pcsk9 siRNA对oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响

为研究pcsk9基因沉默后对氧化型低密度脂蛋白(oxLDL)诱导THP-1源性巨噬细胞凋亡的影响,用不同浓度oxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48h,Hoechst33258染色检测细胞凋亡,RT-PCR、Western blot分别检测pcsk9 mRNA、NARC-1蛋白的表达.应用Lipofectamine 2000转染3对pcsk9 siRNAs进THP-1源性巨噬细胞中,筛选出最有效的siRNA再转染入THP-1源性巨噬细胞,24h后加入oxLDL处理48h,Hoechst33258染色观察细胞评价细胞凋亡,流式细胞术计数检测细胞凋亡率.结果发现,75mg/LoxLDL处理THP-1源性巨噬细胞48h后,Hoechst33258染色可见大量凋亡细胞.同时RT-PCR、Western blot检测发现,pcsk9 mRNA和NARC-1蛋白质表达量均随oxLDL浓度的增加而增加,75mg/LoxLDL组增加最明显.不同浓度siRNA转染THP-1源性巨噬细胞后,RT-PCR筛选出3对siRNAs的终浓度为80nmol/L均可出现明显的沉默效应.选取此浓度在蛋白质水平检测基因抑制情况,筛选出最有效的一对siRNA.将筛选出来的siRNA转染细胞24h后,再用oxLDL处理48h,Hoechst33258染色及流式细胞计数结果显示,转染siRNA组凋亡明显被抑制.结果表明,在本研究的浓度范围内,随着oxLDL浓度增加pcsk9的表达随之增加,同时,THP-1源性巨噬细胞凋亡也明显增加,75mg/LoxLDL最明显,pcsk9 mRNA和蛋白质的表达也在该浓度最高.提示pcsk9 siRNA能有效抑制pcsk9基因的表达,从而有效抑制由oxLDL诱导的THP-1源性巨噬细胞的凋亡.

欧拉藏羊肉成熟过程中Hsp70对绷胞凋亡酶活性的影响

为了研究欧拉藏羊肉宰后成熟过程中热休克蛋白70（heatshockprotein70。Hsp70）的变化和细胞凋亡酶（Caspase-3；Caspase-6,Caspase-8；Caspase-9）的活性变化及其相关性，测定了16只甘南欧拉母藏羊背最长肌肉成熟过程中Hsp70的表达量以及细胞凋亡酶的活性，进一步研究了Hsp70与细胞凋亡酶的关系。结果表明：Hsp70表达量总体呈降低的趋势，宰后O-12hHsp70表达量显著升高（P〈O．05），l2-24hHsp70表达量显著降低（P〈O．05），之后不断下降，宰后168h达到最小值；Hsp70的表达量与Caspase-8活力值显著正相关。证实了Hsp70与细胞凋亡酶8之间存在显著相关性。