蛋白酶激活受体2在人角质形成细胞中的表达及功能测定

目的分析人皮肤角质形成细胞中蛋白酶激活受体2（PAR2）的表达及其生物学功能，探讨其在皮肤屏障中的作用。方法以体外培养的人皮肤角质形成细胞原代细胞或细胞系N／／TERT细胞为研究对象，通过免疫荧光染色及蛋白印迹分析细胞中PAR2的表达及分布特点，采用荧光标记的钙流释放法测定PAR2的生物学功能，利用PAR2的天然底物胰蛋白酶或其激活肽、对照肽及拈抗肽诱导PAR2的活化，观察不同作用底物诱导PAR2活化的特点。结果在正常培养条件下，PAR2在皮肤角质形成细胞中呈中低水平表达，不同的培养基组成及培养时间对PAR2的表达水平无明显影响。PAR2的作用底物诱导细胞的钙流释放具有时间及浓度依赖性特点，其中使用50～250nm01]L胰蛋白酶作用于角质形成细胞后，可以诱导细胞内钙流释放；使用75～250μmol／LPAR2特异性激活肽PAR2-AP（H2N-SLIGKV-COOH）处理角质形成细胞后，即可最大程度地诱发PAR2的活化。而在相同浓度PAR2的拮抗肽PAR2-ANTAP（H2N—FSLLRY—COOH）作用下，PAR2的作用底物所诱导的细胞钙流释放明显受到抑制。分析比较相关荧光强度发现，PAR2激活底物诱导的细胞内钙流释放可以在瞬间（0—250s）完成，以50S的作用时间点细胞内钙流释放强度最大。此外，PAR2的激活可以显著增加皮肤角质形成细胞ERK蛋白的磷酸化水平，从而激发细胞内MAPK信号转导通路。结论皮肤角质形成细胞表面表达有PAR2受体，该受体活化受胰蛋白酶及PAR2的特异性激活肽调控，PAR2的活化可影响角质形成细胞的生理功能，诱导细胞内钙流释放。