铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血细胞凝集素抗肿瘤的作用机制及临床应用

铜绿假单胞菌-甘露糖敏感血细胞凝集素(PA-MSHA)在抗肿瘤领域的应用不断增加。PA-MSHA可以通过抑制表皮生长因子受体(EGFR)通路促进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞侵袭和迁移、分化以及改变耐药和细胞上皮-间充质转化(EMT)状态,同时PA-MSHA也通过Toll样受体(TLR)增强巨噬细胞和T细胞对肿瘤细胞的免疫杀伤和抑制。该文梳理并综述关于PA-MSHA抗肿瘤的机制及临床应用,认为PA-MSHA通过作用于细胞甘露糖基的调节过程改变了EGFR和TLR蛋白的糖基化。PA-MSHA可能作用的细胞膜蛋白包括更多的高甘露糖基信号通路受体,阐明PA-MSHA和甘露糖基之间的深层次关系对PA-MSHA的机制研究及临床应用意义重大。

中国对虾血细胞凝集素的性能研究

对中国对虾(Penaeuschinensis)的血细胞凝集素部分性能的研究结果表明,中国对虾的血淋巴中存在可凝集多种脊椎动物血细胞的因子—血细胞凝集素,凝集活力的大小同中国对虾的健康状况有密切关系,发病对虾体内的凝集素活力明显下降。该凝集素具有较强的热稳定性,100℃处理20min仍具活性;并且具有广泛的pH作用范围,可在pH3～11产生凝集作用;适当增加盐度(18～36)可以提高该凝集素的凝集活性;其活性还会被EDTA强烈抑制;但对Ca2+、Mg2+、Mn2+等离子和多种糖类不敏感。在中国对虾血细胞的细胞膜上未发现有凝集鸡红细胞的活性物质。

红芸豆红细胞凝集素单体的分离纯化和性质研究

目的研究一种从红芸豆中提取红细胞凝集素单体(PHA-E)的新方法。方法红芸豆经过浸提,离子交换树脂分离,分子筛层析纯化后得到PHA-E样品。采用电泳法测定其纯度、分子量和等电点。用2%人细胞悬液测定样品凝集红细胞的能力和影响凝血的因素,使用硫酸苯酚法测定其糖含量。结果经PAGE分析PHA-E样品为单带电泳纯,SDS-PAGE上显示亚基分子量为32kD,等电点为6.5.样品使人红细胞50%凝集的蛋白质最低浓度为4μg/ml左右。单糖不影响PHA-E凝血活力,EDTA抑制其凝血活力,Zn2+促进其凝血。糖含量为8.1%.

树内侧隔核/斜角带核垂直部—海马投射:菜豆白细胞凝集素顺行法研究

本研究用 PHA-L顺行追踪法观察了树鼠句内侧隔核 /斜角带核垂直部到海马的投射。结果表明 :( 1)海马内 PHA-L标记纤维根据形态特点可分为两种类型 : 型纤维较粗 ,分支多 ,有形态较大、数量较少的终末终扣 ; 型纤维纤细 ,分支少 ,有较多、较小的通过型终扣 ( boutons en passant)。 ( 2 )内侧隔核 /斜角带核垂直部到海马的投射存在着以下体部定位关系 :一侧向双侧海马均有投射 ,以同侧投射明显占优势 ;内侧隔核吻侧部主要投射到背侧海马和腹侧海马后部 ,内侧隔核尾侧部主要投射到腹侧海马前部 ;背侧海马齿状回内的投射纤维几乎都来自内侧隔核。 ( 3 )根据注射部位的不同 , 、 型纤维在背侧海马的分布有差异 ,其中内侧隔核吻侧部到背侧海马的纤维几乎均为 型纤维 ,而斜角带核垂直部到背侧海马的纤维既有 型纤维又有 型纤维。( 4 )背侧海马和腹侧海马内 型纤维的终扣结构极有可能与锥体细胞和颗粒细胞构成突触。本研究结果为进一步认识内侧隔核 /斜角带核垂直部 -海马通路提供了新的形态学依据。

