二十二碳六烯酸联合顺铂对胃癌细胞MGC-803增殖及凋亡的影响

目的研究二十二碳六烯酸(DHA)联合顺铂(DDP)对人胃癌MGC-803细胞增殖及凋亡的影响,并探讨机制。方法MTT检测DHA联合DDP对MGC-803细胞增殖影响,计算IC50及Q值;DAPI染色观察细胞凋亡及形态;FCM检测细胞周期及凋亡率;细胞免疫组化法检测survivin、NF-κB蛋白的表达。结果DHA对MGC-803细胞增殖呈时间剂量依赖性抑制作用,联合DDP后增殖抑制作用变强。Q>0.85,DHA协同增强DDP作用;DAPI染色后观察到细胞凋亡;DHA联合DDP较单药组凋亡率升高(P<0.05);联合组G0/G1期细胞增多(P<0.01),G2/M及S期细胞减少更明显(P=0.01)。联合组survivin、NF-κB蛋白表达水平低于单药组(P<0.05)。结论DHA可协同抑制MGC803细胞体外增殖,可能与调控细胞周期及下调survivin、NF-κB蛋白的表达,诱导细胞凋亡、提高化疗敏感性有关。

二十二碳六烯酸对低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:观察二十二碳六烯酸(DHA)在动物整体水平的抗大鼠肺动脉高压作用及其对肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响。方法:将雄性SD大鼠随机分为常氧组、低氧组、低氧DHA处理组,每组7只。大鼠缺氧肺动脉高压模型采用慢性间歇性低氧方法建立,通过右心导管法测定大鼠平均肺动脉压,精确称左右心室质量计算右心室指数,测定肺动脉平滑肌细胞凋亡率和Caspase3、Caspase9活性。结果:与常氧组比较,低氧组大鼠平均肺动脉压和右心室指数均明显升高(P<0.01),肺动脉平滑肌细胞凋亡率、Caspase3和Caspase9活性均显著下降(P<0.01);与低氧组比较,低氧DHA处理组大鼠平均肺动脉压和右心室指数均显著下降(P<0.01),肺动脉平滑肌细胞凋亡率、Caspase3和Caspase9活性均明显升高(P<0.01)。结论:DHA具有抗大鼠肺动脉高压作用,其机制与促进肺动脉平滑肌细胞凋亡有关。

二十二碳六烯酸(DHA)复合物对胃腺癌细胞内H-Ras和p16 mRNA含量的影响

目的研究DHA复合物抗肿瘤作用机理。方法用RT-PCR法研究DHA复合物对胃腺癌细胞内H-Ras和p16mRNA含量的影响。结果与阴性对照组相比,DHA复合物使胃腺癌细胞内H-RasmRNA含量明显降低(P<0.05),p16mRNA含量明显增加(P<0.05).结论DHA复合物能显著降低H-Ras癌基因的转录,并能显著增加p16押癌基因的转录,从而抑制肿瘤细胞的增殖。

二十二碳六烯酸对人胰腺癌细胞生长抑制作用的分析

目的:分析二十二碳六烯酸对人胰腺癌细胞生长的抑制作用。方法:行细胞培养后运用噻唑蓝比色(MTT)法检测人胰腺癌细胞的增殖,采用流式细胞术检测人胰腺癌细胞的凋亡、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、环氧合酶-2(COX-2)的表达,统计分析不同浓度的DHA培养液培养24 h、48 h、72 h人胰腺癌细胞的存活率、凋亡率,并统计分析不同浓度的DHA培养液培养48 h人胰腺癌细胞的细胞周期分布及不同浓度的DHA培养液培养24 h人胰腺癌细胞Bcl-2、COX-2的表达。结果:0μg/mL、2.5μg/mL、5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的DHA培养液培养24 h、48 h、72 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞的存活率均随DHA培养液浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的DHA培养液培养24 h、48 h、72 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞的凋亡率均随DHA培养液浓度的升高而逐渐升高(P<0.05)。0μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、50μg/mL的DHA培养液培养48 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞的G_(0)~G_(1)期、G_(2)~M期细胞占比均随DHA培养液浓度的升高而逐渐升高(P<0.05),S期细胞占比均随DHA培养液浓度的升高而逐渐降低(P<0.05)。0μg/mL的DHA培养液培养24 h人胰腺癌SW1990、Patu8988细胞Bcl-2、COX-2的表达水平、蛋白荧光值均高于50μg/mL(P<0.05)。结论:DHA可抑制人胰腺癌细胞的生长,途径可能为下调人胰腺癌细胞中的Bcl-2、COX-2表达。

