脐带血有核细胞不同提取和保存方法的比较

目的:通过对脐带血有核细胞(CBNC)的提取和保存方法探讨,为脐带血有核细胞分离、储存和应用提供科学依据。方法:采用3种方法(Ficoll-Paque分离液法、1%甲基纤维素法、红细胞裂解法)分离CBNC,并应用不同储存液在不同时间对细胞进行冷冻和复苏培养。结果:红细胞裂解液法分离所获得的有核细胞数分别是Ficoll-Paque分离液方法的2.9倍(P<0.05)和1%甲基纤维素分离方法的10倍(P<0.01);且红细胞裂解液法所得有核细胞种类(包括淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞)也明显增多;细胞集落形成率与前两种方法比较亦有显著性差异。H3-TdR掺入的细胞活力观察发现,在4℃和20℃条件下存放24h,不同温度下细胞活力没有明显改变。以人脐血血清+DMSO为保护液在液氮储存CBNC 1年,复苏后仍有很强的细胞集落形成能力。结论:应用红细胞裂解液分离提取CBNC获得的细胞数量和种类优于其他两种方法。CBNC冻存时适当加入人脐血清,复苏后克隆形成能力明显增强。