细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂诱导HL-60细胞凋亡及分子机制研究

目的：探讨细胞周期蛋白依赖激酶（ CDK ）抑制剂SNS-032诱导人急性髓系白血病HL-60细胞凋亡的效应及可能的机制。方法：以CDK抑制剂SNS-032作用于HL-60细胞株，实验细胞分为对照组、SNS-032组、白细胞介素（ IL）-6组和SNS-032＋IL-6组。 MTT法检测细胞存活率，流式细胞术检测细胞凋亡， microRNA芯片技术分析细胞microRNA的表达谱差异，蛋白质印迹法检测JAK／STAT3相关信号通路蛋白的表达。结果：SNS-032可降低细胞存活率，诱导HL-60细胞凋亡，对照组、100 nmol／L 和200 nmol／L 的 SNS-032干预组细胞凋亡率分别为（5.9±1.7）％、（12.1±3.1）％和（59.4±3.6）％。 microRNA 芯片分析结果显示， SNS-032显著下调HL-60细胞miR-30a、miR-183、miR-20b、miR-26b、miR-20a、miR-589、miR-107、miR-181 a、miR-106 a、miR-17和miR-378 c的表达水平，显著上调miR-320 a的表达水平。蛋白质印迹法显示 SNS-032可抑制 STAT3的磷酸化和 JAK2、MCL-1、C-MYC蛋白的表达。作为JAK／STAT3通路的激活剂， IL-6联合SNS-032不能逆转后者对HL-60细胞的杀伤作用（ P＞0.05），也不能逆转SNS-032对JAK2蛋白表达和磷酸化STAT3的抑制作用。结论：SNS-032能显著诱导人急性髓系白血病HL-60细胞发生凋亡，其机制可能与抑制JAK2和STAT3磷酸化、抑制MCL-1和C-MYC及与之相关的miR-17-92基因簇表达水平有关。

母牛分枝杆菌菌苗对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及Fas蛋白表达的影响

目的 :研究母牛分枝杆菌菌苗对哮喘豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡及 Fas蛋白表达的影响。方法 :30只豚鼠随机分为生理盐水组、哮喘组及母牛分枝杆菌菌苗组 ,用 TUNEL法检测肺组织嗜酸粒细胞凋亡 ,免疫组化法检测肺组织 Fas蛋白的表达。结果 :母牛分枝杆菌菌苗组豚鼠肺组织嗜酸粒细胞凋亡指数 (2 3.8± 5 .4 ) %显著高于哮喘组 (4.6±0 .7) % (P<0 .0 1) ;肺组织 Fas表达 (OD值 ) (0 .2 0 2± 0 .0 13)显著高于哮喘组 (0 .0 5 1± 0 .0 2 5 ) (P<0 .0 1)。结论 :母牛分枝杆菌菌苗通过上调

乳腺癌组织CAS蛋白的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系

目的分析乳腺癌组织CAS蛋白的表达水平与细胞增殖、凋亡指数及患者临床指标的关系。方法收集普通导管增生20例、异型导管增生20例、导管原位癌10例、浸润性导管癌53例、正常乳腺组织14例的标本,用免疫组织化学方法观察标本组织中CAS蛋白的表达,用ki-67标记细胞增殖指数,用TUNEL法测定凋亡指数,并进行相关统计学分析。结果 CAS在正常乳腺、普通导管增生、异型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌中的阳性率逐渐升高,分别为14.3%(2/14)、25.0%(0/20)、40.0%(8/20)、60.0%(6/10)、75.5%(40/53),差异有统计学意义(χ2=29.382,P=0.000);CAS的表达与乳腺浸润性导管癌患者的年龄、肿瘤大小、肿瘤分期无关,与肿瘤的组织学分级、核分裂像、淋巴结转移有关(P<0.01,P<0.05);CAS评分与细胞增殖指数呈正相关(r=0.439,P=0.003),而与凋亡指数无相关性(r=0.248,P=0.083)。结论乳腺癌组织中,CAS的表达和细胞增殖指数间具有一定的相关性。