二十二碳六烯酸预处理增强大鼠脑胶质细胞对氧糖剥夺条件下脑血管内皮细胞的保护作用

目的评价二十二碳六烯酸(DHA)预处理是否增强脑胶质细胞对氧糖剥夺(OGD)条件下脑血管内皮细胞的保护作用。方法原代培养的胶质细胞,分别在正常氧含量或低氧条件培养24 h,收集各组培养上清液。再将原代培养的血管内皮细胞按实验设计分别与胶质细胞培养上清液共培养。利用流式技术检测凋亡率,Western检测Bax、bcl-2、caspase-3、p Tie-2、p Akt、ZO-1。结果经DHA预处理后的胶质细胞培养上清液能够降低低氧条件下血管内皮细胞的凋亡(P<0.01),降低Bax、caspase-3的表达(P<0.01),而增加bcl-2、bcl-2/Bax、p Tie-2、p Akt、ZO-1表达(P<0.01)。结论 DHA预处理能够增强脑胶质细胞对氧糖剥夺条件下血管内皮细胞的保护作用。其机制可能与增加Ang1分泌、激活Tie-2受体、从而促进抗凋亡作用相关。

二十二碳六烯酸增强5氟尿嘧啶对人肝癌细胞的细胞毒活性

目的研究二十二碳六烯酸(DHA)联合5氟尿嘧啶(5-Fu)对肝癌细胞增殖、凋亡的影响。方法 CCK8法检测DHA联合5-Fu对肝癌细胞HepG2细胞增殖的影响;流式细胞仪检测DHA联合5-Fu对HepG2细胞凋亡的影响;RT-PCR检测DHA及5-Fu处理后HepG2细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的变化。结果 DHA联合5-Fu较单用5-Fu能更加明显抑制HepG2细胞的增殖,凋亡率分别为23.7%,13.2%。经DHA处理后HepG2细胞中Bcl-2表达下降,联合5-Fu后Bcl-2表达进一步减少,Bax表达则无明显改变。结论 DHA联合5-Fu能有效的抑制Bcl2的表达,从而发挥抑制肝癌细胞增殖、诱导肝癌细胞凋亡的效应。

12-羟基二十碳四烯酸与细胞增殖及凋亡关系研究进展

细胞维持正常增殖需要体内复杂而精密的调控，其中细胞内信号转导是极其重要的一方面，若细胞内的信号转导调控失调导致细胞恶性增殖就会形成肿瘤。众多研究表明，花生四烯酸的代谢产物12-羟基二十碳四烯酸（12-HETE）与正常细胞及癌变细胞的增殖、迁移密切相关。大多数肿瘤细胞都可产生12-HETE，在肿瘤发生时，较高的12-HETE浓度是重要的信号分子，并在多条信号途径中起重要作用。本文现就12-HETE与细胞增殖及凋亡关系的研究进展作一综述。

MAPKs信号转导通路在DHA诱导胃癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨二十二碳六烯酸(DHA)对人胃癌细胞系SGC-7901的作用及对MAPKs信号转导通路中ERK1/2通路蛋白及凋亡蛋白caspase-3表达的影响。方法:采用MTT法及流式细胞仪技术对细胞增殖和凋亡进行观察和分析;应用Westernblot技术检测不同浓度的DHA诱导胃癌细胞的丝裂原活化蛋白激酶ERK1/2及其磷酸化水平的表达以及其下游通路中凋亡蛋白caspase-3的表达。结果:DHA对于SGC-7901胃癌细胞的增殖有明显抑制作用,呈现时间和浓度依赖性(P<0.01)。DHA可诱导SGC-7901细胞凋亡,凋亡率随DHA的作用浓度增加而增加(P<0.01)。ERK1/2在对照组和不同DHA浓度组稳定表达,且表达无差异;P-ERK1/2活性随DHA作用浓度的增高而降低,差异有统计学意义(P<0.05);caspase-3随着DHA浓度的增高表达不断增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:DHA可能通过下调ERK1/2的磷酸化过程,激活凋亡蛋白caspase-3的表达,诱导胃癌细胞的凋亡。

