血细胞分离技术及其应用的研究进展

血细胞分离技术在收集成分血,如血小板、血浆以及红细胞等,已获得了良好的效果,它还可以保障临床血液的供给,为患者提供干细胞以及免疫细胞等有效的治疗,经常运用于白血病、中毒性高脂血症、肝肾疾病、自身免疫性疾病以及神经系统疾病等,它在临床上具有良好的效果,可以有效地减轻病人的痛苦,减少病人的住院周期,缓解病人的不适,对疾病的转归有一定的帮助,可以拯救疾病。血细胞分离指的是利用离心的原理,把血液按比例的比例进行分离,它的方法比较精密、科学,可以在临床上使用,有着很高的临床应用价值。这项技术起源于二十世纪初期,大约五十年代才被开发出来,是一项全新的技术,能够在不影响人体血液结构的前提下,从人体内分离出某些特殊的物质,为病人的诊断和用药提供了有价值的参考。本文着重介绍了一种新的血液提取方法。

亲和细胞分离技术研究进展

组织或者生物样品中的细胞都是杂合的，而目的细胞往往只占其中很少的一部分。亲和细胞分离技术是一种快速、有效地从杂合的细胞悬液中分离目的细胞的方法。在医学中利用该方法可以提高治疗的疗效；提高疾病诊断灵敏度，达到早期诊断，早期治疗的目的；可以更准确及时了解患者的疾病状态等等。目前该方法在临床应用、疾病诊断以及基础研究等工作中具有非常重要的意义，越来越受到大家的重视。

急性血细胞分离技术在心血管外科中的应用

目前,绝大部分的心血管外科手术需要在体外循环(cardiopulmonarybypass;CPB)的支持下进行,而体外循环是一较强的非生理过程,对血液成份尤其是细胞成份可产生明显的稀释、激活和破坏作用,从而增加术后出血及异体血液制品的输注量。近年来,一些学者开始在心血管外科围体外循...

荧光激活细胞分离技术在角膜缘干细胞研究中的应用

目的探讨荧光激活细胞分离技术(FACS)在体外培养的兔角膜缘上皮细胞生物学特性研究中的应用。方法收集新西兰白兔的角膜缘组织进行组织块培养。采用FACS分离出体外培养的兔角膜缘上皮细胞中的侧群(SP)细胞和非SP细胞。用2%锥虫蓝染色法对分离出的SP细胞进行克隆形成率(CFE)检测以评估SP细胞的活性,用免疫组织化学染色检测K3/12和ABCG2蛋白在SP细胞和非SP细胞中的表达。结果SP细胞在体外培养的兔角膜缘上皮细胞中占(0.22±0.09)%,分离出的SP细胞的CFE为(5.52±0.45)%,而非SP细胞为(0.78±0.73)%,二者差异有统计学意义(t=2.17,P<0.01);大部分SP细胞呈K3/K12抗原阴性,ABCG2免疫标记呈阳性;而非SP细胞呈K3/K12抗原阳性,ABCG2免疫标记呈阴性。结论FACS可以应用于体外培养的兔角膜缘上皮细胞的SP细胞分离,分离出的SP细胞具有较强的增生能力。

白细胞分离技术的临床应用

白细胞分离（1eukocytapheresis,LCAP）是一种新型血液净化技术,是通过滤过、吸附等方法去除外周血中白细胞（包括中性粒细胞、单核细胞和淋巴细胞）,以减轻致炎细胞及其释放的致病性蛋白酶、氧自由基及细胞因子等物质对机体的免疫攻击,达到治疗疾病、保护器官的目的。目前临床应用于治疗种免疫相关疾病的LCAP罐主要有2种,其一Cellsorba为非选择性滤过型白细胞分离装置,它由亲水性高分子微纤维无纺布制备的滤过柱对白细胞和部分血小板起到去除作用。可通过改变表面介质密度而控制和改变纤维间有效孔径截留白细胞,也可通过改变纤维表面净电荷,使白细胞滤除;

免疫磁化细胞分离技术

利用挪威化学家Vgelstad教授的重要发明而生产的新材料和技术,挪威科学界和工业界密切配合,近年来在生物医学的研究工作中取得了显著的进展,特别在细胞分离技术方面,取得了世界领先的成果。Vgelstad教授的发明,在于采用一套新的工艺和原理。

免疫磁珠技术在分离人外周血树突状细胞中的应用

近年来细胞分离技术的发展十分迅速，分离主要根据各种细胞的不同的物理性状及表面受体或抗原的差异而采取不同的分离技术。免疫磁珠(Immunomag-netic bead, IMB)技术是由20世纪70年代起步，80年代兴起的国内外应用较多的一种新技术。……

