缺血后处理对供体犬肺组织细胞凋亡基因表达的影响

【目的】观察供体犬肺再灌注后早期供体肺组织脂质过氧化反应的变化,了解缺血后处理对供体犬肺植入后细胞凋亡基因表达的变化情况。【方法】随机选取12对比咯犬,组成供受体,进行异体左侧单肺移植术。随机分成两组,对照组:6对犬,进行供受体左侧异体单肺移植,不予缺血后处理的干预,按常规方式进行。缺血后处理组:6对犬,进行供受体左侧异体单肺移植,常规方式获取的供体犬肺植入后,再灌注早期实施3个周期的10 s再灌～10 s再阻断,总时程1 min的缺血后处理。于供体犬肺再灌注后1、2 h时间点采集供肺标本检测超氧化物歧化酶(SOD)的活性、丙二醛(MDA)的含量;采用RT-PCR技术检测供体肺脏再灌注后1、2 h时间点细胞凋亡基因Bcl-2、Bax的表达;光镜下观察供体犬肺植入后1、2 h时间点肺组织的病理变化,应用SPSS 13.0统计软件处理,以P<0.05为统计学上有显著差别。【结果】供体肺脏植入时间平均(35.9±1.7)min。缺血后处理组在1、2 h时间点的供体肺组织SOD活性水平较对照组升高、MDA含量较对照组减低,有统计学差异(P<0.05);对照组与实验组相比较,肺组织再灌注后1、2 h时间点,Bc12蛋白表达上调(P<0.05),而Bax蛋白表达下调(P<0.05);缺血后处理组肺组织光镜下观察在各时间点的炎症反应均较对照组的变化轻微。【结论】缺血后处理可以抑制再灌注时氧化自由基的堆积,从而减少供体肺的缺血再灌注损伤;缺血后处理能够通过抑制促凋亡Bax蛋白的表达,及促进抗凋亡Bc12蛋白表达,从而影响内源性细胞凋亡途径。

杆状病毒的抗细胞凋亡基因──35k蛋白基因的结构和功能

杆状病毒的抗细胞凋亡基因──３５ｋ蛋白基因的结构和功能施先宗，陈曲侯，王章（华中师范大学昆虫学研究所，武汉４３００７０）在长期进化过程中，昆虫的杆状病毒同其它生物一样，对自己的生活环境表现出高度的适应性，并获得了某些进化上的生长优势。它们不仅能在个体...

犬小肠缺血再灌注后氧自由基改变及脾脏免疫细胞凋亡基因的表达

目的研究犬小肠缺血再灌注后血中一氧化氮(NO)浓度、超氧化物岐化酶(SOD)活性的改变和脾脏中凋亡相关基因表达和意义。方法通过阻断肠系膜上动脉,建立缺血再灌注模型,检测血中NO和SOD活性的改变。用免疫组织化学SP法观察C FOS、BAXP53和BCL2在脾脏组织中的表达。结果再灌注30min后,NO浓度无明显下降(46.1±4.0),至第4天达最低水平(25.9±5.0),而至第7天又明显回升(42.5±5.0)。从血管阻断30min至第7天,SOD活性持续升高(98.4±8.0),但各时点之间差别不明显。再灌注30、60min,1、4和7d后,C FOS、BAX和P53的表达明显增加,C FOS阳性细胞率分别为:35%、45%、50%、56%和80%,BAX阳性细胞率分别为:50%、61%、60%、65%和75%,P53的阳性细胞率分别为:30%、42%、45%、48%和50%,BCL2阳性细胞率仅为5%至10%。C FOS和BAX阳性细胞率明显高于BCL2。结论小肠缺血再灌注后可造成血中氧自由基、脾脏免疫细胞的凋亡基因表达改变及远隔器官的次级损伤。

