泰素帝对卵巢癌细胞分泌转化生长因子的影响及其与细胞增殖抑制的关系

目的 从细胞水平观察泰素帝对卵巢癌细胞株HO 8910的抑制作用及对分泌转化生长因子α、β的影响。 方法 细胞增殖抑制实验检测不同浓度的泰素帝对人卵巢癌细胞株HO 8910增殖的抑制率 ;放免法测泰素帝作用后TGF α的变化 ;ELISA法测泰素帝作用后TGF β1的变化。结果 泰素帝在一定浓度范围对HO 8910细胞增殖有明显抑制作用 ;泰素帝作用 48小时后 ,TGF α水平降低 ,TGF β1水平升高 ;TGF α与细胞增殖呈正相关 ,TGF β1与细胞增殖呈负相关。结论 泰素帝对人卵巢癌细胞有明显的抑制作用 ,在一定范围内呈量 效关系 ;正性生长因子TGF α及负性生长因子TGF β1可能参与泰素帝对卵巢癌细胞的作用机制。

尿激酶对胸膜成纤维细胞分泌转化生长因子-β1的影响

目的探讨胸膜成纤维细胞(FB)分泌转化生长因子-β1(TGF-β1)的作用及尿激酶(UK)对其分泌作用的影响。方法取健康雄性SD大鼠胸膜,培养、纯化并鉴定FB。设对照组和实验组。对照组分为2个亚组:对照0组由不含胸膜FB的24个样本组成,加入无血清的RPMI 1640培养液;对照1组由24个胸膜FB样本组成,加入无血清的RPMI 1640培养液,培养24 h后,用酶联免疫吸附法测定上清液中TGF-β1的含量。实验组分为4个亚组,共24个样本,分别加入5 000(A组)1、0 000(B组)、20 000(C组)和30 000 IU/mL(D组)的UK,培养24 h后取上清液,测定TGF-β1的含量。结果胸膜FB分泌TGF-β1的量为(3035.655±394.975)ng/L;A、B、C、D组(5 000-30 000 IU/mLUK)对TGF-β1均有抑制作用,A组与B、C、D组之间比较有显著性差异(P<0.01),但B、C、D组之间比较无显著性差异(P>0.05)。对照0组未检测出TGF-β1。结论胸膜FB能分泌TGF-β1,UK能抑制其分泌。

α-促黑素细胞激素对瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌转化生长因子-β1的影响

目的 :研究α 促黑素细胞激素 (α MSH)对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌转化生长因子 β1(TGF β1)的影响 ,为研究瘢痕疙瘩的病因提供新的依据。 方法 :取人的瘢痕疙瘩组织 ,利用组织块培养法进行成纤维细胞原代培养 ,DMEM培养液传代、扩增培养 ,加入 10 -6mmol/L浓度的α MSH ,应用ELISA方法检测其水平 ,分析α MSH对人瘢痕疙瘩成纤维细胞分泌TGF β1的影响。 结果 :10 -6mmol/L浓度的α MSH可明显促进瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF β1的分泌。 结论 :一定剂量的α MSH对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞TGF β1的分泌具有促进作用。

炙甘草汤对脐静脉内皮细胞分泌转化生长因子与G-CSF的影响

目的研究炙甘草汤对转化生长因子(TGF-β1)与G-CSF分泌的影响。方法选取炙甘草汤与右归饮2个方剂,脐静脉内皮细胞设空白对照组、炙甘草汤组、右归饮组及混合组,每组分别加入相应中药液,于培养第3,6,9天收集细胞培养上清液,ELISA检测上清液中TGF-β1与G-CSF的分泌水平。结果 TGF-β1分泌水平:给药组均明显刺激脐静脉内皮细胞产生TGF-β1,与空白对照组相比差异有统计学意义(P<0.001)。实验初期(第3,6天)炙甘草汤刺激效果较强,实验后期(第9天)混合给药组表现出更好的刺激效果。G-CSF分泌水平:给药组均明显刺激脐静脉内皮细胞产生G-CSF,与空白对照组相比,P<0.001。混合给药组刺激效果最明显,其次为炙甘草汤组。给药后细胞因子分泌均随时间延长而增加。结论炙甘草汤能增强细胞TGF-β1与G-CSF的分泌,当有右归饮辅助时这种效应更加明显,其刺激增强作用有时间累积效应,随时间延长TGF-β1与G-CSF的分泌增多。