极小胚胎样干细胞分离技术的探讨及临床应用前景

极小胚胎样干细胞（very small embryonic-like stem cells， VSEL）是一种非造血干细胞，其形态学和细胞标志与胚胎干细胞有相似之处，具有胚胎干细胞多分化潜能特性，可以向包括心肌和血管内皮细胞在内的三个胚层的细胞分化，且无免疫排异，并能改善急性心肌梗死后的心功能和心脏重构［1-5］。

单细胞分离检验技术在法医学中的应用研究

法医单细胞分离检验技术是微量混合DNA样本检验最有效的方法之一。常规的单细胞分离检验技术包括单细胞分离、单细胞裂解、PCR扩增、数据分析。本文将详细介绍单细胞分离检验技术原理和应用进展,同时展望了单细胞测序在法医DNA的应用前景。近5年来,单细胞分离、全基因组扩增和二代测序技术的结合而产生的单细胞测序技术,将为法医遗传学检测提供一种全新的技术和思路,尤其为微量混合生物样品检验提供全新的技术手段。

原代肝细胞分离培养技术现状及展望

原代肝细胞的分离和培养是建立体外HBV感染的细胞模型和临床应用生物人工肝的关键步骤,许多学者对肝细胞分离和培养技术做了大量探索.本文就近年来建立的各种肝细胞分离技术和培养技术的优缺点进行比较,并对该领域今后的发展前景作了展望.

胃癌循环肿瘤细胞膜滤过分离技术检测及其与临床病理特征关系研究

目的:研究胃癌循环肿瘤细胞(CTC)检出情况与胃癌临床病理特征之间的关系。方法:选取胃癌患者84例作为试验组,选取同期30例健康体检者为对照组,采集外周血后用膜滤过分离肿瘤细胞技术(ISET)检测鉴定CTC[包括循环肿瘤微栓(CTM)],并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果:对照组外周血标本均未检测到CTC或CTM,试验组外周血标本CTC/CTM总阳性率为60.71%。不同病理分期胃癌患者CTC/CTM阳性率比较,差异有统计学意义(P<0.05)。不同病理类型胃癌患者外周血CTC/CTM阳性率比较,差异没有统计学意义(P>0.05)。胃癌患者外周血CTC和CTM检出情况在胃癌瘤块大小、有无淋巴结转移、有无血管侵犯和有无远处转移灶方面比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:循环肿瘤细胞检出率与胃癌临床病理特征密切相关,对胃癌的早期诊断和预后判断有潜在的应用价值。

膜滤过分离肿瘤细胞技术简介

膜滤过分离肿瘤细胞技术(Isolation by size of epithelial tumor cells,ISET)是近年来国内外研究的一种新的细胞分离筛选技术。它能从少量的外周血中筛选出肿瘤细胞,同时为进一步的形态学,细胞学以及分子生物学研究提供条件。循环肿瘤细胞(CTCs)的检测对于临床诊断、监测病情、发现早期存在的肿瘤微转移等具有重要意义。本文对ISET技术在检测循环肿瘤细胞的研究现状及应用前景做一综述。

三种人脐静脉内皮细胞分离方法的比较

目的建立人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分离和培养的方法。方法分别采取“灌注消化法”、“机械刮取法”和“灌注搓揉法”来分离HUVECs。通过苔盼蓝排斥法检测细胞活力并计数,进行免疫荧光法鉴定,比较这3种方法在获取的细胞数目、细胞活力和纯度方面的差异。常规进行细胞的原代培养和传代培养。取第3代培养细胞绘制细胞生长曲线,根据细胞生长特点,形态及表型特征对培养细胞进行鉴定。结果“灌注搓揉法”所分离的细胞无论从细胞数目、细胞活力和纯度方面均优于传统的“灌注消化法”和“机械刮取法”。培养的细胞从形态、生长特点和表型鉴定证实为血管内皮细胞(ECs)。结论“灌注搓揉法”是一种获取血管ECs成功率高,可靠的方法。

