CD36蛋白B细胞抗原表位的生信预测及其多抗原肽的制备

目的分析CD36蛋白的结构,寻找可能的B细胞抗原表位,制备含有B细胞表位的多抗原肽(multiple antigenic peptide,MAP),为基于B细胞表位的MAP用于CD36抗体的制备提供前期实验基础。方法通过生物信息学方法分析CD36蛋白的理化性质、二级结构、潜在磷酸化及糖基化位点等,预测可能的B细胞表位。以多聚赖氨酸为核心基质,采用Fmoc方法合成含有CD36 B细胞表位的八分枝MAP,并利用反向高效液相色谱(RP-HPLC)分析MAP的纯度、质谱分析法测定MAP的分子量,对合成的CD36-MAP进行鉴定。结果CD36是1种稳定的、亲水性的碱性蛋白,二级结构以无规则卷曲为主,具有多个磷酸化、糖基化位点,抗原性较强。综合分析获得可能的优势B细胞表位4个,制备了4个含有优势B细胞表位的MAP,RP-HPLC分析表明合成的MAP的纯度均在85%以上,其中3个MAP的分子量与理论预期值相符。结论CD36具有较强的抗原性,利用预测得到的4个可能的B细胞表位合成MAP,为CD36抗体的制备和相关研究提供实验基础。

肺结核88例外周血单核细胞中白细胞分化抗原36水平及其临床意义

目的检测肺结核病人外周血单核细胞中白细胞分化抗原36(CD36)水平和血清中血脂的水平,并分析CD36与机体脂代谢的关系。方法本研究共纳入广安市人民医院2020年3月至2021年6月期间住院治疗的肺结核病人88例作为研究组,选取88例同期于该院进行体检的健康者作为对照组。研究组病人根据是否耐药分为非耐药肺结核(52例)和耐药肺结核(36例);根据痰涂片结果分为痰涂片阴性(40例)和痰涂片阳性(48例)。采用荧光定量PCR技术检测外周血单核细胞中CD36的表达水平,免疫比浊法测定血清三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、载脂蛋白AI(ApoAI)、载脂蛋白B(ApoB)水平;Pearson法分析研究组CD36的表达水平与血脂水平的相关性;采用多元线性回归分析外周血单核细胞CD36表达水平的影响因素。结果研究组外周血单核细胞中CD36表达水平1.80±0.42显著高于对照组1.06±0.32(P<0.05),血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB水平显著低于对照组(P<0.05)。耐药肺结核病人外周血单核细胞中CD36表达水平2.01±0.47显著高于非耐药肺结核1.65±0.39(P<0.05),血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB水平显著低于非耐药肺结核(P<0.05)。痰涂片阳性病人外周血单核细胞中CD36表达水平1.97±0.45显著高于痰涂片阴性1.60±0.38(P<0.05),血清TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB水平显著低于痰涂片阴性(P<0.05)。研究组外周血单核细胞CD36表达水平分别与血清中TG、TC、LDL-C、HDL-C、ApoAI和ApoB水平呈负相关(r=−0.55,P<0.05;r=−0.53,P<0.05;r=−0.68,P<0.05;r=−0.46,P<0.05;r=−0.50,P<0.05;r=−0.45,P<0.05)。多元线性回归分析结果显示,TG降低、HDL-C降低、ApoB降低是外周血单核细胞CD36表达水平的影响因素(P<0.05)。结论肺结核病人较健康人群,CD36水平较高,血脂水平较低,肺结核病人的CD36高表达影响脂代谢,对疾病的发生发展可能产生重要作用。