脑缺血再灌注后细胞凋亡基因的研究进展

急性脑血管病以高发病率、高死亡率、高致残率给社会、家庭和患者带来沉重的经济和精神负担。其治疗原则是及时恢复缺血区的血液灌注。然而在某些情况下缺血后再灌注不仅没有使组织功能恢复,反而使缺血所致的功能障碍和结构破坏进一步加重，这种现象即缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury）。许多研究表明，脑缺血再灌注损伤过程包括坏死和凋亡。脑缺血再灌注可诱导多种基因表达，包括促凋亡基因和抑制凋亡基因。这些基因编码的蛋白质产物可直接或间接参与凋亡的调控。

细胞凋亡基因的发现

细胞凋亡基因的发现李雨民，孙元明（中国医学科学院放射医学研究所天津３００１９２）细胞凋亡是一种具有特征性的形态变化和生化改变的细胞死亡过程，机体启动这一机制以清除无用和有害的细胞。近来细胞凋亡基因的研究取得了很大进展，８０年代以来Ｈｏｒｖｉｔｚ等在研...

细胞凋亡基因与鼻咽癌

细胞凋亡是指细胞在一定的生理或病理条件下,遵循一定的程序,最终通过内源性DNA内切酶的激活,自我结束生命的生理性死亡,是细胞依赖ATP能量、新基因表达和合成的一个主动过程。细胞凋亡与程序性细胞死亡(Programmed cell death,PCD)在概念上是有区别的。近年来对细胞凋亡的研究,发现细胞凋亡与许多疾病尤其是肿瘤有密切的关系。许多研究表明,在肿瘤发生发展中往往伴有抑凋亡基因的表达增强和(或)促凋亡基因的受抑。本文就凋亡相关基因与东南亚高发的恶性肿瘤—鼻咽癌方面的研究作一综述。

细胞凋亡基因在人脑星形细胞瘤中的表达和意义

目的 探讨bcl-2、Bax在星形细胞瘤发生、发展中的作用。方法 本实验运用免疫组化技术SP法检测bcl-2、Bax在60例星形细胞瘤组织中的表达情况,并分析它们与星形细胞瘤的病理分级的关系。结果 bcl-2、Bax在星形细胞瘤中的表达率分别为58.3％(35/60)、66.7％(40/60),病理分级无统计学意义(P>0.05)。结论 bcl-2、Bax在星形细胞瘤的发生、发展起着次要作用。

从细胞凋亡基因调控探讨中药治疗肝衰竭作用机制的研究进展

研究证实,肝衰竭的发生与肝细胞凋亡密切相关,故调控肝细胞凋亡基因表达,恢复细胞凋亡调控系统平衡成为了临床治疗肝衰竭的新手段。中医肝病学者研究发现多种中药及其有效成分可通过多途径抑制肝衰竭细胞异常凋亡发生,发挥治疗目的。本文将从细胞凋亡基因调控的角度阐述中药治疗肝衰竭的作用机制。

桔小实蝇细胞凋亡基因hid的克隆及不同发育阶段表达分析

【目的】细胞凋亡是一个细胞自动结束生命的过程,也称为程序性细胞死亡(programmed cell death,PCD)。头部退化缺陷基因(head involution defective,hid)是昆虫细胞凋亡基因RHG家族的成员,该家族基因通过克服凋亡蛋白抑制因子(inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)的保护作用来保证PCD的发生。本研究旨在克隆和分析桔小实蝇Bactrocera dorsalis的hid基因,并研究其在各发育阶段的表达情况。【方法】利用RT-PCR和RACE技术获得了桔小实蝇hid基因的cDNA全长序列。利用荧光定量PCR对hid基因在桔小实蝇不同发育阶段的转录水平进行分析。【结果】克隆获得桔小实蝇hid cDNA序列,将其命名为Bdhid(GenBank登录号为KJ461670),其开放阅读框长1 029 bp,编码342个氨基酸。氨基酸序列分析显示其具有一个短的N-端肽基元(IAP-binding-motif,IBM)和C-端Grim Helix 3(GH3)结构域,与其他已知的双翅目昆虫hid基因有较高的同源性。实时荧光定量PCR检测结果表明,该基因在桔小实蝇的幼虫期表达水平较低,蛹期及成虫期表达量显著升高。【结论】这些结果为进一步研究hid基因在桔小实蝇细胞凋亡途径中的功能及其转基因条件致死品系的获得奠定了基础。