二十二碳六烯酸对人胆囊癌GBC-SD细胞系生长的抑制作用

目的探讨二十二碳六烯酸(DHA)对体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞增殖的影响。方法采用体外细胞培养的方法,在处于指数生长期的GBC-SD细胞培养剂RPMI 1640中分别添加12.5μg/ml、25μg/ml、50μg/ml的DHA,培养24～72小时后,采用噻唑蓝法(MTT法)检测GBC-SD细胞的增殖情况,光镜下观察细胞形态变化。采用DNA琼脂糖凝胶电泳、Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜检测GBC-SD细胞的凋亡情况。结果经12.5μg/ml的DHA作用24～72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05),光镜下细胞形态无明显改变.经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24～72小时后GBC-SD细胞的A值与对照组比较差别有统计学意义(P<0.05),光镜下见细胞皱缩、核染色质凝聚、边集。细胞经25μg/ml、50μg/ml的DHA作用24小时后,DNA琼脂糖凝胶电泳显示DNA裂解片段出现阶梯状条带,经Annexin V-FITC/PI染色荧光显微镜下观察与对照组比较见较多绿色荧光。结论DHA可以抑制人胆囊癌GBC-SD细胞系的增殖并诱导其凋亡。

DHA诱导胃癌细胞凋亡中MAPKs信号转导通路的作用分析

为探讨DHA对胃癌细胞凋亡中MAPKs信号转导通路的诱导作用,运用流式细胞仪技术和MTT法观察和分析细胞凋亡和增殖,并且运用Western blot技术对DHA诱导胃癌细胞的磷酸化水平表达和丝裂原活化蛋白激活ERK1/2水平进行检测。结果发现,DHA可以抑制SGC-7901胃癌细胞增殖,具有浓度和时间依赖性(P<0.05);DHA的作用浓度与SCG-7901细胞凋亡率呈正比关系(P<0.05);同时,随着DHA浓度的升高,caspase-3的表达明显增强,比较有统计意义(P<0.05)。说明,DHA能够对EPK1/2的磷酸化过程进行下调,将凋亡蛋白caspase-3的表达激活,从而对胃癌细胞凋亡发挥诱导作用。

DHA诱导小鼠乳癌4T1细胞凋亡及其对死亡受体蛋白表达的影响

目的 研究二十二碳六烯酸（DHA）对小鼠乳癌4T1细胞凋亡的诱导作用及其对死亡受体（DR）蛋白表达的影响。方法 体外培养4T1细胞,应用MTT方法观察不同浓度的DHA对4T1细胞增殖活力的影响;Annexin V/PI双染流式细胞术分析不同浓度DHA对4T1细胞凋亡率影响;采用Western blotting方法检测DR4、DR5和肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）表达的变化。结果 采用不同浓度DHA处理后,4T1细胞增殖活力较对照组显著下降（F=84.62,q=16.54~25.31,P〈0.05）;细胞凋亡率明显增高（F=287.68,q=32.74~56.58,P〈0.05）;DR5和TRAIL表达均明显上调（F=64.75、149.72,q=9.32~51.59,P〈0.05）。结论 DHA可能通过DR途径抑制小鼠4T1乳癌细胞的生长,诱导其凋亡。

二十碳五烯酸协同长春瑞滨对人肺癌A-549细胞的作用

[目的]探讨二十碳五烯酸(EPA)联合长春瑞滨(NVB)对人肺癌A-549细胞株的增殖、凋亡及细胞周期的影响.[方法]选用人肺癌A-549细胞株进行体外培养.应用倒置显微镜、HE染色、AnnexinⅤ-PI双染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学变化.应用流式细胞仪检测EPA和NVB联合作用于人肺癌A-549细胞株后细胞凋亡情况.[结果]在倒置显微镜下,用EPA处理的A-549肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞膜起泡形成凋亡小体,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱.HE染色:在倒置显微镜下,EPA处理组A-549肿瘤细胞体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,有的细胞核脱落,有的细胞膜起泡形成凋亡小体.MTT实验结果表明,EPA在15～45 mg/L范围内,于24,48,72h对肺癌A-549细胞株均有抑制生长作用且与NVB有协同作用,并表现出质量浓度、时间依赖性关系.在An-nexinⅤ-PI双染色荧光显微镜下,实验组A-549肿瘤细胞核染色质呈红色或A-549肿瘤细胞呈绿色,细胞周围可见亮绿色荧光的凋亡小体.流式细胞仪检测结果发现,EPA联合NVB组的凋亡率较单用NVB组明显增加.[结论]EPA与NVB对人肺癌A-549细胞的抑制具有协同作用,与单用NVB相比,联合应用可减少NVB的用药剂量.