CD36在肝细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨CD36在肝细胞癌组织中的表达情况及其临床意义。方法通过实时荧光定量聚合酶链反应技术分析来源于我院69例肝细胞癌患者的癌组织及其癌旁组织样本中CD36的表达情况,并收集病例资料及随访信息,研究其与肝细胞癌患者临床病理特征及预后的相关性。结果在癌组织中,CD36的表达量为(0.762±0.077),与癌旁组织中的表达量(0.464±0.051)相比,明显处于较高水平(P≤0.001);并与患者血清AFP水平(P=0.011)、CNLC分期(P=0.017)、病理分化等级(P=0.006)及是否合并有微血管侵犯(P=0.007)明显相关,但不受年龄、性别、肿瘤数量、肿瘤直径及乙型肝炎病毒感染等因素影响;CD36低表达组及高表达组的1、3和5年总生存率分别为83%、67.5%及40.2%,75%、35.9%及20.5%(χ2=4.74,P=0.029);经多因素Cox回归分析发现,CD36高表达量、血清AFP≥400μg/L、肿瘤分化程度高及合并微血管侵犯是影响肝细胞癌患者预后生存的独立危险因素。结论CD36在肝细胞癌组织中呈表达上调趋势,且与血清AFP水平、病理分化等级、CNLC分期、是否合并微血管侵犯及预后生存密切相关,提示CD36在肝细胞癌的发生和预后中具有重要作用。

Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体的制备及作用初步鉴定

目的制备Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体,分析其生物活性及对CD36(+)血小板的吞噬影响。方法通过杂交瘤细胞株RNA提取、PCR扩增及序列分析获得单克隆抗体(mAb)32-106的V H和V L基因序列;利用基因合成和重组技术构建抗人CD36嵌合抗体轻、重链的表达载体;经Zeocin及杀稻瘟菌素筛选,获得稳定表达嵌合抗体的细胞株;利用亲和层析柱纯化抗体;SDS-PAGE检测嵌合抗体纯度及分子量;ELISA及流式细胞术测定抗体结合CD36抗原的活性;通过血小板吞噬实验分析嵌合抗体参与CD36(+)血小板吞噬的能力。结果成功构建嵌合抗体轻、重链表达载体;共转染HEK293细胞后,经筛选及克隆化获得稳定表达嵌合抗体的细胞株;蛋白银染证实嵌合抗体的纯度高及分子量正确;流式细胞术及ELISA结果表明嵌合抗体具有结合人CD36抗原的活性;血小板吞噬实验表明Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体基本丧失介导单核细胞吞噬CD36(+)血小板的能力。结论本研究成功制备了Fc-沉默型抗人CD36嵌合抗体,并在体外证实其丧失介导CD36(+)血小板清除的能力,为修饰抗体用于CD36抗体介导的胎儿和新生儿同种免疫性血小板减少症(FNAIT)治疗研究奠定了理论基础。

基于FXR-Srebp1c-FAS通路及CD36探讨祛痰活血方抗非酒精性脂肪性肝病的机制

目的 以内源性脂肪酸合成相关法尼醇X受体(farnesoid X receptor,FXR)-固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-bindingprotein-1c,Srebp1c)-脂肪酸合成酶(fatty acid synthase,FAS)通路及外源性脂肪酸摄入相关的白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36)为切入点,探讨祛痰活血方抗非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)的分子机制。方法 雄性C57BL/6J小鼠,随机分为对照组、模型组、祛痰活血方组和易善复组,每组各10只。模型组、祛痰活血方组和易善复组给予高脂饲料喂养,4周后祛痰活血方组和易善复组开始给药干预,给药8周后取各组小鼠血清用于生化检测;肝组织用于病理、肝脏总胆固醇(cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)含量及FXR、Srebp1c、FAS、CD36基因及蛋白表达的检测。结果 与对照组比较,模型组小鼠体质量、肝质量明显增加(P<0.05);肝组织病理结果及肝脏TC、TG含量的升高(P<0.01)均提示明显脂肪变性;肝组织FXR、Srebp1c的m RNA表达水平,以及CD36的m RNA和蛋白表达均明显上升(P<0.01),FAS蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,祛痰活血组小鼠体质量、肝质量均明显降低(P<0.01);肝组织脂肪变性明显减轻;肝组织中FXR m RNA表达明显升高(P<0.01),Srebp1c、FAS、CD36的m RNA及蛋白表达均明显降低(P<0.05)。结论 外源性脂肪酸摄入增加可能是高脂引起的NAFLD的主要成因,祛痰活血方既抑制外源性脂肪酸摄入,亦减少内源性脂肪酸合成,双向调节改善NAFLD。