虫草肾茶胶囊对人肾小球系膜细胞分泌转化生长因子β1及细胞外基质的影响

目的研究虫草肾茶胶囊对培养在高糖条件下系膜细胞(HMC)分泌转化生长因子β1(TGF-β1)及细胞外基质(ECM)的影响,探讨其在糖尿病肾病(DN)防治中的意义。方法应用血清药理学方法,制备虫草肾茶胶囊及福辛普利药物血清,利用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定经体外培养的HMC在各种处理因素的作用下上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白和层粘连蛋白的表达情况,并以福辛普利为对照。结果高糖能明显促进HMC分泌TGF-β1、纤维连接蛋白和层粘连蛋白(P<0.05或P<0.01)。而虫草肾茶胶囊能抑制HMC分泌TGF-β1、纤维连接蛋白和层粘连蛋白,并呈一定量效关系(P<0.05或P<0.01),且某些方面明显优于福辛普利。结论高糖可促进HMC TGF-β1及ECM分泌,虫草肾茶胶囊能明显抑制高糖条件下HMC分泌TGF-β1及ECM,有助于预防糖尿病肾小球硬化的发生和发展。

肿瘤相关巨噬细胞分泌转化生长因子-β诱导蛋白影响胶质瘤干细胞特性的体外研究

目的探讨转化生长因子⁃β诱导蛋白(TGFBI)在胶质母细胞瘤中的异质性表达及其促进胶质瘤干细胞恶性行为的作用机制。方法检索肿瘤基因组学图谱计划(TCGA)、中国脑胶质瘤基因组图谱计划(CGGA)、脑肿瘤分子数据库(REMBRANDT)、Oncomine数据库中TGFBI在不同级别胶质瘤、不同亚型胶质母细胞瘤中的表达水平,以及TGFBI表达变化与患者生存期、胶质瘤相关巨噬细胞(TAMs)标志物CD11b和CD163的相关性。体外诱导人外周血单核细胞系U937分化为Primed⁃U937细胞和M2型巨噬细胞样细胞,实时定量聚合酶链反应检测诱导过程中TGFBI,M1型TAMs标志物CD80、白细胞介素⁃6(IL⁃6),以及M2型TAMs标志物CC趋化因子配体18(CCL18)、血管内皮生长因子A(VEGFA)的表达变化。免疫荧光染色和免疫组织化学染色观察胶质母细胞瘤细胞TGFBI与TAMs标志物CD163和胶质瘤干细胞标志物SOX2的分布情况。体外培养人原代胶质瘤干细胞系NCH⁃421K,测定重组人TGFBI(rhTGFBI)对细胞成球能力和侵袭能力的影响。结果(1)来自TCGA、CCGA、REMBRANDT、Oncomine数据库的数据分析显示,TGFBI表达变化与胶质瘤分级和恶性程度呈正相关,与患者生存期呈负相关,与TAMs标志物CD11b和CD163表达水平呈正相关。(2)在U937细胞诱导分化为M2型TAMs过程中,M1型TAMs标志物CD80(P=0.000)和IL⁃6(P=0.001)表达水平降低,M2型TAMs标志物CCL18(P=0.000)和VEGFA(P=0.002)表达水平升高,TGFBI表达水平亦升高(P=0.001)。(3)免疫荧光染色和免疫组织化学染色显示,胶质母细胞瘤细胞中TGFBI与TAMs标志物CD163和胶质瘤干细胞标志物SOX2均存在共定位。(4)体外成球实验和侵袭实验显示,经rhTGFBI处理后,NCH⁃421K细胞成球数目多于(P=0.000)、细胞球侵袭能力强于(P=0.001)对照组。结论胶质母细胞瘤TGFBI可由M2型TAMs分泌并促进胶质瘤干细胞成球、侵袭等恶性行为。