亲和共沉淀从红芸豆中提取红细胞凝集素及其性质研究

目的研究一种从红芸豆中提取红细胞凝集素(PHA-E)的新方法。方法红芸豆经过粗提,然后和甲状腺球蛋白的粗提取液进行共沉淀,利用超滤制得PHA-E产品,采用电泳和质谱进行鉴定,并研究其凝血活力。结果所获样品的纯度高,其亚基相对分子质量为32 000,等电点为6.5。经质谱鉴定,纯化产品为PHA-E。使兔红细胞50%凝集的PHA-E的最低浓度为2.45μg/mL,单糖不影响PHA-E凝血活力,EDTA抑制其凝血活力,Zn2+促进其凝血。结论通过亲和共沉淀的方法能快速简便的提取活力高的PHA-E。

细胞凝集素探针对典型赤潮生物的定量检测

采用14种异硫氰酸荧光素(FITC)标记的细胞凝集素探针对23株典型的有害赤潮生物进行了检测,结合流式细胞仪、荧光显微镜、荧光分光光度计对探针标记区分和识别目标藻的特异性和有效性进行定性和定量测定。结果表明,DBA可以把裸甲藻(Gymnodinium)GIXM01株与其他裸甲藻区分开;SBA、WGA和PNA探针能定性或定量地区分形态相似的裸甲藻GMDH01和TPXM01。PHA-E和SJA能分别将塔玛亚历山大藻(Alexandrium tamarense)ATDH04、ATMJ02株系与同种其他的藻株区分开;PNA也能从同种其他株系中识别塔玛亚历山大藻ATDH01,ATDH02,ATDH03株系;UEA I能从同种藻株中识别塔玛亚历山大藻ATCI01-JN、ATCI01藻株;RCA120可以区分产毒水平不同的亚历山大藻属(Alexandrium)的ASPGX01和ASPGX02。DBA、SBA、PNA和LCA探针能定性和定量区分微小原甲藻(Prorocentrum minimum)PMDH01和PMXM01;而PNA探针仅能定量区分原甲藻属(Prorocentrum)PDDH01与PMXM01。用WGA探针结合流式细胞仪、荧光显微镜、荧光分光光度等检测手段可以把探针标记的目标裸甲藻GSPXM01和TPXM01从米氏凯伦藻(Karenia mikimotoi)、东海原甲藻(P.donghaiense)和微小原甲藻(P.minimum)等组成的混合样品中区分开。

固相红细胞凝集素(E-PHA)的制备及其应用

用江苏莱豆(Phaseolus vulgaris)E-PHA制备固相吸附剂。交联率87.7%。交联E-PHA量为0.59mg/cm^3胶,与肝癌血清γ-GT天冬酰胺连接的低聚糖的亲和反应,类似于进口同类产品。

肝窦内皮细胞凝集素抑制肝星形细胞增殖、胶原合成与分泌的实验研究

目的:探讨肝窦内皮细胞凝集素(LSECtin)对肝脏星形细胞(HSCs)增殖和胶原分泌的影响。方法:离体培养大鼠肝星形细胞系HSC-T6,分为对照组和LSECtin处理组。采用噻唑蓝(MTT)比色法和[~3H]-胸腺嘧啶核苷(H^3-TdR)掺入法检测HSC-T6细胞的增殖情况,分别采用[~3H]-脯氨酸掺入法和比色法检测HSC-T6细胞胶原合成与分泌的情况。结果:LSECtin剂量依赖性的抑制HSC-T6细胞增殖,其中10^(-7)mol/L的LSECtin对HSC-T6细胞增殖的抑制率为50%。另外,LSECtin对于HSC-T6细胞胶原的合成与分泌也有显著地抑制效应,并呈剂量关系。其中,10^(-7) mol/L的LSECtin对HSC-T6细胞胶原合成与分泌抑制率分比为55%和52%。结论:LSECtin是肝星形细胞的增殖、胶原合成与分泌的抑制因子,对于肝纤维化具有潜在的治疗价值。

植物血细胞凝集素对小鼠脾脏淋巴细胞γ－谷氨酰基转肽酶活性的影响

本文就植物血细胞凝集素（ＰＨＡ）作用的不同时间对小鼠脾脏淋巴细胞γ－谷氨酰基转肽酶（γ－ＧＴ）活性的影响进行了观察。结果表明，脾脏淋巴细胞转化率随给予ＰＨＡ时间的延长而上升，对照组＜２４ｈ组＜４８ｈ组＜７２ｈ组；淋巴细胞γ－ＧＴ活性于２４ｈ明显强于对照组（Ｐ＜０．００１），随着ＰＨＡ作用时间的延长其γ－ＧＴ活性逐渐下降，即４８ｈ组与对照组已无显著差异，而７２ｈ组却低于对照组（Ｐ＜０．００１）。可见ＰＨＡ在小鼠体内对γ－ＧＴ活性有很大影响。

