转染三磷酸腺苷酶家族蛋白2 shRNA的人骨肉瘤细胞株U2-OS增殖、凋亡能力观察

目的观察转染三磷酸腺苷酶家族蛋白2(ATAD2)shRNA的骨肉瘤细胞株U2-OS增殖、凋亡的变化。方法以qRT-PCR法和Western blotting法分别检测人骨肉瘤细胞(U2-OS、MG-63、SaOS-2)和人正常成骨细胞(h FOB1.19)中ATAD2 mRNA、蛋白。在U2-OS细胞中转染ATAD2 shRNA慢病毒载体,采用qRT-PCR法和Western blotting法检测转染效果,CCK8方法检测细胞增殖变化,平板克隆形成实验检测细胞克隆形成数目,碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期,膜联蛋白V-FITC(Annexin V-FITC)/PI双染法检测细胞凋亡率,Western blotting法检测细胞剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(C-Caspase-3)、细胞周期依赖性蛋白激酶4(CDK2)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(C-Caspase-9)、细胞周期蛋白D1(CyclinD1)蛋白。结果骨肉瘤细胞中ATAD2 mRNA、蛋白表达水平高于正常成骨细胞(P均<0.05)。ATAD2 shRNA慢病毒载体转染后的骨肉瘤细胞中ATAD2表达水平下降(P<0.05)。转染ATAD2 shRNA后的骨肉瘤细胞增殖能力和克隆形成能力均降低,细胞G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中C-Caspase-3、C-Caspase-9蛋白表达升高,CDK2、CyclinD1蛋白表达降低(P均<0.05)。结论转染ATAD2 shRNA可抑制U2-OS细胞增殖,并诱导细胞凋亡。

PCa组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡观察

目的观察前列腺癌(PCa)组织Mfn2 mRNA表达及转染Mfn2过表达质粒的人PCa细胞株增殖、迁移、侵袭、凋亡情况。方法体外培养人PCa细胞株(PC3细胞和DU145细胞),分别转染Mfn2过表达质粒、空白载体质粒及不转染质粒,PC3细胞分别记为A、B、C组,DU145细胞分别记为D、E、F组。CCK-8实验检测各组细胞OD值,细胞集落形成实验测算各组细胞集落数目,以OD值和细胞集落数目表示细胞增殖能力。细胞划痕实验测算各组细胞迁移率,以细胞迁移率表示细胞迁移能力。Transwell实验测算各组细胞侵袭数目,以细胞侵袭数目数表示细胞侵袭能力。流式细胞术测算各组细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved caspase-3、caspase-3及PI3K/AKT通路相关蛋白(p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT)。结果PCa、癌旁组织Mfn2 mRNA相对表达量分别为0.36±0.32、0.72±0.35,两者比较,P<0.05。与同组24 h比较,A、B、C组48和72 h的OD值增加(P均<0.05);与同组48 h比较,A、B、C组72 h的OD值增加(P均<0.05);与B、C组比较,A组24、48、72 h的OD值和细胞集落数目减少(P均<0.05)。与同组24 h比较,D、E、F组48和72 h的OD值增加(P均<0.05);与同组48 h比较,D、E、F组72 h的OD值增加(P均<0.05);与E、F组比较,D组24、48、72 h的OD值和细胞集落数目减少(P均<0.05)。与B、C组比较,A组细胞迁移率及细胞侵袭数目减少(P均<0.05);与E、F组比较,D组细胞迁移率及细胞侵袭数目减少(P均<0.05)。与B、C组比较,A组细胞凋亡率及Bax/Bcl-2、Cleaved caspase-3/caspase-3表达增加(P均<0.05);与E、F组比较,D组细胞凋亡率及Bax/Bcl-2、Cleaved caspase-3/caspase-3表达增加(P均<0.05);与B、C组比较,A组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P均<0.05);与E、F组比较,D组p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT蛋白表达降低(P均<0.05)。结论PCa组织Mfn2 mRNA的表达低于癌旁组织,转染Mfn2过表达质粒可抑制PCa细胞株增殖、迁移和侵袭,并诱导凋亡,其作用机制可能与抑制PI3K/AKT信号通路有关。

ESCC组织SNHG17表达及转染si-SNHG17质粒的人食管鳞癌细胞株增殖、凋亡、放射敏感性观察

目的观察食管鳞癌(ESCC)组织小核仁RNA宿主基因17(SNHG17)表达情况及转染si-SNHG17质粒的人ESCC细胞株ECA109增殖、凋亡、放射敏感性。方法取ESCC肿瘤组织与癌旁组织标本各89例份;另取ECA109细胞,并随机分为对照组(Control组,空白培养基处理)、si NC组(转染si NC质粒)、si-SNHG17组(转染si-SNHG17质粒)、si-SNHG17+inhibitor NC组(si-SNHG17与inhibitor NC共转染)、si-SNHG17+miR-375 inhibitor组(si-SNHG17与miR-375 inhibitor共转染);采用RT-qPCR法检测ESCC组织、癌旁组织和各组细胞SNHG17、miR-375、USP14 mRNA,CCK-8法检测各组细胞增殖能力(OD值),流式细胞术及Western blot法检测各组细胞凋亡能力[凋亡率及凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase3、USP14蛋白)],克隆形成实验检测各组细胞放射敏感性。双荧光素酶报告基因实验分别验证SNHG17、miR-375及miR-375、USP14的靶向性关系。结果与癌旁组织比较,肿瘤组织中SN⁃HG17、USP14 mRNA表达升高,miR-375表达降低(P均<0.05)。与Control组、si-NC组比较,si-SNHG17组SNHG17表达、OD值、Bcl-2及USP14表达降低,miR-375表达、细胞凋亡率、放射敏感性、Bax及Caspase3蛋白表达升高(P均<0.05)。与si-SNHG17组、si-SNHG17+inhibitor NC组比较,si-SNHG17+miR-375 inhibitor组OD值、Bcl-2及USP14表达升高(P均<0.05),miR-375表达、细胞凋亡率、放射敏感性、Bax及Caspase3蛋白表达降低(P均<0.05)。SN⁃HG17靶向负调控miR-375表达,miR-375靶向负调控USP14表达。结论ESCC组织中SNHG17表达较癌旁组织升高;转染si-SNHG17质粒可抑制ECA109细胞增殖,促进细胞凋亡,增强细胞的放射敏感性,机制可能是上调miR-375来抑制USP14蛋白的表达。