系统性红斑狼疮患者血清及骨髓基质细胞分泌转化生长因子β1水平

背景:转化生长因子β1是重要的免疫调节因子已被证实,但有关其与系统性红斑狼疮之间的关系还不很清楚。目的:检测转化生长因子β1在系统性红斑狼疮患者血清及骨髓基质细胞培养液中的水平。设计:病例-对照分析。对象:选择2006-02/2007-02中山大学附属第五医院门诊及住院的系统性红斑狼疮患者55例,其中5例同意行骨髓像检查的重度系统性红斑狼疮患者合并中度贫血,经实验室检查符合慢性病贫血;应用SLEDAI评分标准对患者活动度进行评估,轻度13例、中度22例、重度20例。以同期自愿献血的健康者24例作为对照组,其中4例经临床表现及实验室诊断为缺铁性贫血。方法:所有受试者晨起空腹抽取静脉血2mL,离心后取上清液,-20℃保存待测。采用密度梯度离心和贴壁筛选法对5例贫血系统性红斑狼疮患者和4例缺铁性贫血患者骨髓基质细胞进行分离培养,制备骨髓基质细胞培养上清液待测。主要观察指标:采用双抗体酶联免疫吸附法检测各组血清标本、骨髓基质细胞培养上清液标本中的转化生长因子β1水平,及其与SLEDAI积分、血沉、补体C3的相关性。结果:与对照组比较,系统性红斑狼疮组血清转化生长因子β1水平明显降低(P<0.01);且轻、中、重度系统性红斑狼疮患者血清转化生长因子β1水平逐渐降低(P<0.05)。与对照组比较,系统性红斑狼疮组骨髓基质细胞培养上清液中转化生长因子β1水平明显降低(P<0.01)。系统性红斑狼疮患者血清转化生长因子β1水平与SLEDAI积分呈负相关(r=-0.862,P<0.01),与疾病同期活动指标血沉呈负相关(r=-0.56,P<0.05),与补体C3呈正相关(r=0.78,P<0.05)。结论:系统性红斑狼疮骨髓基质细胞分泌转化生长因子β1存在异常,并且转化生长因子β1可能参与了系统性红斑狼疮的发病及转归,对判断其病情活动度及研究系统性红斑狼疮的发病机制有一定临床意义。

巨噬细胞分泌转化生长因子β对百草枯中毒致肺纤维化的影响

目的研究巨噬细胞参与百草枯(PQ)致肺纤维化可能的作用机制。方法用佛波酯(PMA)320 nmol·L^(-1)诱导THP-1细胞24 h获得巨噬细胞。检测PQ 20,40,60,80,100,120,140,160和180μmol·L^(-1)染毒该巨噬细胞48 h,CCK-8法检测细胞存活率。用Transwell技术构建该巨噬细胞和人胚肺成纤维细胞MRC-5共培养体系,PQ 100μmol·L^(-1)染毒48 h建立肺纤维化细胞模型;染毒同时加入转化生长因子β(TGF-β)受体抑制剂GW78838810μmol·L^(-1)抑制TGF-β受体,实时荧光定量PCR检测巨噬细胞和MRC-5细胞TGF-βmRNA表达,Western印迹法检测巨噬细胞TGF-β蛋白、MRC-5细胞纤维化相关蛋白α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和纤连蛋白及TGF-β/Smads通路相关蛋白Smad2和基质金属蛋白酶9(MMP-9)蛋白表达,免疫荧光法检测MRC-5细胞纤维状肌动蛋白表达。结果PQ在20~180μmol·L^(-1)浓度范围内可抑制巨噬细胞存活,IC_(50)为57.13μmol·L^(-1)。与细胞对照组相比,PQ染毒组巨噬细胞TGF-βmRNA和蛋白表达显著增加(P<0.05);与MRC-5细胞相比,巨噬细胞在PQ染毒前后TGF-βmRNA均显著增加(P<0.05)。PQ染毒共培养体系48 h,MRC-5细胞Smad2和MMP-9蛋白表达显著增加(P<0.05,P<0.01),α-SMA和纤连蛋白显著增加(P<0.01);与PQ染毒组相比,GW788388处理可显著降低MRC-5细胞Smad2和MMP-9蛋白表达(P<0.05)及α-SMA和纤连蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。免疫荧光染色结果表明,与PQ染毒组相比,GW788388处理后MRC-5细胞纤维状肌动蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论PQ染毒共培养体系后,巨噬细胞可能通过旁分泌TGF-β激活肺成纤维细胞TGF-β/Smads通路而促进肺纤维化。