降钙素介导CD36、IL-17的表达对创伤性骨关节炎的影响

目的 探讨降钙素对白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)诱导的软骨细胞的保护作用并进一步研究其可能的机制。方法 2022年7月21日—11月10日以人软骨细胞为研究对象,使用不同浓度降钙素处理后,采用CCK-8试剂盒(cell counting kit CCK 8,CCK-8)实验筛选出降钙素最佳作用浓度进行后续实验。将人软骨细胞分为对照组、疾病组、治疗组,采用CCK-8法检测细胞活性,流式细胞术分析CD36表达和活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)产生情况,酶标法检测各组细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)和丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平,实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,q RT-PCR)检测降钙素、白介素-17(interleukin-17,IL-17)、基质金属蛋白酶13(matrix metalloproteinase 13,MMP13)、Ⅱ型胶原(type Ⅱcollagen,Col Ⅱ)的m RNA相对表达量,蛋白印迹法(Western blot)检测NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NOD-like receptor heat protein domain associated protein3,NLRP3)、消皮素D(gasdermin-D,GSDMD)、GSDMD-N的蛋白表达水平。结果 人软骨细胞的活力对降钙素呈浓度依赖性,后选择50 nM浓度的降钙素进行细胞实验。疾病组细胞伴随ColⅡ的m RNA相对表达量为(0.47±0.06)、CD36阳性率为(0.17±0.02)%、SOD为(151.14±12.26)U/mL,低于对照组的(1.00±0.09)、(1.50±0.16)%、(242.33±21.17)U/mL(P <0.05);与对照组比较,疾病组细胞中MMP13和IL-17m RNA相对表达量、ROS的平均荧光强度(mean fluorescence intensity,MFI)及MDA含量升高;同时,NLRP3和GSDMD的蛋白表达水平上升,而GSDMD-N蛋白表达水平下降。然而,降钙素的使用能够逆转IL-1β诱导软骨细胞引起的上述一系列指标变化。Pearson分析显示,降钙素与CD36表达呈正相关(r=0.922,P=0.001),与IL-17呈负相关(r=-0.881,P=0.002),CD36与IL-17的表达水平呈负相关(r=-0.650,P=0.023)。结论 降钙素对IL-1β诱导的软骨细胞损伤具有保护作用,其作用机制与介导CD36、IL-17的表达,缓解软骨细胞的应激炎症反应有关。

CD36对肥厚型心肌病小鼠内皮细胞增殖的影响及其机制探讨

目的:探讨CD36对肥厚型心肌病(HCM)小鼠内皮细胞增殖的影响及其机制。方法:采用3只心肌肌钙蛋白T(cTNT)^(R92Q)转基因小鼠作为实验对象(cTNT^(R92Q)组)。3只野生型C57BL/6小鼠作为对照组。检测cTNT^(R92Q)组小鼠心肌组织CD36表达,并以cTNT^(R92Q)转基因小鼠主动脉内皮细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为载体调控CD36表达,探讨CD36对HCM小鼠内皮细胞增殖的影响及其机制。结果:cTNT^(R92Q)组小鼠心肌组织中CD36 mRNA和蛋白表达水平均高于对照组,微血管密度低于对照组(P均<0.05)。cTNT^(R92Q)组小鼠主动脉内皮细胞CD36和p21蛋白表达水平均高于对照组(P均<0.05);增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白表达水平均低于对照组,主动脉内皮细胞增殖低于对照组(P均<0.05)。SiRNA-CD36抑制CD36后,PCNA、cyclin D1蛋白表达水平均升高,HUVEC增殖显著增加(P均<0.05)。进一步研究发现,CD36增加p38^(Thr180/Tyr182)和c-Jun氨基末端激酶(JNK)^(Thr183/Tyr185)磷酸化水平,激活p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/JNK信号通路并抑制HUVEC增殖,p38 MAPK特异性抑制剂SB239063和JNK特异性抑制剂SP600125能够逆转上述作用(P均<0.05)。结论:CD36通过激活p38 MAPK/JNK信号通路抑制HUVEC增殖,下调CD36表达能够促进内皮细胞增殖。