CIK细胞对A549肺癌细胞株的诱导凋亡作用的研究

目的研究多种细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK)对A549肺癌细胞株诱导凋亡作用,并探讨其作用机制。方法应用末端脱氧核苷酸转移酶﹙TdT﹚介导的脱氧核苷酸缺口末端标志(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)法检测CIK细胞诱导凋亡的情况;通过免疫组织化学染色法检测A549细胞中凋亡相关基因p53、Fas、caspase-3,caspase-8,caspase-9、survivin蛋白,细胞增殖相关蛋白Ki-67的阳性表达率。结果 (1)TUNEL法检测结果:效靶细胞混合培养后,起初随时间延长凋亡细胞逐渐增多,5-14小时凋亡率明显上升,14-24小时凋亡率下降;(2)免疫组织化学染色结果表明,CIK实验组p53、Ki-67、survivin蛋白随作用时间延长而均下降,Fas、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白表达上调,与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 (1)CIK细胞对A549肺癌细胞具有抗增殖及诱导凋亡作用;(2)CIK细胞对A549肺癌细胞的抗增殖作用机制可能与下调Ki-67蛋白的表达,使癌细胞处于静止期有关;(3)CIK细胞对A549肺癌细胞的诱导凋亡作用机制可能与下调p53、survivin蛋白的表达,上调Fas、caspase-3、caspase-8、caspase-9蛋白的表达有关,经由细胞凋亡的死亡受体和线粒体通路完成凋亡的启动和执行;(4)CIK细胞是一种新型高效具有较强杀伤体外肺癌细胞的免疫活性细胞,有可能用于临床上晚期肺癌的过继性免疫治疗。

反义c-myc诱导MCF-7细胞凋亡作用的研究

目的探讨脂质体LipfectAM INETM(LR)介导的c-myc反义寡核苷酸(ASODN)对MCF-7细胞凋亡作用的影响。方法MCF-7细胞经脂质体包裹c-myc反义寡核苷酸作用24、48、72、96小时后,应用Gimsa染色法及流式细胞仪检测MCF-7细胞凋亡情况;DNA琼脂糖凝胶电泳检测MCF-7细胞经反义核酸作用72小时时,MCF-7细胞DNA变化情况。结果经LR介导的ASODN可以诱导MCF-7细胞凋亡,且随着时间的延长,凋亡细胞逐渐增加,24、48、72、96小时及正义组72小时各时间点的凋亡率分别为4.3%、4.6%、13.5%、28.8%、29.1%、4.4%(P<0.01);DNA凝胶电泳显示脂质体反义核酸72小时组有凋亡特征的DNA改变,呈现典型的DNA降解"梯状"条带片断。结论c-myc反义寡核苷酸(ASODN)可以诱导MCF-7细胞凋亡。

胃肠肿瘤易感基因调控网络的生物信息学研究

基因调节是一个连续而复杂的过程，正常细胞中的基因通过多途径、多步调节的网络来控制细胞生长、发育和细胞凋亡，也是细胞分化和肿瘤生成等生物现象的深层原因。基因调控网络是连续的多层次动力系统模型，具有稳定性、层次性、复杂性、

人乳腺癌易感基因1(BRCA1)的研究进展

BRCA1为具有遗传倾向的乳腺癌和卵巢癌的易感基因,BRCA1基因的突变与家族性乳腺癌及它在细胞周期的调节,DNA损伤修复,基因的转录调控和诱导细胞凋亡方面起着重要作用。BRCA1基因的突变与家族性乳腺癌及卵巢癌的发生密切相关,对BRCA1分子功能的研究,将有利于阐明肿瘤发生的机理。本文就BRCA1基因生物学特性、与肿瘤的关系及其作用机制做一综述。

P65、survivin、bcl-2与PARP蛋白在非小细胞肺癌中的表达及相关性

目的探讨人非小细胞肺癌(NSCLC)中P65与凋亡相关蛋白survivin、bcl-2和聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)蛋白的相关性。方法采用免疫组织化学染色方法检测112例NSCLC患者肺癌组织中survivin、bcl-2,PARP及P65蛋白的表达。结果 P65、survivin、bcl-2、PARP蛋白阳性表达率分别为67.9%、88.4%、58.0%、28.6%。survivin与NSCLC临床分期相关;bcl-2与肿瘤组织学类型相关;survivin与bcl-2表达呈正相关(P均<0.05)。P65表达随肿瘤恶性程度的增加递增,且与survivin、bcl-2、PARP表达呈正相关(P<0.05)。结论 NSCLC中survivin、bcl-2蛋白表达上调,P65蛋白过度活化可能是其发生发展的重要原因。survivin蛋白可作为判断NSCLC预后的参考指标。P65蛋白促进survivin、bcl-2蛋白的转录,并可能参与PARP蛋白的调节。