大麻二酚对转化生长因子β1诱导肝星状细胞活化和肝纤维化的作用

背景:大麻二酚具有抗炎、抗氧化等药理学作用,并且不具有精神活性,在肝脏疾病中的研究日渐增加,但其对肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号转导通路的作用尚未明确。目的:探讨大麻二酚对肝星状细胞中转化生长因子β1/Smad信号转导通路的影响,研究其抗肝纤维化的可能机制。方法:(1)体外实验:选取大鼠肝星状细胞株(HSC-T6),分6组培养:对照组常规培养24 h,单纯药物组加入大麻二酚培养24 h,造模组加入转化生长因子β1培养24 h,造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组均加入转化生长因子β1培养24 h后分别加入1,5μmol/L大麻二酚或水飞蓟素培养24 h。培养结束后,检测各组细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路蛋白表达。(2)动物体内实验:将C57BL/6J小鼠随机分为5组,每组8只:假手术组不造模,造模组、造模+低剂量药物组、造模+高剂量药物组、造模+阳性对照组通过胆管结扎法建立肝纤维化模型,造模3周后分别腹腔注射4,8 mg/kg大麻二酚或水飞蓟素,1次/d,连续给药7 d。给药结束后,检测各组小鼠肝功能、肝脏病理形态及α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、转化生长因子β1/Smad信号转导通路相关蛋白表达。结果与结论:(1)体外实验:与对照组比较,造模组HSC-T6细胞α-平滑肌肌动蛋白与Ⅰ型胶原mRNA表达、白细胞介素1β与肿瘤坏死因子α水平以及Ⅰ型胶原、转化生长因子β1、p-Smad2/3蛋白表达均升高(P<0.05),Smad7蛋白表达降低(P<0.05);两种剂量大麻二酚处理可改善转化生长因子β1诱导的HSC-T6细胞上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组改善作用更明显;(2)体内实验:与假手术组比较,模型组小鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶活性升高(P<0.05),肝组织中炎性细胞浸润及胶原含量增加(P<0.05),转化生长因子β1/Smad信号转导通路被激活,α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原蛋白表达升高(P<0.05);两种剂量大麻二酚干预可减轻造模小鼠上述指标的变化,并且以造模+高剂量药物组效果更明显;(3)结果表明,大麻二酚通过抑制肝星状细胞转化生长因子β1/Smad信号传导通路的激活抑制肝纤维化。

血清转化生长因子β1、白细胞介素-6、Toll样受体-4、核转录因子κB联合评估非小细胞肺癌放射性肺炎病情严重程度的价值

目的探讨血清转化生长因子β1(TGF-β1)、白细胞介素-6(IL-6)、Toll样受体-4(TLR-4)和核转录因子κB(NF-κB)联合评估非小细胞肺癌(NSCLC)放射性肺炎(RP)病情严重程度的价值。方法选取104例NSCLC放疗后继发RP患者作为研究组,另选取52例NSCLC放疗后未继发RP患者作为对照组。比较2组患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平。比较研究组不同程度RP患者放疗前后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平,分析各血清指标单独及联合评估NSCLC放疗后RP病情程度的价值。结果放疗结束后,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);放疗结束后,随着RP病情程度的增加,研究组患者血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平呈升高趋势,差异有统计学意义(P<0.05)。受试者工作特征(ROC)曲线分析结果显示,放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平评估1级RP的曲线下面积(AUC)分别为0.787、0.718、0.783、0.801,评估≥2级RP的AUC分别为0.729、0.740、0.793、0.825;血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB阳性表达患者发生≥2级RP的风险分别是阴性表达患者的2.473、2.275、2.610、5.267倍(P<0.05);血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB联合评估≥2级RP的AUC为0.939,敏感度为76.00%,特异度为97.47%。结论NSCLC患者放疗结束后血清TGF-β1、IL-6、TLR-4、NF-κB水平均与RP病情严重程度呈正相关,四者联合评估≥2级RP的价值显著,可为临床控制RP病情提供参考依据。

