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人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞超微结构观察方法的优化
1
作者
吴畏
屈娅
+3 位作者
王磊
曾玉晓
徐海伟
阴正勤
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期786-790,共5页
背景视网膜色素上皮(RPE)细胞的正常超微结构是其执行正常生理功能的解剖基础,目前用透射电子显微镜(TEM)检测RPE细胞的超微结构时常用细胞沉淀法,但经过胰蛋白酶消化的细胞会破坏原有的细胞生长状态,无法真实地反映出体外培养的...
背景视网膜色素上皮(RPE)细胞的正常超微结构是其执行正常生理功能的解剖基础,目前用透射电子显微镜(TEM)检测RPE细胞的超微结构时常用细胞沉淀法,但经过胰蛋白酶消化的细胞会破坏原有的细胞生长状态,无法真实地反映出体外培养的RPE细胞的超微结构。目的探索一种能够简单、真实地反映体外培养的人胚胎干细胞(hESC)来源的RPE细胞超微结构的方法。方法将hESC经自然分化法诱导为hESC来源的RPE(hESC—RPE)细胞,采用免疫荧光法检测hESC—RPE细胞特异性蛋白小眼畸形相关转录因子(MITF)和人类配对盒基因6(PAX6)的表达。将hESC—RPE细胞种植于Transwell小室上进行培养,待细胞形成细胞片后通过TEM进行超微结构的观察,并与细胞沉淀法制备的hESC—RPE细胞标本的超微结构和90日龄LongEvans大鼠体内RPE细胞的超微结构进行比较。结果hESC—RPE细胞MITF和PAX6表达阳性。TEM下可见大鼠体内RPE细胞正常的超微结构,包括顶端微绒毛、极性分布的RPE细胞色素颗粒和细胞核、细胞基底膜和细胞间紧密连接。细胞片法TEM下可见Transwell小室上细胞片中hESC—RPE细胞形成了类似于大鼠体内RPE细胞的超微结构,但细胞顶端微绒毛较短,而细胞沉淀法观察到hESC—RPE细胞的细胞质中散在分布的色素颗粒、非极性的细胞核和少量的微绒毛。结论TEM观察细胞超微结构时细胞片法不经过细胞的消化过程,保留了hESC—RPE细胞的正常结构,能简单、真实地反映体外培养RPE细胞的超微结构。
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关键词
视网膜色素上皮/
细胞
胚胎干
细胞
透射电子显微镜
细胞分化/生理
细胞
培养
大
鼠
人视网膜色素上皮
细胞
片
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题名
人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞超微结构观察方法的优化
1
作者
吴畏
屈娅
王磊
曾玉晓
徐海伟
阴正勤
机构
西南医院全军眼科中心视觉损伤与再生修复重庆市重点实验室
中国科学院动物研究所干细胞与生殖生物学国家重点实验室
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第9期786-790,共5页
基金
重庆市自然科学基金计划项目(cstc2012jjA10068)
文摘
背景视网膜色素上皮(RPE)细胞的正常超微结构是其执行正常生理功能的解剖基础,目前用透射电子显微镜(TEM)检测RPE细胞的超微结构时常用细胞沉淀法,但经过胰蛋白酶消化的细胞会破坏原有的细胞生长状态,无法真实地反映出体外培养的RPE细胞的超微结构。目的探索一种能够简单、真实地反映体外培养的人胚胎干细胞(hESC)来源的RPE细胞超微结构的方法。方法将hESC经自然分化法诱导为hESC来源的RPE(hESC—RPE)细胞,采用免疫荧光法检测hESC—RPE细胞特异性蛋白小眼畸形相关转录因子(MITF)和人类配对盒基因6(PAX6)的表达。将hESC—RPE细胞种植于Transwell小室上进行培养,待细胞形成细胞片后通过TEM进行超微结构的观察,并与细胞沉淀法制备的hESC—RPE细胞标本的超微结构和90日龄LongEvans大鼠体内RPE细胞的超微结构进行比较。结果hESC—RPE细胞MITF和PAX6表达阳性。TEM下可见大鼠体内RPE细胞正常的超微结构,包括顶端微绒毛、极性分布的RPE细胞色素颗粒和细胞核、细胞基底膜和细胞间紧密连接。细胞片法TEM下可见Transwell小室上细胞片中hESC—RPE细胞形成了类似于大鼠体内RPE细胞的超微结构,但细胞顶端微绒毛较短,而细胞沉淀法观察到hESC—RPE细胞的细胞质中散在分布的色素颗粒、非极性的细胞核和少量的微绒毛。结论TEM观察细胞超微结构时细胞片法不经过细胞的消化过程,保留了hESC—RPE细胞的正常结构,能简单、真实地反映体外培养RPE细胞的超微结构。
关键词
视网膜色素上皮/
细胞
胚胎干
细胞
透射电子显微镜
细胞分化/生理
细胞
培养
大
鼠
人视网膜色素上皮
细胞
片
Keywords
Retinal pigment epithelium/cytology
Embryonic stem cells
Microscopy, electron, transmission
Cell differentiation/physiology
Cells, cultured
Rats
Retinal pigment epithelial sheets, human
分类号
R774.5 [医药卫生—眼科]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
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1
人胚胎干细胞来源的视网膜色素上皮细胞超微结构观察方法的优化
吴畏
屈娅
王磊
曾玉晓
徐海伟
阴正勤
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
0
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