程序性细胞凋亡基因第5外显子多态性与中国南方汉族人群系统z性红斑狼疮遗传易感性研究

目的探讨程序性细胞凋亡基因(programmed cell death-1,PDCD1)第5外显子单核苷酸多态性(SNP)与中国南方汉族人群系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)易感性的关系。方法采用病例对照研究设计,收集132例病例和160例对照,应用PCR-RFLP技术检测PD1.6G>A和PD1.5C>T两个位点的SNPs,运用SAS8.2软件包进行基因型、等位基因和单倍型等的关联性分析。结果对照组PD1.6G>A位点突变基因型AA频率高于SLE患者(χ2=5.123,P=0.023),患者中的A等位基因频率低于对照组(χ2=8.036,P=0.005);PD1.5C>T位点中,CT基因型在对照组中的比例较低(χ2=15.380,P=0.000),病例组的T等位基因频率高于对照组(χ2=11.631,P=0.001)。同时,两位点等位基因间存在连锁不平衡(χ2=10.708,P=0.001),且病例组和对照组单倍型分布不同(χ2=18.821,P=0.000);其中,病例组A-C单倍型频率低于对照组(χ2=15.812,P=0.000),A-T和G-T单倍型频率高于对照组(χ2=4.119,P=0.042和χ2=6.621,P=0.010)。结论在中国南方汉族人群中,PDCD1基因PD1.6G>A和PD1.5C>T两个位点多态性与SLE具有相关性,PD1.6G>A的G→A突变可能是SLE的保护因素(OR=0.57,95%CI:0.39-0.84),PD1.5C>T的C→T突变可能是SLE的危险因素(OR=2.02,95%CI:1.35-3.02)。A-T和G-T单倍型可能是SLE的易感单倍型(OR=1.58,95%CI:1.02-2.46和OR=3.02,95%CI:1.30-7.02),A-C单倍型可能是SLE的保护性单倍型(OR=0.51,95%CI:0.36-0.71)。

RNAi抑制小菜蛾Br-Z2/3基因对下游细胞凋亡基因表达及化蛹的影响

【目的】本研究旨在构建用于小菜蛾Plutella xylostella蛹期特异表达基因Br-Z2/3 dsRNA合成的体外原核表达系统,研究RNAi抑制Br-Z2/3基因对小菜蛾Br-Z2/3和细胞凋亡基因表达及化蛹的影响。【方法】构建小菜蛾L4440-Br-Z2/3重组载体,转化大肠杆菌Escherichia coli HT115感受态细胞,经IPTG诱导大量获得Br-Z2/3 dsRNA,显微注射Br-Z2/3 dsRNA至小菜蛾4龄幼虫进行RNAi;qPCR检测干扰Br-Z2/3基因12和24 h后小菜蛾4龄幼虫Br-Z2/3及其下游细胞凋亡基因reaper,caspase-9和Gadd45g的表达量;观察并统计Br-Z2/3 RNAi后小菜蛾4龄幼虫的化蛹率、平均化蛹时间、蛹畸形率和幼虫死亡率。【结果】成功实现了Br-Z2/3 dsRNA的原核表达。qPCR结果表明,RNAi干扰Br-Z2/3后,小菜蛾4龄幼虫Br-Z2/3基因和相关联的细胞凋亡基因reaper表达量显著下降,但caspase-9和Gadd45g表达量显著上升。注射Br-Z2/3 dsRNA的处理组,化蛹率显著低于对照组,且化蛹高峰期推迟,幼虫死亡率显著高于对照组且畸形蛹率增加。【结论】本研究成功构建了用于小菜蛾Br-Z2/3基因dsRNA合成的体外原核表达系统,利用显微注射法对Br-Z2/3进行RNA干扰,证明Br-Z2/3是调控小菜蛾化蛹的关键基因。