胰岛素样生长因子1对人RPE细胞分泌TGF-β2、MMP-2的影响及机制研究

目的研究胰岛素样生长因子1(IGF-1)对人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19)表达转化生长因子β2(TGF-β2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)的影响,并探索其作用机制。方法ARPE-19细胞分别按不同浓度IGF-1和不同浓度LY294002培养6 h、12 h、24 h、48 h,采用CCK-8法检测细胞活力,确定IGF-1、LY294002的最佳作用浓度与时间。细胞划痕法检测细胞迁移活性。ELISA法检测细胞培养上清液中TGF-β2浓度。将ARPE-19细胞分为对照组、IGF-1组(80μg·L^(-1) IGF-1)、IGF-1+LY294002组(80μg·L^(-1) IGF-1+30 mmol·L^(-1) LY294002)、LY294002组(30 mmol·L^(-1) LY294002),使用无血清DMEM/F12培养基培养,对照组不做任何处理,分别采用RT-PCR、Western blot检测细胞中TGF-β2、MMP-2、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(AKT)的mRNA和蛋白表达量。结果与0μg·L^(-1) IGF-1比较,80μg·L^(-1) IGF-1的细胞活力24 h变化显著(P<0.05),故确定其为IGF-1最佳作用浓度和时间。与0 mmol·L^(-1) LY294002比较,24 h的30 mmol·L^(-1) LY294002接近半数抑制浓度,故确定其为LY294002最佳作用时间和浓度。细胞划痕法检测结果显示,0μg·L^(-1) IGF-1组、40μg·L^(-1) IGF-1组、80μg·L^(-1) IGF-1组细胞迁移率整体比较及两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。ELISA检测结果显示,0μg·L^(-1) IGF-1组、40μg·L^(-1) IGF-1组、80μg·L^(-1) IGF-1组细胞上清液中TGF-β2浓度整体比较及两两比较差异均有统计学意义(均为P<0.05)。RT-PCR、Western blot检测结果显示,IGF-1、LY294002培养24 h,与对照组比较,IGF-1组细胞中TGF-β2、MMP-2、PI3K、AKT的mRNA与蛋白表达水平均升高,而LY294002组细胞中TGF-β2、MMP-2、PI3K、AKT的mRNA与蛋白表达水平均下降(均为P<0.05);与IGF-1组比较,IGF-1+LY294002组细胞中TGF-β2、MMP-2、PI3K、AKT的mRNA与蛋白表达水平均下降(均为P<0.05)。结论IGF-1能促进ARPE-19细胞增殖、迁移;IGF-1可能通过PI3K/AKT信号通路上调ARPE-19细胞中TGF-β2、MMP-2的表达,参与近视的发生与发展。

肾络通对大鼠系膜细胞外基质分泌及转化生长因子β_1表达的影响

目的探讨肾络通药物血清对大鼠系膜细胞外基质不同成分的抑制作用及对转化生长因子β1(TGFβ1)表达的调节作用。方法以体外培养大鼠肾小球系膜细胞及血清药理学方法为基础,采用酶联免疫吸附试验检测细胞外基质中纤维连接蛋白(FN)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)的含量;采用逆转录多聚酶链反应(RTPCR)检测TGFβ1mRNA的表达。结果细胞外基质FN,ColⅣ的含量与TGFβ1mRNA的表达呈正相关关系,肾络通对二者均有抑制作用。结论肾络通能够减少细胞外基质的积聚,抑制TGF-β1的分泌与表达,从而进一步明确了其防治多种肾小球疾病,延缓肾小球硬化的作用机制。