miRNA-299-3p对肺癌细胞系A549迁移、增殖、凋亡、多柔比星敏感性的影响

目的观察微小RNA-299-3p(miRNA-299-3p)对人肺癌细胞A549迁移、增殖、凋亡、多柔比星敏感性的影响。方法以A549细胞为研究对象,首先评价miRNA-299-3p对靶基因三磷酸腺苷结合盒E1(ABCE1)的调控效应;通过CCK-8染色、划痕实验、活力分析、TUNEL染色以及蛋白印迹方法系统分析miRNA-299-3p转染的A549细胞迁移、增殖、凋亡以及对多柔比星敏感性的影响。结果 miRNA-299-3p对肺癌细胞ABCE1具有显著抑制效应。经miRNA-299-3p转染的A549细胞增殖活性、迁移等生物学特征并未受到明显影响。然而,miRNA-299-3p显著增加了A549细胞对多柔比星的敏感性,与对照组相比,同样剂量的多柔比星药物导致A549细胞活性显著下降,凋亡水平显著升高。结论 miR-299-3p靶向抑制ABCE1表达,其过表达并不能显著抑制A549细胞的增殖,但miR-299-3p联合多柔比星促进了A549细胞对多柔比星的敏感性,显著促进了A549细胞的凋亡。

miR-194对人非小细胞肺癌细胞系A549增殖、凋亡的影响及其机制

目的 观察微小RNA-194(miR-194)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、凋亡的影响,并探讨其机制。方法 取A549细胞和人正常肺上皮细胞16HBE,采用qRT-PCR法检测两种细胞miR-194。常规培养A549细胞,经脂质体分别转染miR-194抑制物、miR-194模拟物(mimics)、对照48h(分别计为A、B、C组),采用qRT-PCR验证转染效果,MTS法检测细胞增殖能力,平板克隆实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞仪检测细胞凋亡能力,Western blotting法检测细胞JAK2、pSTAT3、活化的Caspase-3蛋白。结果 A549、16HBE细胞中miR-194相对表达量分别为1.00±0.10、8.17±0.14,两者比较,P<0.05。A、B、C组miR-194相对表达量分别为0.31±0.11、8.35±0.31、1.00±0.10,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A组转染24、48、72h的OD值分别为0.494±0.069、0.843±0.084、1.111±0.109,B组分别为0.355±0.026、0.510±0.049、0.706±0.087,C组分别为0.427±0.022、0.664±0.068、0.906±0.060,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A、B、C组细胞克隆数目分别为(232.12±10.82)、(43.67±10.97)、(127.33±6.43)个,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。与C组比较,A组细胞凋亡现象及数目明显减少,B组细胞凋亡现象及数目明显增多;A、B、C组细胞凋亡率分别为4.58%±1.01%、21.45%±1.78%、10.23%±1.65%,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。A组JAK2、pSTAT3、活化的Caspase-3蛋白相对表达量分别为5.97±0.24、4.52±0.18、0.11±0.04,B组分别为0.34±0.03、0.21±0.02、7.21±0.79,C组分别为1.00±0.10、1.00±0.10、1.00±0.10,A、B组分别与C组比较,P均<0.05。结论 miR-194能抑制A549细胞的增殖、克隆形成能力,并诱导细胞凋亡,其机制可能与调控JAK2/STAT3信号通路并促进活化的Caspase-3蛋白表达有关。

SAL与EGCG联合应用对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡的影响及其机制

目的 观察盐霉素(SAL)联合表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对人胃癌细胞株SGC-7901增殖、凋亡能力的影响,并探讨其机制。方法 取对数生长期SGC-7901细胞并分组,联合组分别加入5、10、20、40mg/L的EGCG及2μmol/L的SAL,SAL组加入1、2、4、8μmol/L的SAL,EGCG组加入5、10、20、40mg/L的EGCG,对照组无药物、只加培养液,比较各组药物作用24、48、72h后细胞增殖抑制率。取对数生长期SGC-7901细胞并分组,联合组加入2μmol/L的SAL和10mg/L的EGCG,SAL组加入2μmol/L的SAL,EGCG组加入10mg/L的EGCG,对照组无药物、仅加培养基,比较各组药物作用48h后荧光染色情况及bax、bcl-2mRNA表达情况。结果 SAL、EGCG单药均能抑制SGC-7901细胞增殖,联合用药效果更显著(P<0.05);对照组呈均匀绿色荧光,SAL组和EGCG组出现红色荧光,联合组红色荧光更明显;与对照组比较,联合组baxmRNA相对表达量降低,bcl-2mRNA相对表达量增加(P均<0.05)。结论 SAL、EGCG均能抑制SGC-7901细胞增殖,并诱导凋亡,两者联合应用效果更佳,机制可能与两者可降低bax表达及升高bcl-2表达有关。