细胞凋亡相关斑点样蛋白与半胱氨酸蛋白酶-1在肝癌中的表达及临床意义

目的分析细胞凋亡相关的斑点样蛋白（ASC）与半胱氨酸蛋白酶-1（Caspase-1）在肝癌与癌旁组织中的表达及临床意义。方法对30例术前未使用放疗与化疗的肝癌与癌旁组织标本采用免疫组化LSAB法进行ASC、Caspase-1测定，并对各指标进行分析。结果ASC阳性率在肝癌与癌旁组织中分别为10．00％（3／30）和73．33％（22／30），组间阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．01）；Caspase．1阳性率分别为23．33％（7／30）和66．67％（20／30），组间阳性表达率差异有统计学意义（P〈0．01）。ASC与Caspase-1两指标在癌组织中的表达均降低，两者不相关（P〉0．05），在癌旁组织中表达均显著增高，两者呈正相关（r=0．722，P〈0．01）。结论ASC、Caspase-1在肝癌中表达低，且显著低于癌旁组织，提示ASC、Caspase-1与肝癌的凋亡、发生及发展过程密切相关，可作为肝癌的诊断及治疗有希望的靶点。

大鼠脑组织经反复高加速度暴露后bcl-2,bax,p53和白细胞介素1β转化酶的表达(英文)

背景:反复高正加速度(+Gz)暴露可引起脑损伤,但其病理机制尚不清楚。目的:了解反复高正加速度(+Gz)暴露后大鼠脑组织中bcl-2,bax,p53和白细胞介素1β转化酶基因的表达变化,探讨细胞凋亡在反复高+Gz暴露所致脑损伤中的病理作用。设计:以SD大鼠为研究对象的随机对照实验研究。单位:一所医院的航空医学研究中心。材料:选用体质量为180～220g健康雄性SD大鼠26只,随机分成对照组和+Gz暴露组,其中对照组4只,+Gz暴露组22只。干预:将大鼠固定于动物离心机的转臂上,头朝向离心机轴心,+Gz暴露组条件为G值+14Gz,增长率1.5G/s,峰值持续时间45s,共作用3次,两次中间间歇0.5h。对照组大鼠亦在动物离心机上经历类似实验步骤,所承受的G值为+1Gz。分别于暴露后0.5,6.0,24.0和48.0h断头取脑。用半定量反转录聚合酶链反应方法检测对照组和+Gz暴露后0.5,6.0,24.0和48.0h大鼠脑组织中bcl-2,bax,p53和白细胞介素1β转化酶mRNA表达水平,并用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测脑组织中凋亡细胞。主要观察指标:各组大鼠+Gz暴露后大鼠脑组织中bcl-2,bax,p53和白细胞介素1β转化酶mRNA表达水平。结果:+Gz重复暴露后6h,大鼠脑组织bcl-2mRNA表达水平(0.32±0.08)明显低于对照组(0.69±0.15),bax,p53和ICEmRNA表达水平犤(.55±0.09),(

去甲肾上腺素预处理对大鼠供心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响

目的 探讨去甲肾上腺素预处理是否可诱导心肌热休克蛋白70（HSP70）的合成,并进一步研究其对大鼠供心缺血再灌注后心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠18只,随机分为2组：对照组（n=9）,腹腔注射生理盐水0.5 ml,24 h后取离体心脏灌注HTK心肌保护液,4℃保存3 h.然后行Langendorff离体心脏灌注,灌注Krebs-Henseleit（K-H）液2 h.实验组（n=9）,腹腔注射重酒石酸去甲肾上腺素（溶于生理盐水中）3.1 μmol/kg（0.53 mg/kg）,腹腔注射24 h后取离体心脏,处理方法同对照组.心脏灌流结束后取材测定各组心肌HSP70表达,TUNEL法测定心肌细胞凋亡率,免疫组化法测定凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表达,并对相关指标做统计学处理比较.观察心肌细胞光镜结构和电镜下的超微结构.结果 实验组心肌组织HSP70表达明显高于[（17.78±1.82）%]对照组[（5.22±1.05）%],心肌细胞凋亡率明显低于[（5.57±1.05）%]对照组[（9.44±1.27）%],凋亡相关蛋白Bcl-2明显高于[（41.88±5.09）%]对照组[（31.36±3.27）%],Bax明显低于[（22.61±3.49）%]对照组[（40.52±4.17）%].实验组心肌组织光镜下结构以及电镜下超微结构的损伤较对照组明显减轻.结论 去甲肾上腺素预处理能诱导心肌组织HSP70高表达,HSP70对离体大鼠心脏经过缺血再灌注后具有明显的保护效应,去甲肾上腺素预处理能够明显保护心肌的结构和功能,抑制心肌细胞凋亡.