益气养阴消癥通络中药对高糖联合AngⅡ培养大鼠肾小球系膜细胞分泌转化生长因子β_1和结缔组织生长因子的影响

目的探讨益气养阴消癥通络中药对高糖联合血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)培养的大鼠肾小球系膜细胞分泌转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)的影响,为进一步研究其防治糖尿病肾病(DN)的作用机理提供依据。方法原代培养肾小球系膜细胞(MCs),实验共分为5组:低糖对照组、高糖组、高糖+AngⅡ组、中药血清组、厄贝沙坦血清组。于第5代时,予高糖、高糖联合AngⅡ刺激,并同时进行益气养阴消癓通络中药及厄贝沙坦西药血清干预,48 h后ELISA法检测细胞上清TGF-β1、纤维连接蛋白(FN)、层粘连蛋白(LN)的蛋白含量,Western blot检测CTGF蛋白表达水平。结果与低糖对照组比较,其他组TGF-β1、CTGF、FN、LN表达均明显升高;与高糖+AngII组比较,厄贝沙坦血清、中药血清组TGF-β1、CTGF、FN、LN表达均明显下降(P<0.01)。结论益气养阴消癥通络中药可能通过抑制CTGF表达而有效降低TGF-β1的水平,从而抑制细胞外基质的合成,发挥其保护肾脏的作用。

艾灸大鼠天枢、气海穴对结肠成纤维细胞分泌胰岛素样生长因子Ⅰ、转化生长因子β1的调控作用

目的:研究显示,胰岛素样生长因子Ⅰ和转化生长因子β1与溃疡性结肠炎患者肠纤维化的形成关系密切。实验通过艾灸对大鼠结肠成纤维细胞分泌胰岛素样生长因子Ⅰ、转化生长因子β1的影响,探索艾灸防治溃疡性结肠炎肠纤维化机制。方法:实验于2004-05/2005-07在上海中医药大学实验动物室和国家中医药管理局针灸免疫三级实验室完成。①实验材料:SPF级雄性SD大鼠75只,体质量200g左右。②实验分组及处理:采用免疫学方法加局部刺激制备溃疡性结肠炎大鼠模型,随机将大鼠分为正常组、模型组、隔药灸组、温和灸组和西药组。隔药灸组、温和灸组选取天枢、气海穴分别进行隔药灸、温和灸治疗,西药组柳氮磺胺吡啶溶液灌胃治疗,模型组和正常组仅固定不做治疗。治疗结束后麻醉下处死大鼠,剖取结肠组织,分离并培养结肠成纤维细胞。③实验评估:用酶联免疫吸附法检测各组大鼠成纤维细胞上清液中胰岛素样生长因子Ⅰ、转化生长因子β1含量。结果:每组取8只进入结果分析。①造模大鼠结肠黏膜缺损,溃疡形成,胶原纤维增生,Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原纤维排列紊乱,数量增多;肉芽组织、纤维组织增生。②模型组大鼠结肠成纤维细胞大量分泌转化生长因子β1、胰岛素样生长因子Ⅰ;与模型组比较,隔药饼灸、温和灸组大鼠转化生长因子β1分泌量减少(P<0.05,P<0.01),隔药饼灸、温和灸和西药组大鼠胰岛素样生长因子Ⅰ分泌量减少(P均<0.01)。结论:艾灸大鼠天枢、气海穴能抑制大鼠结肠成纤维细胞分泌促细胞外基质细胞因子胰岛素样生长因子Ⅰ、转化生长因子β1,减少细胞外基质的积聚,达到防治肠纤维化的作用。

银屑病患者皮肤间充质干细胞分泌表皮生长因子、转化生长因子-β1水平及意义

目的:比较银屑病患者与正常人皮肤间充质干细胞(skin-derived mesenchymal stem cells,SMSCs)生长特性及其分泌表皮生长因子(EGF)、转化生长因子(TGF)-β1水平,揭示银屑病患者皮损微环境中SMSCs存在异常。方法:酶消化法分离银屑病组与正常人对照组SMSCs,在倒置相差显微镜下观察细胞形态,流式细胞仪检测细胞免疫表型,成脂、成骨诱导体系鉴定细胞多系分化能力,ELISA法检测细胞培养上清液中EGF、TGF-β1浓度。结果:两组细胞形态均存在异质性。第3代SMSCs表面抗原CD29、CD44、CD73、CD90及CD105表达阳性,CD34、CD45及人白细胞DR抗原(HLA-DR)表达阴性。细胞成脂诱导14d油红O染色阳性,成骨诱导21 d茜素红S染色阳性。银屑病组SMSCs分泌EGF水平高于正常人对照组(P<0.05),分泌TGF-β1水平低于正常人对照组(P<0.05)。结论:该实验建立了稳定的银屑病患者SMSCs体外分离培养方法,发现细胞形态存在异厨性,银屑病组SMSCs分泌EGF、TGF-β1水平异常,提示其皮损微环境中SMSCs可能存在异常。