CD36抗体引起的胎儿新生儿同种免疫性血小板减少症中人脐静脉内皮细胞通透性作用机理的初步研究

目的探索CD36抗体导致胎儿新生儿同种免疫性血小板减少症(fetal/neonatal alloimmune thrombocytopenia,FNAIT)出现胎儿水肿的发病机制,为临床预防和治疗提供参考。方法利用已经建立的CD36单克隆抗体,与人外周血单个核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,PBMC)进行孵育,用ELISA法检测细胞培养上清中细胞因子(TNF-α和IL-1β)的浓度。用富细胞因子的细胞上清与人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)共同孵育,通过检测FITC-albumin的荧光强度,研究内皮细胞通透性的变化。结果经流式细胞术检测发现,CD36单克隆抗体可以与人的单核细胞结合。与同型对照抗体相比,CD36单克隆抗体与人的PBMC孵育后,细胞培养上清中检测到细胞因子TNF-α(pg/mL)(407.73±20.40 vs 29.38±4.72,P<0.05)和IL-1β(pg/mL)(247.14±83.59 vs 53.68±26.96,P<0.05)浓度升高。检测HUVEC培养transwell下室中的FITC-albumin荧光强度发现,CD36单克隆抗体与人PBMC孵育后的富细胞因子的细胞培养上清可以显著增加内皮细胞的通透性(CD36抗体vs同型对照抗体MFI值:492±16 vs 320±11,P<0.05)。结论CD36单克隆抗体与PBMC作用可导致HUVEC通透性增加,这可能是FNAIT胎儿水肿的发病机制之一。

通心络胶囊联合氯吡格雷对冠心病心绞痛的效果及对血清中五聚素3白细胞分化抗原36和白细胞分化抗原44的影响

冠心病心绞痛主要与粥样斑块的形成及继发改变有关,其可以引起管腔狭窄、供氧及供血发生障碍,进而诱发胸痛为主要特征的综合征[1],血清中的相关蛋白可以出现变化。五聚素3(PTX-3)是长链五聚体蛋白体,与炎症反应相关[2],可以促进粥样斑块的进展。白细胞分化抗原36(CD36)和白细胞分化抗原44(CD44)是单链跨膜糖蛋白,能提高血小板的聚集特性,与缺血性疾病相关,并对冠心病心绞痛有一定的作用[3],CD44在细胞粘附中的可能更明显。我们对我院收治的冠心病心绞痛应通心络胶囊及氯吡格雷进行治疗。

脑梗死患者血清五聚素3、甲壳质酶蛋白40和白细胞分化抗原36表达及检测临床意义

目的:探讨脑梗死患者血清中五聚素3(PTX-3)、甲壳质酶蛋白40(YKL-40)和白细胞分化抗原36(CD_(36))的表达特征,分析其临床意义及相关性,以期为临床工作提供支持。方法:收集97例急性脑梗死患者作为观察组,留取空腹血清,收集无明显器质性病变的成人血清标本32例作为对照组。应用酶联免疫吸附实验检测两组中PTX-3、YKL-40和CD_(36)的表达量,并进行统计学分析。结果:两组血清中PTX-3、YKL-40和CD_(36)的表达差别有统计学意义,观察组血清中PTX-3、YKL-40和CD_(36)的表达与梗死体积、病变严重程度及是否伴有高血压病密切相关,线性相关分析显示观察组中PTX-3和YKL-40的表达呈正相关性,其它指标间均未见明显相关性。结论:急性脑梗死患者血清中PTX-3、YKL-40和CD_(36)高表达,与病变的严重程度有关,也与患者是否伴有高血压有关,PTX-3和YKL-40具有协同正向作用。

