冷酶消化法在分离和培养新生大鼠Schwann细胞的应用

Schwann细胞(SCs)是公认的周围神经组织工程的种子细胞,在周围神经损伤后的再生中扮演着重要的角色。为了快速分离和培养大量的SCs,本研究采用冷酶消化法对Wister乳鼠坐骨神经的细胞进行分离和培养,结果得到的细胞数量超过106,经S-100蛋白免疫组化染色鉴定,SCs的纯度超多了90%。从培养细胞的形态和生长曲线可见,冷酶消化法是一种简单快捷地分离SCs的方法,使用该法得到的SCs具有良好的生物学特性,并在细胞的分离时间、数量、纯度以及生物活性等方面,均达到了实用要求。

肝窦内皮细胞分离、培养与鉴定的研究概况

肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells,LSEC)在肝脏的生理功能和病理机制的发生中扮演重要的角色,成为近年来肝脏研究的热点.本文通过总结并综述近年来LSEC的分离、培养与鉴定的最新技术和方法,重点探讨在该细胞分离、培养与鉴定过程中遇到的研究热点,这对观察和研究LSEC在肝脏生理功能和病理机制中的作用,及基于该细胞的开发研究具有重要的意义,并为研究者提供借鉴.

机械法和胰酶法分离大鼠卵巢颗粒细胞的比较

目的探讨胰酶法分离大鼠卵巢颗粒细胞的优势。方法取3~4周龄雌性SD大鼠的卵巢,分别采用机械法和胰酶法分离颗粒细胞并进行培养。机械法:于40倍解剖显微镜下用针头刺破卵巢成熟的卵泡,将含有卵巢剩余组织及卵泡液的培养液用200目滤网过滤;胰酶法:用无菌眼科剪将卵巢剪成小于2 mm3的小碎块,然后加入0.25%胰酶,室温消化1 h后,将含有卵巢碎块的消化液用200目滤网过滤。比较这2种分离方法获得的细胞数量、细胞活力,及雌二醇和孕酮的分泌情况。结果机械法和胰酶法这2种方法分离的原代大鼠卵巢颗粒细胞存活率均>90%。将细胞培养1~9 d,除24 h外,其余各时间点胰酶法分离的细胞增殖率均高于机械法;胰酶法细胞增殖率峰值出现时间早于机械法24 h,并且胰酶法分离的细胞最大增殖率[72 h:(210.09±0.95)%]高于机械法[96 h:(180.50±0.74)%],差异有统计学意义(P<0.05)。胰酶法分离的细胞激素的最大分泌量、每日平均分泌量及分泌总量均高于机械法,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论胰酶法分离的大鼠卵巢颗粒细胞在细胞活力和激素分泌功能方面均优于机械法,值得在卵巢早衰的研究中推广使用。

骨细胞的功能:生物学研究和机理探讨

骨细胞(osteocyte)是在矿化骨基质内名副其实的骨的细胞(bone cell)。通过细胞突触,骨细胞彼此相连,很可能也与骨髓中某些细胞相接,从而形成三维细胞网络。从骨的超微结构看,骨细胞处于很理想的位置,可以担当骨生理的重要调节因子。然而,由于骨细胞处于矿化骨基质深层,对其功能了解甚少。但随着新技术方法的应用,就有可能对这种成骨细胞系中的终末分化细胞进行深入研究,人们也由此对骨细胞的兴趣大增。骨细胞被认为是骨的机械应力感受器,它有可能参与骨重建。骨细胞能分泌具有调节成骨细胞功能的硬骨素(sclerostin)一种能降低肾脏磷回吸收的激素——调磷因子FGF23也主要源自骨细胞。随着我们对骨细胞了解的深入,清楚显示,骨细胞不仅能影响局部骨转换活性,而且对全身矿物质的体内平衡也有多种功能。因此,对骨细胞的研究,可以为代谢性骨病的治疗探索新的途径。

人脐带血中内皮克隆形成细胞的分离和培养

目的:脐带血来源的内皮克隆形成细胞具有高度增殖、自我更新和血管生成的能力,是再生医学和母胎医学领域研究的热点。本研究旨在提出一种有效的、可靠的人脐带血中内皮克隆形成细胞分离和培养方法。方法:取抗凝脐血,采用密度梯度离心法分离单核细胞并进行贴壁培养,在细胞克隆形成但未融合成片时,进行单克隆的挑取再培养,最后对所得细胞进行表型和功能的鉴定。结果:所获细胞增殖能力强,形态单一,呈鹅卵石样,连续传代8次,未见细胞性状改变。接种到基质胶上,细胞可连接为管状、网状结构。能摄取培养液中的低密度脂蛋白并结合荆豆凝集素,细胞免疫荧光显示其表达典型的内皮细胞标志性分子CD31、e NOS、VE-Cadherin、v WF。结论:通过本研究的方法,我们从脐带血中获得足够数量和高纯度的内皮克隆形成细胞,这为进一步的实验研究提供了可靠的基础。

适用于膜片钳技术方面的研究进展

生物细胞膜片钳技术自八十年代问世以来,已经在电生理领域中得到了很大发展,但由于细胞分离及培养技术的原因至今使此项技术手段未能早日普及开来。本文主要介绍膜片钳技术和组织培养的历史发展以及适用于膜片钳技术的神经细胞、心肌细胞、骨骼肌细胞等分离培养方面的研究进展。