牛磺熊去氧胆酸通过调节内质网应激抑制转化生长因子β1所诱导的心肌成纤维细胞纤维化

目的探讨牛磺熊去氧胆酸(TUDCA)对转化生长因子β1(TGF-β1)所诱导的心肌成纤维细胞(CFs)活化的作用及相关机制,为TUDCA治疗糖尿病心肌纤维化提供新的治疗目标。方法提取原代SD乳鼠CFs和心肌细胞,通过免疫荧光法鉴定CFs的纯度。分别将高糖培养下的CFs用不同时间的TGF-β1干预,用Western blot检测内质网应激(ERS)通路相关蛋白和纤维化指标的表达,探讨TGF-β1对CFs活化及ERS相关通路的影响。用Western blot检测CFs和心肌细胞内同型半胱氨酸内质网应激泛素样结构域1(Herpud1)的表达情况。通过沉默Herpud1的表达及用Transwell和Western blot检测沉默Herpud1后CFs纤维化指标的表达,探讨Herpud1在TGF-β1诱导的CFs活化中的作用。用CCK-8检测不同浓度的TUDCA处理下CFs的活力。用免疫荧光和Western blot检测TUDCA对TGF-β1诱导的CFs中Herpud1、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、转录激活因子6(ATF6)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)和Ⅰ型胶原蛋白(CollagenⅠ)表达的影响。为进一步明确Herpud1在TUDCA抑制CFs活化中的作用,用Western blot检测过表达Herpud1后相关蛋白的表达情况。结果在成功构建CFs纤维化模型的基础上,TGF-β1能够诱导CFs活化及ERS通路相关蛋白的表达;Herpud1在CFs中的表达高于心肌细胞;敲除Herpud1可抑制TGF-β1所诱导的CFs活化;TUDCA能显著降低TGF-β1诱导的CFs中GRP78、ATF6、α-SMA、Vimentin和CollagenⅠ的表达水平;此外,过表达Herpud1还可逆转TUDCA对TGF-β1诱导的CFs活化的抑制。结论下调Herpud1基因的表达是TUDCA抑制TGF-β1诱导的CFs纤维化的机制之一。

丹参酮ⅡA对溶血磷脂酸致新生大鼠心脏成纤维细胞增殖及分泌转化生长因子β1的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对溶血磷脂酸诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞(CF)增殖以及分泌转化生长因子β1的影响。方法:采用胰酶消化法和差速贴壁法获取心肌成纤维细胞,采用MTT法检测细胞增殖,用酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定不同条件下培养的CF培养液上清中的转化生长因子β1(TGF-β1)水平。结果:各组吸光度随时间增长而增加。与溶血磷脂酸组相比,低浓度丹参酮ⅡA组对溶血磷脂酸致CF增殖呈抑制趋势,但无显著差异。随着作用时间延长,浓度升高,各组与溶血磷脂酸组相比,吸光度显著降低(P<0.05或P<0.01);与溶血磷脂酸组相比,低浓度丹参酮ⅡA组对溶血磷脂酸致CF分泌TGF-β1呈抑制趋势,但无统计学差异(P>0.05),高浓度丹参酮ⅡA组在24 h后即明显降低(P<0.05),48、72 h后显著降低(P<0.01)。结论:丹参酮ⅡA可以浓度依赖性抑制CF的增殖及分泌TGF-β1,丹参酮ⅡA可能通过抑制TGF-β1的分泌抑制CF增殖。

原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞自分泌转化生长因子β1浓度检测及对转化生长因子β1增殖的调节