电针结合经颅交流电刺激对脑缺血大鼠神经炎症和凋亡相关基因表达的影响

目的:观察电针(electroacupuncture,EA)结合经颅交流电刺激(transcranial alternating current stimulation,tACS)对大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠神经功能、脑血流、炎症-细胞凋亡基因表达的影响,探讨脑缺血再灌注后脑功能康复的神经调控机制。方法:将40只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、电针组(EA组)、经颅交流电刺激组(T组)及电针结合经颅交流电组(EA+T组),每组8只。缺血再灌注后2h,EA组选取双侧曲池、足三里进行电针干预;T组选取右侧M1区(motor cortex M1,运动皮质M1区)进行tACS干预;EA+T组选取电针结合tACS干预;S组与M组均进行气麻30min/次,连续7天。记录大鼠造模前(B)—造模后7天(D7)的神经缺损评分;B—D7右侧大脑中动脉供血区的血流值,记录血流量;D7时取脑RT-PCR方法检测缺血侧的炎症-细胞凋亡基因的表达。结果:神经缺损评分(neurological deficit scores,NDS):2h、D1时,M组、EA组、T组、EA+T组与S组相比显著增加(P<0.05);D3、D5、D7时,S组与其他各组相比显著降低、M组与其他各组相比显著增加(P<0.05)。EA组、T组、EA+T组各时间均有显著性差异(P<0.05);M组2h、D1、D3、D5、D7与B相比显著上升;D1、D3、D5、D7与2h相比显著下降(P<0.05)。血流量:EA+T组与S组均在2h时下降、D1时上升、D3时下降;EA组则从D3时上升;而M组在D1、D3、D5时与其他各相比均显著下降(P<0.05)。RT-PCR:运动皮质ΔCt法分析(参照基因):EA+T组的天冬氨酸蛋白水解酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase12,Caspase 12)表达显著低于T组(P<0.05);EA组、EA+T组的细胞因子白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、核苷酸结合寡聚化结构域样受体1(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor pyrin domain containing 1,NLRP1a)均显著低于S组(P<0.05)。缺血区2-ΔΔCt分析:M组的内质网应激相关蛋白激活转录因子4(activating transcription factor 4,ATF4)表达显著高于其他各组(P<0.05);M组的B淋巴细胞瘤-2基因(B-cell lymphoma,l-2)显著高于S组、EA组、EA+T组(P<0.01);M组的Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2 associated X potein,Bax)、Caspase 12、细胞癌基因fos(cellular oncogene fos,fos)均显著高于S组(P<0.05)。结论:电针结合tACS对缺血性脑卒中的干预可能通过调控ATF4、Bcl-2、Bax、Caspase 12、C-fos的表达发挥调节作用,联合应用在减轻炎症反应、抑制细胞凋亡方面,可能优于单独电针或tACS干预,可为缺血性脑卒中的治疗提供新的策略。

Apoptin基因活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡

为研究肿瘤细胞凋亡基因(apoptin gene)诱导人黑素瘤细胞系A375凋亡时是否通过活化caspase-3 发挥作用,用含有apoptin基因的真核表达载体短时转染体外培养的人黑素瘤细胞A375;采用RT-PCR、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测A375细胞的凋亡;以比色法检测caspase-3的相对活性。结果表明,apoptin基因短时转染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带;流式细胞术显示实验组细胞凋亡率明显高于其它各组(P<0.01);转染后24h实验组caspase-3的活性开始升高,72 h达高峰,明显高于其它各组(P< 0.01)。结论:apoptin基因可活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡。