不同浓度EPA和DHA对C2C12成肌细胞增殖及凋亡的影响

本试验旨在研究二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)对体外培养的C2C12成肌细胞增殖和凋亡的影响。用不同终浓度DHA和EPA(0、6.25、12.5、25、50、100μmol/L)分别作用C2C12细胞12、24、48 h后,用CCK-8法检测细胞的增殖情况;用不同终浓度DHA和EPA(0、50、100μmol/L)分别作用C2C12细胞48 h后,用TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果表明:终浓度为50、100μmol/L的EPA处理细胞48 h,C2C12细胞增殖能力受到显著抑制,但不同浓度DHA处理组细胞的增殖能力无明显变化。此外,EPA处理C2C12细胞后,TUNEL法显示凋亡细胞数增加,且100μmol/L的EPA处理组细胞凋亡最明显。然而,与对照相比,DHA处理组细胞无明显凋亡。上述结果表明,EPA能抑制C2C12成肌细胞增殖并促进其凋亡,而DHA对细胞增殖和凋亡无明显影响。

二十二碳六烯酸抑制大鼠视网膜光感受器细胞凋亡

目的:观察二十二碳六烯酸(DHA)对N-甲基-N-亚硝基脲(MNU)所致视网膜光感受器细胞凋亡的影响,为其临床应用提供理论依据。方法:35只雌性SD大鼠随机分为7组,每组5只。除正常组外,其余各组均于出生后35 d开始灌胃,DHA组和造模组每日分别灌服含有一定量DHA的脱脂牛奶或等体积的脱脂牛奶,持续15 d后行腹腔注射MNU 40 mg/kg。分别于造模后12,24,48 h全麻后处死相应动物,取眼球行光镜观察及用末端脱氧核苷酸转移酶介导dUTP缺口末段标记(TUNEL)法检测各组大鼠视网膜细胞的凋亡。结果:光镜下显示中周部视网膜在造模后24 h开始出现光感受器细胞排列紊乱,少量核固缩,48 h后光感受器细胞已大量溶解,而DHA组光感受器细胞的形态均接近正常,仅见排列紊乱、稀疏。造模组光感受器细胞在造模后12,24,48 h的凋亡百分率(AI)分别为(5.3±1.1)%、(60.6±4.1)%、(97.1±1.9)%,DHA组在造模后12,24,48 h的AI分别为(4.3±1.4)%、(44.5±7.8)%和(78.7±5.8)%,24 h和48 h后造模组和DHA组间比较均有统计学差异(P<0.05)。结论:二十二碳六烯酸40 mg/(kg.d)可以有效抑制视网膜光感受器细胞的凋亡。

选择性环氧合酶-2抑制剂NS-398和二十二碳六烯酸联合促进胆管癌QBC939细胞的凋亡

胆管癌是起源于胆道系统的恶性肿瘤，主要包括肝外胆管癌和肝门部Ⅰ、Ⅱ型胆管癌。因其局部解剖复杂、起病隐匿、早期诊断率低，确诊时大多已进展至中晚期而失去根治性切除的机会，预后极差。尤其是肝门部胆管癌，其特殊的生长位置给根治性切除带来了极大的挑战。目前，仅有不到10％的患者能够行根治性切除，但术后有近半数复发，5年生存率低于10％，尚缺乏有效的非手术疗法。

15-脂氧合酶-1在胃癌细胞AGS中的表达

目的研究15-脂氧合酶-1(15-LOX-1)基因在人胃癌细胞AGS中的表达及其对AGS增殖凋亡的影响。方法通过脂质体介导瞬时转染15-LOX-1基因于培养的AGS中,逆转录PCR法和免疫印迹法检测15-LOX-1 mRNA及蛋白表达;四甲基偶氮唑盐法(MTT)、流式细胞术、AnnexinV/PI染色与原位末端标记法(TUNEL)比较转染前后AGS的增殖和凋亡情况。结果胃癌细胞AGS转染后表达有15-LOX-1的mRNA及蛋白。与非转染组及空质粒转染组相比较,转染重组质粒组AGS细胞生长明显受到抑制并且细胞周期停滞在G1期,其凋亡率明显高于非转染组及空质粒转染组。结论15-LOX-1基因能够抑制胃癌细胞AGS的增殖,并促进其凋亡。