背景:体外实验常采用外源性转化生长因子β1刺激来观察细胞增殖变化,易忽略细胞本身自分泌转化生长因子β1的影响。目的:检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞(L929)自分泌转化生长因子β1的浓度和细胞增殖的变化。方法:Elisa试剂盒检测原代成纤维细胞和纤维肉瘤细胞各时相点细胞内和培养上清中生长转化因子β1水平。结果与结论:纤维肉瘤细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而升高,原代成纤维细胞内转化生长因子β1浓度随培养时间延长而降低;两种细胞培养上清转化生长因子β1浓度均随时间而上升,但纤维肉瘤细胞显著高于原代成纤维细胞(P<0.01),峰值时达到原代成纤维细胞的20倍;两种细胞增殖曲线在72h内均随时间而显著增高(P<0.01),同一时间点比较,纤维肉瘤细胞明显高于原代成纤维细胞。提示自分泌转化生长因子β1具有促进细胞增殖的作用,不同的自分泌水平可能是影响原代成纤维细胞这种正常细胞和纤维肉瘤细胞肿瘤细胞对于外源转化生长因子β1反应不同的重要原因。

甲状旁腺激素促进系膜细胞合成分泌转化生长因子β和纤维连接蛋白的实验研究

目的 :研究甲状旁腺激素 (PTH)对大鼠系膜细胞合成与分泌转化生长因子 β(TGF β)和纤维连接蛋白(FN)的影响及其可能机制。 方法 :①分别以 10 -12 、10 -11、10 -10 、10 -9、10 -8mmol/L的hPTH1 3 4刺激大鼠系膜细胞6、12、2 4、48h后 ,ELISA方法测定上清中TGF β和FN的浓度 ;②分别以 10 -12 ～ 10 -8mol/L的hPTH1 3 4刺激大鼠系膜细胞 48h后 ,半定量RT PCR方法检测细胞TGF βmRNA的表达 ;③以 10 -8mol/L的hPTH1 3 4分别刺激大鼠系膜细胞 6～ 48h ,采用半定量RT PCR方法检测细胞TGF βmRNA的表达。④分别以 10 -12 ～ 10 -8mol/L的hPTH1 3 4和 10ng/L的抗TGF β抗体共培养大鼠系膜细胞 ,以无抗TGF β抗体为对照 ,48h后测定上清中FN的水平。⑤以 10 -8mol/L的hPTH1 3 4与 10 μg/L的抗TGF β抗体共同刺激大鼠系膜细胞 ,分别于 6～ 48h测定上清中FN的浓度 ,以无抗TGF β抗体为对照。 结果 :①ELISA结果显示 ,hPTH1 3 4促进大鼠系膜细胞合成与分泌TGF β和FN ,且具有浓度依赖和时间依赖性特点 ,当PTH浓度为 10 -8mol/L时 ,其促分泌作用达高峰 (P <0 0 1) ;②半定量RT PCR方法结果显示 ,hPTH1 3 4促进大鼠系膜细胞TGF βmRNA的表达 ,并具有浓度依赖和时间依赖性特点 (各组与对照组间P <0 0 5 ) ;?

JAK/STAT信号介导高糖诱导系膜细胞转化生长因子β_1及其基质蛋白的分泌

目的观察高糖和AG490对大鼠肾小球系膜细胞Janus激酶/信号转导和转录活化因子(Januskinase/signal transducer and activators of transcription,JAK/STAT)信号激活以及对系膜细胞转化生长因子β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和细胞外基质蛋白表达的影响。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分别给予高糖和AG490干预,采用免疫沉淀和Western印迹检测JAK2磷酸化表达,Western印迹检测信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化-STAT1(phospho-STAT1,p-STAT1)和p-STAT3表达;酶联免疫吸附实验(enzyme-linkedimmunoadsorbent assay,ELISA)和放射免疫法测定细胞上清液中TGF-β1、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)和IV型胶原的分泌,逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription and polymerase chain reaction,RT-PCR)检测TGF-β1mRNA表达。结果与低糖对照组比较,高糖培养的系膜细胞JAK2、p-STAT1和p-STAT3表达明显上调,TGF-β1、FN和IV型胶原分泌增加,TGF-β1mRNA表达增加;AG490能够明显抑制高糖培养系膜细胞JAK2的磷酸化,下调p-STAT1和p-STAT3表达,明显抑制TGF-β1、FN和Ⅳ型胶原的分泌,同时降低TGF-β1mRNA表达。结论JAK/STAT信号途径参与高糖诱导的肾小球系膜细胞TGF-β1和细胞外基质的分泌。