抗人红细胞凝集素血清的应用研究

本文通过吸收抑制试验证明了抗人血红蛋白沉淀素血清中存在的那种能凝集人类红细胞的凝集素,实际上就是用人的红细胞免疫家兔而产生的抗人红细胞凝集素.为考察抗人红细胞凝集素血清对血痕种属的鉴识能力,本文用此抗血清作解离试验,对不同稀释度的新鲜人血痕、室内存放的久暂不一的人血痕和15种动物血痕进行了检测.得到的结果是,新鲜人血痕稀释至1/1000仍呈阳性;500例室内存放的人血痕中,存放时间在11年以下的448例全部能够准确测出;存放12-16年的52例人血痕中,有33例能够测出,余19例呈阴性;15种动物血痕全部呈阴性.

慢性乙型肝炎患者外周血NK细胞杀伤细胞凝集素样受体G1表达及其对NK细胞杀伤功能的影响

目的探讨CHB患者外周血NK细胞杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1(KLRG1)表达的变化以及其对NK细胞杀伤功能的影响。方法在120例CHB患者和120例健康体检者,抽取外周血,提取外周血单个核细胞,使用流式细胞仪检测NK细胞、KLRG1+NK细胞和分泌γ-干扰素的NK细胞百分率,体外检测NK细胞对LX-2细胞的杀伤力。结果CHB患者外周血NK细胞百分率为(17.2±7.7)%,显著高于对照组[(11.3±6.9)%,t=9.85,P=0.01],KLRG1+NK细胞百分率为(52.2±20.3)%,显著高于对照组[(30.3±16.9)%,t=6.57,P=0.01],分泌IFN-γ的NK细胞百分率为(14.6±3.8)%,显著低于对照组[(42.5±9.5)%,t=11.24,P=0.01];CHB患者外周血NK细胞CD38、CD69、HLA-DR和TRAIL表达均显著高于对照组(P=0.012,P=0.015,P=0.025,P=0.019);CHB患者NK细胞诱导LX-2细胞发生早期凋亡率为11.5%(6.6%~13.7%),晚期凋亡率为7.2%(5.1%~8.5%),与对照组的15.4%(11.5%~24.3%)和13.5%(8.1%~20.4%)比,显著降低(U=6.50,P=0.025;U=2.02,P=0.002)。结论CHB患者NK细胞表达KLRG1增强,通过减少分泌INF-γ而导致其杀伤功能减弱,可能系造成慢性感染的重要原因。

白细胞凝集素检测方法的建立

作者探讨了白细胞的染色条件和方法,并且在用 SP-Sephadex 离子交换层析分离白细胞凝集素的基础上,证实了染色的白细胞能够比较特异地用于白细胞凝集素的检测。

巨噬细胞诱导型C型凝集素参与尿毒症微炎症状态及机制

目的探讨巨噬细胞诱导型C型凝集素(macrophage-inducible C-type lectin,Mincle)参与尿毒症微炎症状态的机制。方法SD大鼠随机分为假手术组和5/6肾切除手术建立的尿毒症组。检测肠道组织形态及通透性;透射电子显微镜观察肠道组织及肠巨噬细胞形态;免疫组化法检测肠组织切片中Mincle的表达;Western blotting检测巨噬细胞表面的Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)和NF-κB蛋白的表达。分离出血浆后,用鲎试剂动态浊度定量检测法检测血中内毒素,散射免疫比浊法检测C反应蛋白(C reactive protein,CRP),酶联免疫吸附法检测白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)及肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)水平,并进行统计学分析。结果尿毒症组空肠、回肠、结肠Mincle表达高于假手术组(P<0.05);尿毒症组的回肠、空肠、结肠TLR4、NF-κB蛋白表达差异有统计学意义(P均<0.001);尿毒症组血中的内毒素、CRP、IL-6、TNF-α水平较假手术组显著增加(P<0.05)。结论尿毒症时肠道巨噬细胞表面的Mincle增高并进一步通过TLR4/NF-κB通路介导肠道巨噬细胞向M1型转化,释放炎症产物引起全身微炎症状态。

杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1在慢性乙型肝炎病毒感染中对自然杀伤细胞功能的影响

目的研究慢l生乙型肝炎病毒（HBV）感染中的杀伤细胞凝集素样受体亚家族G成员1（KLRG1）表达对自然杀伤（NK）细胞功能的影响。方法提取120例慢性乙型肝炎病毒感染者和19名健康对照外周血单个核细胞（PBMC），使用流式细胞仪检测外周血中NK细胞和KLRG1^＋NK细胞频数，检测外周血PBMC中分泌干扰素Y的NK细胞频数，并用GraphPad Prism6．03软件对实验数据进行统计分析。结果HBV感染组NK细胞频数（16．92％±7．9％）与健康对照组（10．57％±6．5％）比较，差异无统计学意义；HBV感染组KLRG1^＋NK细胞频数（49．43％±21．2％）明显高于健康对照组（31．60％±17．9％），差异有统计学意义（t=7．3476，P〈0．001）；HBV感染组分泌干扰素v的KLRG1^＋NK细胞频数（2．59％±1．0％）明显低于健康对照组（5．96％±2．4％），差异有统计学意义（P=0．009）。结论HBV感染可增加NK细胞KLRG1的表达，并且进一步减少NK细胞中干扰素γ分泌，可能是造成HBV慢性感染的重要因素。

小鼠树突状细胞相关C型凝集素-1基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的树突状细胞相关C型凝集素-1(dendritic cell-associated C-type lectin-1,Dectin-1)是介导抗真菌天然免疫的重要受体之一。文中旨在构建表达小鼠Dectin-1基因的重组腺病毒载体,扩增、纯化获得高浓度的重组腺病毒。方法将PCR扩增的目的片段CLEC7A-p IRES2-EGFP重组到中间载体p DONR221上,再与腺病毒骨架质粒p AD/CMV/V5-DEST重组,获得重组腺病毒质粒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP,经Pac I线性化后转染人胚肾293(HEK293)细胞,收获重组腺病毒p AD-CLEC7A-p IRES2-EGFP;利用HEK293细胞大量扩增腺病毒;并进行重组腺病毒的滴度测定;用荧光显微镜和实时荧光定量PCR鉴定转染重组腺病毒组(Dectin-1基因重组腺病毒转染HEK293细胞)和转染空病毒组(空病毒转染HEK293细胞)中Dectin-1基因的表达。结果菌落PCR鉴定、酶切鉴定及测序结果均显示重组腺病毒含有Dectin-1基因,腺病毒滴度为5×1011IU/m L,荧光显微镜下可见绿色荧光,PCR检测到转染重组腺病毒组Dectin-1表达量是转染空病毒组的8677.25倍。结论成功构建并获得了较高浓度的Dectin-1基因重组腺病毒载体,为下一步体内外研究Dectin-1高表达在宿主抗真菌天然免疫中的作用奠定基础。

基于CRISPR-Cas9构建树突状细胞相关C型凝集素-1基因敲除小鼠模型

目的利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建树突状细胞相关C型凝集素-1(Dectin-1)基因缺失小鼠模型,研究Dectin-1基因缺失对小鼠肿瘤生长的影响。方法通过CRISPR-Cas9基因编辑技术设计靶向目的基因的sgRNA实现Cas9蛋白对DNA双链的特异性切割。将体外转录纯化得到的sgRNA和ssDNA并与Cas9混合后,通过显微注射到C57BL/6小鼠的受精卵内并经胎盘移植到代孕小鼠体内,获得F0代小鼠。F0代小鼠通过基因鉴定和DNA测序获得Dectin-1基因缺失阳性子代小鼠。最后构建野生型与Dectin-1敲基因小鼠的肿瘤模型,经β-葡聚糖治疗后,观察两组小鼠的肿瘤生长情况。结果利用CRISPR-Cas9基因编辑技术成功敲除C57BL/6野生型小鼠的Dectin-1基因。PCR技术及DNA测序进一步显示Dectin-1基因部分碱基缺失,功能实验显示Dectin-1敲基因小鼠口服β-葡聚糖后肿瘤生长速度高于对照组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。结论利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Dectin-1基因敲除小鼠模型,验证了Dectin-1对β-葡聚糖抗肿瘤的影响,为进一步研究Dectin-1基因在肿瘤免疫治疗中的作用奠定了基础。