提高小鼠原代肝星状细胞获得率及纯度的分离方法

背景:由于小鼠肝脏小、血管较细,其原代肝星状细胞分离的难度相对较大,且得率有限,难以满足体外实验需求。目的:建立小鼠原代肝星状细胞高效稳定的分离方法,提高小鼠原代肝星状细胞的得率与纯度,为研究肝纤维化的机制奠定实验基础。方法:取成年雄性C57BL/6小鼠,以无钙镁离子的前灌流液经门静脉充分灌注肝脏,再先后以1 g/L链霉蛋白酶和0.7 g/LⅣ型胶原酶灌注,使用Nycodenz进行梯度密度离心,获取中间层原代肝星状细胞,锥虫蓝染法观察肝星状细胞活力,流式细胞法检测细胞纯度,免疫荧光法检测Desmin表达,并于倒置显微镜下观察细胞培养3,5,7 d后的形态变化,PCR法检测培养3,5,7 d后α-平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白基因表达情况。结果与结论:(1)每只小鼠肝脏可获得肝星状细胞(5.5±0.4)×10~6个,锥虫蓝检测细胞活力均大于95%,流式细胞法检测细胞纯度为94%,免疫荧光检测细胞高表达Desmin;(2)随着体外培养时间的延长,可见原代肝星状细胞逐渐由圆形向星型发展;(3)随培养天数增长,α-平滑肌肌动蛋白及Ⅰ型胶原蛋白表达逐渐升高;(4)结果提示,实验成功建立了高效分离小鼠肝星状细胞的方法,可为获得高纯度、高细胞活力的小鼠原代肝星状细胞提供技术方案,也为肝纤维化的机制研究提供技术保障。

大鼠肝星状细胞简便分离法及鉴定

目的：介绍一种简便、经济、稳定的大鼠肝星状细胞（hepatic stellate cell，HSC）分离方法，为肝纤维化的研究提供细胞模型。方法：取符合标准的雄性SD大鼠，体重约400-450g，行肝脏门静脉插管，灌洗肝脏后，先后采用链酶蛋白酶、Ⅳ型胶原酶、DNA酶I灌注，消化肝脏制成细胞悬液，20％Nycodenz密度梯度离心分离得到原代HSC。Desmin及α—SMA抗体免疫组化鉴定纯度。结果：HSC得率2×10^7／每肝，细胞存活率及纯度达95％以上。结论：该法简便、经济，细胞得率和纯度稳定，是一种实用的大鼠HSC分离方法。

单细胞全基因组扩增技术与应用

同一组织中的细胞往往具有类似的结构和功能,然而通过对单个细胞进行测序分析后,发现每个细胞都具有一定异质性.单细胞全基因组扩增技术是进行单细胞测序的前提,该技术可用于揭示单细胞基因组结构差异,同时在肿瘤研究、发育生物学、微生物学等研究中发挥重要作用,并成为生命科学研究技术的热点之一.单细胞全基因组扩增技术的难点在于单细胞的分离和全基因组的扩增.本文介绍了单细胞全基因组扩增技术中常用的单细胞分离技术和单细胞全基因组扩增技术,并对各技术间的优缺点进行比较,同时着重讨论该技术在肿瘤研究、发育生物学和微生物学研究中的应用.

单细胞转录组测序技术及其在植物研究中的应用

为探究单细胞转录组测序技术(scRNA-seq)在植物研究中的应用,本综述对单细胞转录组测序技术的发展状况进行了总结,介绍了其在胚胎发育、免疫细胞、肿瘤领域以及植物研究的运用。其次,就单细胞转录组测序技术中的要点技术(单细胞分离技术、单细胞全转录组cDNA扩增技术、高通量测序技术)进行了总结分析。最后,本文根据植物细胞的特点归纳出植物所适用的单细胞转录组测序技术,以期为该技术在植物研究中更好的利用提供理论依据。

单细胞测序技术在结核病研究中的应用

单细胞测序(single cell sequencing,SCS)是指从单个细胞提取DNA或RNA样品进行DNA或RNA的测序。与传统测序相比,单细胞测序可以在细胞层面揭示遗传信息异质性及突变特征,因而具有广阔的应用前景。目前,随着对单细胞测序的关注和深入应用,包括单细胞分离技术、基因组或转录组扩增建库技术、信息完整性保存以及数据解读技术等一些技术的瓶颈也日趋凸显,而且实验成本也是一个需要解决的重要问题。因为单个细胞的DNA或RNA的量远低于现有测序仪的最低上样需求,因此必须先对单细胞内的微量核酸分子进行扩增,而且要保证扩增过程的可靠,以便开展后续的测序及进一步研究。

小鼠脑血管内皮细胞的分离和培养

目的 探讨鼠脑微血管内皮细胞的体外培养方法并进行形态学和功能学的研究。方法 取新生小鼠脑组织 ,采用胶原酶消化、差速离心、滤过分离等技术 ,进行原代培养 ;待细胞贴满瓶底时 ,进行传代培养。取原代和传代细胞各 6孔 ,吸取培养上清液 ,用放免法和化学法测定ET和NO的含量。结果 经ⅧF :Ag免疫组化和细胞形态鉴定 ,证明培养的是血管内皮细胞 ,并且培养的脑微血管内皮细胞能合成和分泌ET和NO。结论 采用胶原酶消化、差速离心、滤过分离等技术是获取内皮细胞的可靠方法 。