白细胞分化抗原36的棕榈酰化位点突变对HepG2细胞自噬的影响

目的:探讨白细胞分化抗原36(cluster of differentiation 36,CD36)的棕榈酰化位点突变对HepG2细胞自噬的影响。方法:构建过表达野生型CD36(WT-CD36)和棕榈酰化位点突变型CD36(AA-SS)的HepG2细胞系。自噬双标腺病毒(GFP-mRFP-LC3腺病毒)感染细胞,用共聚焦显微镜观察自噬;细胞免疫荧光染色和共聚焦显微镜检测转录因子EB(transcription factor EB,TFEB)核转位;Western blot检测肝激酶B1(liver kinase B1,LKB1)和AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase,AMPK)总蛋白表达及其磷酸化水平;免疫共沉淀检测CD36与蛋白酪氨酸激酶Fyn的共聚体形成。结果:与WT-CD36组相比,AA-SS组细胞内GFP-mRFP-LC3腺病毒绿色荧光明显减弱,红色荧光明显增强,表明AA-SS-HepG2细胞的自噬-溶酶体流增强(P<0.01)。同时,与WT-CD36组相比,AA-SS组CD36与Fyn共聚体的形成显著减少(P<0.01),LKB1蛋白的磷酸化水平降低(P<0.01),而AMPK的磷酸化水平升高(P<0.01)。此外,TFEB在AA-SS组细胞的核内定位也较WT-CD36组显著增多(P<0.05)。结论:CD36的棕榈酰化位点突变能减少CD36/Fyn共聚体形成,抑制LKB1蛋白磷酸化,从而激活AMPK-TFEB通路,促进TFEB核转位,增强HepG2细胞自噬。

血单个核白细胞中CD36抗原基因表达的测定方法及其意义

为建立外周血单个核白细胞ＣＤ３６抗原基因表达的测定方法，本文采用反转录聚合酶链反应技术定量测定ＣＤ３６抗原基因的表达，用β－肌动蛋白作为内标物，用凝胶扫描技术进行定量。结果发现，反转录聚合酶链反应后电泳发现ＣＤ３６抗原ｃＤＮＡ片段为３９０碱基对，β－肌动蛋白ｃＤＮＡ片段为５４０碱基对，以ＣＤ３６抗原／β－肌动蛋白表示ＣＤ３６抗原基因表达量是一个稳定的方法，颈动脉粥样硬化病人ＣＤ３６抗原基因表达增加。结果提示，反转录聚合酶链反应是测定ＣＤ３６抗原基因表达的理想方法，可以用于动脉粥样硬化的研究。

骨髓基质细胞通过TSP-1/CD36通路对急性髓系白血病细胞影响的初步研究

目的:探讨骨髓基质细胞(bone marrow-derived mesenchymal stromal cells,BM-MSCs)对急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)细胞影响的作用机制。方法:构建MLL-AF9过表达诱导的AML小鼠模型,通过PCR比较AML小鼠和野生型小鼠(WT)BM-MSCs内TSP-1的表达差异。通过慢病毒载体使AML小鼠来源的BM-MSCs高表达TSP-1后,与AML细胞行transwell共培养,检测AML细胞表面TSP-1受体CD36及CD47的表达及AML细胞的生长情况。在共培养体系中加入CD36抑制剂N-油酰基硫代琥珀酰亚胺,检测AML细胞增殖、凋亡的变化。结果:AML小鼠BM-MSCs中TSP-1的表达低于对照组。过表达TSP-1的BM-MSCs与AML细胞行transwell共培养后AML细胞的生长受到抑制,且AML细胞表面的CD36受体表达升高,但CD47表达无明显差异。在共培养体系中加入CD36抑制剂N-油酰基硫代琥珀酰亚胺后,AML细胞增殖加快,凋亡减少。结论:TSP-1/CD36信号通路有望成为治疗AML的潜在靶点。

野生型p53基因导入对U937细胞分化、凋亡和CD36受体表达的影响(英文)