zeste基因增强子同源物2抑制剂GSK126对前列腺癌细胞的作用及机制

目的：探究zeste基因增强子同源物2（ EZH2）抑制剂GSK126对前列腺癌细胞增殖、凋亡及迁移的作用及机制。方法：以磺酰罗丹明B实验考察GSK126对PC-3和DU145细胞增殖的影响，以Annexin V／PI双染法考察GSK126对细胞凋亡的影响，以Transwell实验和细胞划痕实验观察GSK126对细胞迁移和侵袭的影响，以荧光定量PCR检测GSK126对肿瘤相关基因mRNA表达的影响，以蛋白质印迹法检测相关蛋白水平的变化。结果：GSK126仅在50．0μmol／L的高浓度剂量时能有效抑制PC-3和DU145细胞增殖，并促进其凋亡。经GSK126小、中、大剂量（5．0、20．0、50．0μmol／L）处理后，PC-3细胞划痕间距分别为（247．2±24．4）μm、（347．2±19．2）μm、（410．5±18．1）μm，与对照组（171．3±17．8）μm比较差异均有统计学意义（均P＜0．05），且呈一定的量效关系。 Transwell实验结果显示，每视野下侵袭的PC-3细胞数对照组为322．0±17．9，而经GSK126小、中、大剂量处理后分别为198．3±15．4、82．7±6．2、30．2±4．1，与对照组比较差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 GSK126处理前列腺癌细胞后，与上皮细胞间质转化相关的E-cadherin基因mRNA表达量上升，N-cadherin、Vimentin基因mRNA表达量下降，但Snail、Fibronectin、VEGF-A基因的mRNA表达无变化。同时，蛋白质印迹法检测结果提示，E-cadherin 的蛋白表达量增加，而 VEGF-A 蛋白表达量无明显改变。DU145细胞上述实验结果相似。结论：GSK126能有效抑制PC-3细胞和DU145细胞迁移和侵袭，其机制与抑制上皮细胞间质转化相关。 GSK126可作为潜在的前列腺癌临床治疗用药。

内质网应激与胰岛β细胞功能

内质网在细胞内Ca2＋的稳态调节及蛋白质的合成中至关重要,内质网内环境稳态对蛋白质发挥正常功能起决定性作用。在胰岛β细胞中,内质网是胰岛素生物合成的重要场所。胰岛β细胞数量缺失是1型糖尿病与2型糖尿病的共同病理特征,

肝癌癌组织EphA2蛋白表达与增殖相关指标的关系

【目的】探讨肝癌癌组织中Eph受体酪氨酸激酶A2（EphA2）蛋白表达及其与增殖相关指标的关系。【方法】免疫组化法测定50份肝癌癌组织、50份癌旁肝组织及30份正常肝组织（对照组）标本EphA2蛋白表达,分析其表达与肝癌临床病理特征、细胞凋亡率及增殖指数（PI）的关系。【结果】肝癌癌组织EphA2蛋白阳性表达率为76.00%（38/50）,显著高于癌旁组织48.00%（24/50）和对照组的33.33%（10/30）（P〈0.05）;EphA2蛋白阳性表达率与TNM分期、淋巴结转移与否有关（P〈0.05）;EphA2高表达者细胞凋亡率显著低于、PI显著高于EphA2低表达者（P〈0.05）,且Spearman等级相关分析显示EphA2蛋白与细胞凋亡率呈负相关,与PI呈正相关（P〈0.05）。【结论】肝癌癌组织中EphA2蛋白较高表达,对细胞凋亡有抑制、细胞增殖有促进作用,且其表达与TNM分期、淋巴结转移与否相关。

