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人分化抑制因子3重组腺病毒的制备及鉴定
被引量:
1
1
作者
庞小娟
赵晓琴
+7 位作者
陈芳芳
彭薇
张弛
臧宇辉
罗冰
虞伟
秦浚川
李晓军
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期59-62,共4页
目的构建人细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础。方法以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoR I和HindⅢ双酶切补...
目的构建人细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础。方法以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoR I和HindⅢ双酶切补平之后与载体pAxCAwtit连接,构建重组粘粒载体pAxCAwtit-Id3,包装试剂盒包装重组粘粒,转染大肠埃希菌,鉴定正确后大量制备重组pAxCAwtit-Id3,经酶切线性化后,用脂质体法转染HEK293A细胞,包装成重组腺病毒Ad-Id3,制备高滴度的重组腺病毒Ad-Id3,利用TCID50法计算重组腺病毒滴度,经RT-PCR及western blot检测Id3基因的表达。结果Id3基因成功克隆到腺病毒载体中,重组腺病毒滴度为1.8×1010PFU/ml,用RT-PCR检测到Id3基因的转录产物,westernblot检测到Id3在A549细胞中的高水平表达。结论成功构建Ad-Id3重组腺病毒载体,并在A549细胞中得到高效表达。
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关键词
细胞分化抑制因子3
重组腺病毒
滴度测定
表达
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职称材料
题名
人分化抑制因子3重组腺病毒的制备及鉴定
被引量:
1
1
作者
庞小娟
赵晓琴
陈芳芳
彭薇
张弛
臧宇辉
罗冰
虞伟
秦浚川
李晓军
机构
南京师范大学生命科学学院
南京军区南京总医院全军临床检验医学研究所
南京大学医药生物技术国家重点实验室
出处
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第1期59-62,共4页
基金
江苏省科教兴卫医学重点人才基金课题(RC2007117)
南京军区医药卫生科研项目重点课题(07Z032)
文摘
目的构建人细胞分化抑制因子3(Id3)重组腺病毒载体,制备并鉴定人Id3重组腺病毒,为研究Id3基因在细胞中的表达及其对细胞功能的影响奠定基础。方法以pUC57-Id3为模板扩增人Id3基因,克隆到质粒pUC18中,pUC18-Id3经EcoR I和HindⅢ双酶切补平之后与载体pAxCAwtit连接,构建重组粘粒载体pAxCAwtit-Id3,包装试剂盒包装重组粘粒,转染大肠埃希菌,鉴定正确后大量制备重组pAxCAwtit-Id3,经酶切线性化后,用脂质体法转染HEK293A细胞,包装成重组腺病毒Ad-Id3,制备高滴度的重组腺病毒Ad-Id3,利用TCID50法计算重组腺病毒滴度,经RT-PCR及western blot检测Id3基因的表达。结果Id3基因成功克隆到腺病毒载体中,重组腺病毒滴度为1.8×1010PFU/ml,用RT-PCR检测到Id3基因的转录产物,westernblot检测到Id3在A549细胞中的高水平表达。结论成功构建Ad-Id3重组腺病毒载体,并在A549细胞中得到高效表达。
关键词
细胞分化抑制因子3
重组腺病毒
滴度测定
表达
Keywords
inhibitors of differentiation
3
recombinant adenovirus
titer determination
expression
分类号
Q784 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人分化抑制因子3重组腺病毒的制备及鉴定
庞小娟
赵晓琴
陈芳芳
彭薇
张弛
臧宇辉
罗冰
虞伟
秦浚川
李晓军
《临床检验杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
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职称材料
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参考文献
引证文献
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