目的:研究野生型p53基因重组腺病毒载体(AdCMV-p53)导入对U937细胞分化、凋亡和清道夫受体CD36表达的影响。方法:AdCMV-p53导入U937细胞后,用细胞计数、细胞周期分析、台盼蓝染色排除法计数细胞悬液中的活细胞数目和NBT还原反应观察其对U937细胞生长、分化的影响;RT-PCR、免疫荧光和流式细胞分析检测AdCMV-p53导入对CD36表达的影响。结果:AdCMV-p53可以高效导入U937细胞,野生型p53基因导入促进U937细胞向巨噬细胞分化,台盼蓝染色发现实验组阳性细胞数(64.6±9.2) %较对照组(14.2±5.5) %明显增多,吞噬能力增强;NBT还原反应实验组(49.7±12.6) %较对照组(6.3±1.8) %升高。RT-PCR和流式细胞分析检测,野生型p53基因导入使得CD36 mRNA转录增强,CD36蛋白表达增加。结论:野生型p53基因能影响细胞分化和凋亡,并上调清道夫受体CD36的表达,对于动脉粥样硬化的预防和基因治疗具有潜在意义。

舒洛地特对高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用研究

目的:观察舒洛地特对高糖培养基中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原表达的抑制作用,探讨舒洛地特对肾脏的保护作用。方法:培养大鼠肾小球系膜细胞24 h后,将培养的细胞分为对照组(C组,普通培养基,含5.6 mmol·L^(-1)葡萄糖),甘露醇组(M组,24.2 mmol·L^(-1)甘露醇+C组),高糖组(H组,30 mmol·L^(-1)高糖MEM培养基)、舒洛地特干预组(S组,H组+1.0 LRU·ml^(-1)舒洛地特)。培养24 h后,RT-PCR和Western blotting法检测各组CD36 mRNA及蛋白的表达。结果:对照组和甘露醇组CD36mRNA(0.24±0.07和0.21±0.06)及蛋白(0.26±0.08和0.22±0.07)的表达差异无统计学意义(P>0.05),高糖组CD36 mRNA(0.62±0.11和0.24±0.07)及蛋白(0.83±0.23和0.26±0.08)表达显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),舒洛地特干预组CD36 mRNA(0.36±0.13和0.62±0.11)及蛋白(0.42±0.15和0.83±0.23)表达显著低于高糖组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:舒洛地特可抑制高糖环境中大鼠肾小球系膜细胞CD36抗原的表达,可能是舒洛地特发挥肾脏保护作用的机制之一。

抗-CD36单克隆抗体对人CD34^+造血干(祖)细胞增殖和分化的影响

目的探讨抗-CD36单克隆抗体对人CD34^+造血干(祖)细胞体外增殖和分化的影响。方法选择无各种产科并发症的健康足月产妇3名,取脐带血20 mL/(人)份,以Ficoll细胞分离液(1.077 g/mL)密度梯度800 g离心30 min后,流式细胞仪分选CD34^+造血干(祖)细胞,培养2—3代,四唑盐(MTT)比色法检测抗-CD36单克隆抗体对CD34^+细胞生长的影响;流式细胞术检测细胞凋亡,Annexin V/PI双染法和碘化丙啶(PI)单染法检测细胞周期。观察抗-CD36单克隆抗体对CD34^+造血干(祖)细胞凋亡和细胞周期的影响、对造血干(祖)细胞红系分化能力以及对红系集落形成单位(CFU-E)和红系爆式集落形成单位(BFU-E)生成的影响。结果流式细胞仪分选出经Ficoll分离脐带血获得的单个核细胞中约0.44%CD34^+造血干(祖)细胞。2、8、32、64、128μg/mL抗-CD36单克隆抗体分别与CD34^+造血干(祖)细胞体外共培养:单纯CD34^+造血干(祖)细胞培养(正常)组、抗-CD36单克隆抗体2及32μg/mL组,IgG(对照)组的OD值分别为1.05±0.12 vs 0.9±0.15 vs 0.81±0.11 vs 1.06±0.18(P<0.01)。Annexin V流式检测凋亡率(%):正常组、对照组与2μg/mL抗-CD36单克隆抗体组分别为10.13SymbolqB@1.42 vs 10.51SymbolqB@1.75 vs 24.57SymbolqB@2.75(P<0.05)。G_1/S值:正常组、对照组与2μL/mL抗-CD36单克隆抗体组分别为3.95±0.25 vs 4.36±0.55 vs 7.35±0.65(P<0.05)。CD34^+造血干(祖)细胞定向分化红系(CFU-E/BFU-E克隆形成数):正常组、对照组与抗-CD36单克隆抗体组分别为169±12、172±12和85±6(P<0.05)。结论抗-CD36单克隆抗体诱导人CD34^+造血干(祖)细胞凋亡,细胞增殖减少和红系CFU-E/BFU-E克隆能力降低。

