细胞分离纯化技术研究进展

对细胞进行分离纯化的目的是为了获得较高纯度和活力的细胞以便用于实验研究或临床移植。分离纯化细胞的方法很多，通过对细胞表面标记可以用吸附、荧光活化细胞拣选、磁活化细胞分选等技术分离细胞；也可应用无表面标记的方法，如离心、离心淘洗、自由流细胞电泳等技术来纯化细胞。本文就目前这些分离纯化细胞的方法作一介绍。

Ficoll及Percoll分离、纯化金黄地鼠肝细胞方法比较研究

目的建立经济有效的原代地鼠肝细胞分离纯化方法,并比较Ficoll及Percoll两种分离液分离出的肝细胞纯度及活性的差异。方法对传统的两步原位胶原酶灌流法进行简化,行肝脏原位灌流,离体后Ⅳ胶原酶进行消化;采用Ficoll及Percoll两种细胞分离液进行分离、纯化;纯化后于37℃5%CO2培养箱内孵育培养,0.4%台盼蓝拒染实验检测肝细胞的存活率。结果 Ficoll及Per-coll分离的地鼠肝细胞总数分别为(1.46±0.91)cells.g-1肝组织、(1.79±0.89)cells.g-1肝组织,即时分离的肝细胞活力和纯度相近,都大于95%,但后期二者差异较大,Percoll分离得的肝细胞活率较高,且细胞活性下降较缓慢。结论通过简化的门静脉原位灌流法和低浓度胶原酶离体消化,Per-coll或Ficoll分离液纯化,即时分离的肝细胞可保持良好的功能和活力,二者无显著差别,但从细胞培养的要求出发,Percoll优于Ficoll分离液。

成体小鼠骨髓间充质干细胞的培养和纯化

目的建立一种简单易行的小鼠骨髓间充质干细胞(MSC)的分离培养方法,并对其表面标志进行鉴定,为其应用提供实验依据.方法采用差速贴壁法体外分离、扩增MSC,倒置显微镜观察其生长过程,HE染色观察原代培养细胞的生长特性,免疫细胞化学检测MSC表面抗体的表达及细胞的大概纯度.结果用此法进行小鼠骨髓间充质干细胞的培养过程中,血液系细胞在换液过程中被去除,成纤维细胞污染可经差速贴壁法去除.经鉴定获得的骨髓间充质细胞能达到理想的纯度,生长状态良好.结论采用差速贴壁培养法可获得一定纯度的MSC,这种方法简单、便捷、实用,并且用这种方法所分离获得的细胞生长状态好,在体外条件下能大量增殖,原代及传代生长都可形成均一的细胞集落.

大鼠胰岛β细胞分离与原代培养方法探讨

目的探索胰岛β细胞分离纯化方法和适宜的原代培养条件。方法正常Wistar大鼠,胶原酶消化及网筛过滤初步纯化胰岛,双硫腙染色及葡萄糖刺激实验鉴定胰岛及其活性。胰岛以胰蛋白酶和DNA酶消化成单细胞悬液,在2.8mmol/L葡萄糖条件下,用荧光激活流式细胞分选(FACS)β细胞。免疫组化法及葡萄糖刺激实验鉴定分选的β细胞及其活性,所分选β细胞置于不同浓度葡萄糖和3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)50μmol/L浓度的Ham′sF-10培养基中培养24h,观察不同浓度葡萄糖及IBMX对β细胞活性的影响。结果可获(550±95)个胰岛/只大鼠,活性良好。FACS后,可得约5688个β细胞/只大鼠,回收率(93.69±1.26)%,纯度(85.5±1.24)%。原代培养24h后,10.0mmol/L及16.0mmol/L葡萄糖中β细胞活性较高,死亡和凋亡也较少。结论胰岛的单细胞悬液,在外界葡萄糖浓度为2.8mmol/L时可以FACS对β细胞进行分选纯化;原代培养24h后,在外界葡萄糖浓度10.0～16.0mmol/L时,β细胞有较高存活率和活性。

肝细胞移植技术新进展

与传统的原位肝移植相比,肝细胞移植具有简单易行、应用灵活等优点,因而引起了临床上的广泛关注。现已证明,肝细胞移植对生物(病毒)、化学(肝毒性药物)、物理(外伤)等各种原因引起的急性肝功能衰竭起着代偿和支持作用;又可以纠正由于肝代谢酶缺陷引起的遗传性代谢疾病。微载体技术的应用和肝细胞体外转化的成功,使肝细胞作为基因治疗的受体细胞成为可能。随着介入放射学的发展,可运用经导管技术进行肝细胞移植术,对介入放射学而言,这是一极富吸引力和挑战性的新领域.

胰岛β细胞的分离纯化与原代培养技术

胰岛β细胞是糖尿病研究的中心环节之一。目前体外研究胰岛β细胞的模型系统有两类，一是从胰岛β细胞瘤组织克隆产生的β细胞株，二是从活体胰岛组织分离纯化获取胰岛β细胞。国内利用细胞株作为研究模型者较多，而β细胞的体外原代培养尚未见研究报道。

脂肪干细胞上清液培养雪旺细胞的实验研究

目的:研究应用脂肪干细胞上清液培养新生小鼠雪旺细胞的可行性。方法:取新生(出生5-7天)C57BL/6小鼠的坐骨神经,采用0.2%的复合胶原酶NB4消化法分离获取细胞,然后应用雪旺细胞条件培养基(SCCM)和C57BL/6小鼠的脂肪干细胞上清液(ADSC-CM)分别培养雪旺细胞。用0.2%复合胶原酶NB4差速分离纯化这两种方法培养的雪旺细胞,每48 h纯化1次,共进行2次纯化。应用P75免疫荧光染色方法鉴别两组P2代雪旺细胞并比较两组雪旺细胞的纯度和生长情况。结果:脂肪干细胞上清液培养的雪旺细胞纯化两次后,数量明显增多,其纯度与雪旺细胞条件培养基相比没有明显差异(P>0.05)。结论:脂肪干细胞上清液可以较好的培养雪旺细胞,可以作为一种新的廉价方便的培养基代替雪旺细胞条件培养基来培养许雪旺细胞。