熊果酸抗肿瘤机制研究进展

目的：总结国内外对熊果酸抗肿瘤机制的研究现状。方法：应用CNBI及中国期刊全文数据库检索系统，以“熊果酸、细胞凋亡、肿瘤”等为关键词，检索1979—01-01～2005-12—30相关熊果酸的文献。纳入标准：1）熊果酸对细胞周期影响的研究；2）熊果酸对凋亡相关基因Caspase蛋白表达影响的研究；3）熊果酸对凋亡相关基因Bcl-2／Bax、Fas／FasL和Survivin表达影响的研究。粗选有70余篇关于熊果酸方面的文章，根据纳入标准，精选42篇文献，最后纳入分析29篇文献。结果：熊果酸对结肠癌、黑色素瘤和胃癌等多种细胞系具有抑制作用，并诱导其凋亡。其机制可能是通过影响细胞周期及癌相关基因的表达而实现的。结论：熊果酸具有很好的抑制肿瘤生长作用，并且毒副反应小，来源丰富，有待开发。

原发性肝癌组织中三种凋亡相关基因的表达及意义

目的探讨原发性肝癌组织中三种凋亡相关基因：XIAP、Smac及Caspases-3的表达及意义。方法应用免疫组化方法检测67例原发性肝癌组织中XIAP、Smac及Caspases-3的表达情况。结果XIAP、Smac及Caspases-3在正常肝组织中的阳性率分别为（5．9±1．0）％、（90．1±0．8）％和（87．7±1．1）％，在肝癌组织中的阳性率分别为（89．7±0．7）％、（53．21±1．3）％和（49．8±0．9）％，三者在不同性质组织问差异均有统计学意义（t=7．78，5．37，6．01，P〈0．05）；肝癌组织中XIAP与Caspases-3的表达呈负相关（r=-0．69，P〈0．05），Smac与Caspases-3的表达呈正相关（r=0．67，P〈0．05）。结论XIAP、Smac通过影响Caspases-3的表达拮抗细胞凋亡过程，参与原发性肝癌的发生、发展。

Bcl-2与IP3R相互作用调控肿瘤细胞程序性死亡的研究进展

由1,4,5三磷酸肌醇受体(inositol1,4,5-trisphosphate receptor,IP3R)介导的细胞内钙离子释放在细胞生理学过程中具有中枢性作用,其通道活性受到复杂信号网络的精细调节。近来有研究发现,IP3R是抗凋亡分子B细胞性淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)家族蛋白的一个作用靶点,而抗凋亡Bcl-2蛋白作为IP3R的内源性调节分子,具有控制内质网中IP3R活性和抑制促凋亡钙信号的功能。已有研究证实,基于干扰Bcl-2家族成员与IP3R相互作用功能区域的多肽分子具有一定的抗肿瘤作用,因此,根据Bcl-2蛋白分子的结构特征及其与IP3R的相互作用机制而设计的靶向药物,已成为抗肿瘤新药的一个重要发展方向,并且部分药物已进入临床研究阶段。这些处于研发中的新药有望为慢性淋巴细胞白血病(chronic lymphocytic leukemia,CLL)等Bcl-2依赖性肿瘤的治疗及对抗Bcl-2介导的化疗放疗耐药现象带来新希望。本文旨在对上述研究的进展作一综述,以期为肿瘤细胞程序性死亡的调控机制的研究提供一些有价值的参考依据。

Anti-tumor activities and apoptotic mechanism of ribosome-inactivating proteins

Ribosome-inactivating proteins(RIPs) belong to a family of enzymes that attack eukaryotic ribosomes and potently inhibit cellular protein synthesis.RIPs possess several biomedical properties,including anti-viral and anti-tumor activities.Multiple RIPs are known to inhibit tumor cell proliferation through inducing apoptosis in a variety of cancers,such as breast cancer,leukemia/lymphoma,and hepatoma.This review focuses on the anti-tumor activities of RIPs and their apoptotic effects through three closely related pathways:mitochondrial,death receptor,and endoplasmic reticulum pathways.