二十二碳六烯酸对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的观察二十二碳六烯酸(DHA)对人胰腺癌细胞株生长的抑制作用。方法将DHA与胰腺癌细胞混合培养,采用MTT、流式细胞技术分析细胞增殖、细胞凋亡、细胞周期以及凋亡相关蛋白Bcl-2含量。结果 50μg/mlDHA作用人胰腺癌细胞株后,Patu8988、SW1990增殖率24h为(46.89±5.99)、(46.03±7.69),48h为(35.92±2.91)、(25.70±5.60),肿瘤细胞增殖受到明显抑制(P<0.01)。同时细胞凋亡率明显升高,效应呈现时间-剂量依赖关系,72h后Patu8988、SW1990凋亡率分别为53.2%、13.7%。G0～G1期细胞比例增高,S期细胞比例下降。DHA作用24h后,Patu8988、SW1990Bcl-2蛋白表达率明显低于对照组(P<0.05)。结论 DHA能抑制胰腺癌细胞增殖,并通过下调Bcl-2在细胞中表达来诱导胰腺癌细胞凋亡。

二十二碳六烯酸和环氧合酶-2抑制剂NS-398对胆管癌QBC939细胞凋亡的影响

二十二碳六烯酸（DHA）和NS-398均能诱导胆管癌细胞凋亡，抑制β-连环蛋白（β-catenin）和环氧合酶-2（COX-2）在细胞中表达可抑制增殖，促进凋亡。DHA和NS-398均有一定的平台效应，联合后研究其效益。

二十二碳六烯酸联合5氟尿嘧啶对胃癌细胞生长及bcl-2、bcl 2112和bax表达的影响

目的评估二十二碳六烯酸（DHA）联合5氟尿嘧啶（5-Fu）对胃癌细胞SGC 7901生长以及bcl-2、bcl 2112和bax基因表达的影响。方法采用台盼蓝拒染方法检测两药物单用和联用对细胞活力的影响，用联合系数判断两药合用效果，倒置显微镜下观察细胞生长状况，PI染色流式细胞术检测亚二倍体峰比并拟合细胞周期曲线，Annexin-V／PI双标记方法检测早期细胞凋亡，RT—PCR方法检测bcl-2、bcl 2112和bax基因的表达。结果DHA可抑制胃癌SGC 7901细胞生长，且呈剂量和时间依赖性（P〈0．05），24h、48h的半数抑制浓度分别为67．81μg／ml、45．76μg／ml；DHA联合5-Fu对细胞生长的抑制具有协同作用（CI〈1，P〈0．01），倒置显微镜下可见两药联合处理后细胞稀疏；亚二倍体峰比、Annexin—V早期凋亡率示DHA、5-FU均能诱导细胞凋亡且联合用药后细胞凋亡更明显（DHA、5、FU、联合组的亚二倍体峰比分别为5．2％、6．2％、13．9％；早期细胞凋亡率分别为4．00％、5．37％、13．11％）；细胞周期曲线在联合组停滞于G0／G1和S期；RT—PCR显示DHA、5-FU可下调bcl-2和bcl 2112表达，两药联合表达时下调更显著，bax表达则无明显改变。结论DHA能抑制胃癌SGC7901细胞增殖，联合5-FU后对细胞生长抑制和周期阻滞具有协同作用，可能通过下调bcl-2和bcl 2112基因诱导胃癌SGC 7901细胞发生凋亡。

二十碳五烯酸（EPA）对胃癌细胞增殖与凋亡的影响

目的观察二十碳五烯酸（EPA）对人胃癌细胞系增殖与凋亡的影响，并探讨其作用机制。方法以终浓度为10、20、40μg／ml的EPA作用于SGC-7901和MGC-803人胃癌细胞系24-72h。采用四甲基偶氮唑蓝法检测细胞增殖抑制率，采用流式细胞技术分析细胞周期分布与细胞凋亡，利用荧光探针rhodamine 123测定线粒体膜电位，酶联免疫吸附法测定线粒体和胞浆中细胞色素C水平，荧光光谱法测定凋亡效应酶半胱天冬蛋白酶-3（caspase-3）活性。结果经10-40μg／ml EPA处理的胃癌细胞增殖率显著降低，且呈现时间依赖性。与对照组比较，经40g／ml EPA作用72h后，SGC-7901和MGC-803细胞G0／G1期细胞的比例均增加（P=0.006、P=0.009）。经40g／ml EPA作用24h后，胃癌细胞线粒体膜电位显著低于对照组（P=0.001、P=0.047）；线粒体内细胞色素C的含量明显少于对照组（P=0.001、P=0.000），而细胞浆中细胞色素C含量显著高于对照组（P=0．001、P=0．000）。在SGC-7901细胞中，caspase-3活性随着EPA（40g／mL）作用时间延长而升高。结论EPA通过诱导细胞周期阻滞和激活线粒体通路，抑制人胃癌细胞增殖，诱导细胞凋亡。