704,P<0.01),并由此推算出RDW的诊断截点为13.05%(灵敏度55.8%、特异度68.8%)。COX回归分析结果显示,RDW不是影响衰弱老年AMI病人住院死亡率的独立危险因素。结论 RDW并不是衰弱老年AMI病人短期预后的独立危险因素。