中国对虾不同凝集素基因应答WSSV侵染的表达差异

本研究探讨了7种细胞凝集素基因在中国对虾中应答白斑综合征病毒(WSSV)感染上的生物学功能差异。结果显示,LT1(DQ167572.1)、LT2(EU834289.1)、LT3(EU834292.1)和LT5(EU834290.1)是肝胰腺组织特异、受WSSV感染诱导表达的基因,其他3种基因主要在肌肉、肠和腮中表达,与WSSV感染诱导无明显相关;在应答WSSV感染不同时间段的表达特征上,7种凝集素基因各不相同;在各组织中的表达量上,方差分析表明7种凝集素基因除在肝胰腺中的表达上存在显著差异外,其他组织中不存在显著差异。这些结果显示这7个凝集素基因在应答WSSV侵染的表达特征上存在较大差异,推测其在中国对虾体内免疫防御功能上的作用也各不相同。

中国恒河猴DNGR-1分子C型凝集素样结构域在大肠杆菌系统表达

目的获得恒河猴C型凝集素结构域家族9的A成员(Clec9A)基因编码区序列;体外表达CLEC9A的C型凝集素样结构域(CTLD)。方法利用Clec9A基因特异引物,反转录PCR扩增中国恒河猴Clec9A基因编码区,亚克隆至pGEM-T载体,获得pGEM-T-DNGR质粒并进行测序。构建CLEC9A分子的CTLD区原核表达质粒pET-32a-CTLD,转化BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,并用SDS-PAGE和Western blot法对目的蛋白进行鉴定。结果 PCR扩增得到726 bp的Clec9A编码区全长,测序和序列比对发现恒河猴CLEC9A编码区的核苷酸序列与人和小鼠的同源性分别为95.0%和73.1%,推测的氨基酸同源性分别为91.7%和57.3%。体外表达获得相对分子质量(Mr)约32 000的CTLD融合蛋白,Western blot方法鉴定发现其与人DNGR-1分子具有相似的抗原性。结论中国恒河猴Clec9A基因与人的高度相似并能编码与人CTLD抗原性相似的蛋白。

树突状细胞上巨噬细胞半乳糖型凝集素在乳腺癌细胞识别中的作用研究

目的:探索乳腺癌细胞系MCF-7与巨噬细胞半乳糖型凝集素(MGL)的结合情况,并对MCF-7细胞表面的MGL配体进行鉴定。方法:采用流式细胞术和单糖抑制实验检测MCF-7细胞表面糖抗原的GalNAc表达以及MGL与MCF-7细胞的结合情况。RT-PCR、Western blot和免疫沉淀等研究方法对MCF-7上MGL配体进行鉴定。结果:MGL能够与乳腺癌细胞MCF-7高度结合,且这种结合是Ca2+依赖的;乳腺癌细胞MCF-7表面高表达GalNAc,即Tn抗原;单糖GalNAc的加入可明显抑制MGL与乳腺癌细胞MCF-7的相互作用;黏蛋白MUC1为乳腺癌细胞系MCF-7表面MGL的配体。结论:黏蛋白MUC1为乳腺癌细胞系MCF-7表面MGL的配体,介导了MGL对乳腺癌细胞的免疫识别。

C型凝集素9家族A成员的研究进展

C型凝集素9家族A成员(CLEC9A),又称为树突状细胞-NK细胞凝集素群受体1(DNGR-1),属于非经典的2型跨膜C型凝集素样受体,其表达具有高度的树突状细胞(DC)限制性。小鼠CLEC9A主要表达在CD8α^+DC和CD103^+DC表面,人CLEC9A主要表达在血液树突状细胞抗原3阳性DC(BDCA3^+DC)表面。在表型和功能方面,人的同时表达CLEC9A和BDCA3(CLEC9A^+BDCA3^+)的DC与小鼠的CD8α^+DC具有相似性。CLEC9A能够与坏死或受损细胞的纤维状肌动蛋白结合,经细胞质区的免疫受体酪氨酸活化基序结构启动细胞内信号的转导。CLEC9A能介导内吞作用,参与交叉提呈抗原等作用,在抗病毒感染、肿瘤预防与治疗和疫苗的研究中具有潜在的应用前景。本文阐述了CLEC9A分子的研究进展。