程序性细胞凋亡基因单核苷酸多态性与慢性乙型肝炎患者干扰素早期病毒学应答的相关性

目的探讨程序性细胞凋亡基因一1（PD-1）单核苷酸多态性（SNP）与IFN-α治疗慢性乙型肝炎（CHB）患者发生早期病毒学应答的关系。方法采用前瞻性队列研究方法，应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）分析技术，检测135例中国汉族抗病毒初治CHB患者的PD-1．1和PD-1．2的SNP，并分析其与IFN-α早期病毒学应答的关系。分类变量资料采用γ。检验。结果135例CHB患者IFN-α治疗获得早期病毒学应答有33例，占24．4％。PD-1．1的AA、AG、GG基因型各占35、77和23例，IFN—α的早期病毒学应答各有5、25和3例，分别占14．3％、32．5％和13．0％（x^2=6．258，P=0．044），AG基因型相对AA、GG基因型有较高的病毒学应答率（x^2=6．246，P=0．012）。在PD-1．2的AA、AG、GG基因型之间比较IFN-α的早期病毒学应答，差异无统计学意义（x^2=3．957，P=0．138）。结论PD-1．1的SNP与中国汉族CHB患者IFN-α治疗早期病毒学应答有关。

微小RNA-30b对直肠癌细胞系松软蛋白4及程度细胞凋亡基因4表达的影响

目的探讨微小RNA-30b对结肠癌细胞株松软蛋白4(Sox4)及程度细胞凋亡基因4(Pdcd4)表达的影响。方法用10%新生牛血清培养结肠癌HCT116和SW480细胞株,各分为干预组与模型组。p LVTHM/miR-30b慢病毒载体转染,细胞培养基培养6 h。用免疫印迹法与荧光定量PCR法对Sox4及Pdcd4表达进行测定。结果与模型组比较,干预组Sox4整合光密度值明显降低,干预组Pdcd4整合光密度值明显增高(P<0.01);与模型组比较,干预组Sox4蛋白表达较低,干预组Pdcd4表达增高(P<0.01)。结论 MicroRNA-30b能够显著降低直肠癌细胞系Sox4蛋白的表达。

生长激素对大鼠心肌缺血/再灌注后心肌细胞凋亡及凋亡相关基因NF-κB蛋白表达的影响

目的 研究生长激素 (growthhormone ,GH)对大鼠心肌缺血 /再灌注 (IR)后心肌细胞凋亡及相关基因NF -κB蛋白表达的影响。方法 2 4只大鼠随机分为 3组 ,假手术组 (n =8,仅手术 2 4h)、心肌缺血 /再灌注 (IR)组 (n =8)、GH组 (n =8) ,后两组均缺血 30min ,再灌注 2 4h ,其中GH组的每只大鼠实验术前皮下肌注GH 1U/kg体重 ,连续 7d ,其中第 7次皮下注射于手术前进行。前两组每只大鼠相应皮下肌注生理盐水 0 .5mL/d。检测心肌细胞凋亡及心肌细胞核NF -κB蛋白表达并进行心肌组织病理学检查。结果 大鼠心肌IR 2 4h后心肌细胞凋亡指数明显上升 (对照于假手术组 ,P <0 .0 5 ) ,心肌细胞核NF -κB蛋白表达呈阳性染色指数明显升高 (P <0 .0 5 ) ,心肌病理检查见心肌缺血区呈大小不一的坏死孔灶 ,缺血心肌间有炎症细胞浸润 ,心肌排列不整齐 (HE染色 ) ,而GH组心肌细胞凋亡率及心肌细胞核NF -κB蛋白表达呈阳性染色指数明显好于IR组 (P <0 .0 5 ) ,心肌细胞炎症细胞也明显减少 ,坏死灶也少于IR组。结论 GH可以减少心肌缺血 /再灌注后心肌细胞凋亡及细胞核NF -κB染色阳性指数 。