慢性阻塞性肺疾病患者外周血单个核细胞CD36 mRNA、血清ApoE水平对急性加重期发生的预测价值

慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmo-nary disease,COPD)是一种慢性气道炎症性疾病,其特征是持续性气流受限、肺功能加速丧失和不可逆的肺损伤^([1])。COPD患者表现出肺功能突然恶化,称为COPD急性加重期(acute exacerbation of COPD,AECOPD),其特征是出现各种快速恶化的呼吸道症状.

CD36/Src/ERK通路参与单核细胞向巨噬细胞的分化

目的:探讨脂肪酸转位酶(fatty acid translocase,FAT/CD36)在单核细胞向巨噬细胞分化中的作用。方法:采用不同浓度(0、100和200μg/L)佛波酯(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)诱导人源单核细胞THP-1向巨噬细胞分化;用CD36小片段干扰RNA(CD36 small interfering RNA,siCD36)干扰THP-1细胞CD36的表达;又用CD36 cDNA的重组慢病毒转染THP-1细胞,构建CD36过表达细胞系。显微镜下观察细胞形态;结晶紫染色法检测细胞黏附能力;流式细胞术和Western blot检测细胞分化过程中CD36的蛋白表达,real-time PCR检测CD36、CD11b和CD80的mRNA水平。Western blot检测THP-1细胞向巨噬细胞分化过程中细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)和Src酪氨酸激酶的表达。结果:THP-1细胞向巨噬细胞分化的过程中,CD36表达增加(P<0. 01)。与正常细胞相比,siCD36干扰细胞的表面积减小,黏附能力降低(P<0. 01),细胞中CD11b和CD80的mRNA水平下降(P<0. 01);而CD36过表达细胞的表面积明显增大,黏附能力增强(P<0. 05),且细胞中CD11b和CD80的mRNA水平升高(P<0. 01)。THP-1细胞向巨噬细胞分化过程中,ERK的磷酸化明显增加,而siCD36干扰的THP-1细胞分化过程中ERK的磷酸化和Src的磷酸化则明显减少(P<0. 05)。结论:CD36通过增强Src磷酸化从而促进ERK的磷酸化及活化,最终促进THP-1细胞向巨噬细胞分化。

24-乙酰泽泻醇A对氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞脂代谢因子ABCA1、CD36及炎症因子CD147、MMP-9的影响

目的通过体外实验探讨24-乙酰泽泻醇A对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导大鼠腹腔巨噬细胞脂代谢因子ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、B族清道夫受体(CD36)和炎症因子细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达的影响。方法分别采用50 mg/L ox-LDL和10 mg/L Dil-ox-LDL诱导巨噬细胞,10 mg/L 24-乙酰泽泻醇A进行干预。荧光显微镜观察细胞内Dil-ox-LDL蓄积情况;蛋白免疫印迹检测细胞ABCA1、CD36、CD147、MMP-9蛋白的表达。结果 10 mg/L Dil-ox-LDL诱导后大鼠腹腔巨噬细胞内有大量的Dil-ox-LDL蓄积,10 mg/L 24-乙酰泽泻醇A干预后,细胞内Dil-ox-LDL蓄积明显减轻。与对照组比较,50 mg/L ox-LDL诱导后大鼠腹腔巨噬细胞ABCA1、CD36和CD147、MMP-9蛋白表达明显增加,10 mg/L 24-乙酰泽泻醇A干预后,ABCA1蛋白表达进一步上升(P<0.01),CD36、CD147和MMP-9蛋白表达被明显抑制(P<0.05或P<0.01)。结论 24-乙酰泽泻醇A上调巨噬细胞的脂代谢因子ABCA1和抑制CD36的表达,减少胆固醇蓄积,同时抑制炎症因子CD147和MMP-9的分泌。