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大鼠正常肝和再生肝的肝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:7
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作者 王文博 谢来峰 +2 位作者 王望 王磊 徐存拴 《河南科学》 2008年第12期1492-1498,共7页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll密度梯度离心分离肝细胞,用免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝细胞中白蛋白(... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll密度梯度离心分离肝细胞,用免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝细胞中白蛋白(albumin,ALB)和葡萄糖-6-磷酸酶(glucose-6-phosphatase,G-6-P),用蛋白免疫印迹方法定量肝细胞的ALB和G-6-P,用RT-PCR定量肝细胞的ALB和G-6-P mRNA.初步证实纯化的细胞中,ALB和G-6-P阳性细胞占96%以上;PH后各时间点纯化的肝细胞的ALB和G-6-P mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进后的分离肝细胞方法具有收率高、纯度高、活性好等特点. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离鉴定 细胞 基因表达 标记蛋白
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鼠肝Kupffer细胞的分离、培养和鉴定 被引量:1
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作者 陆伦根 曾民德 +3 位作者 范建高 李继强 华静 范竹萍 《胃肠病学》 1998年第2期90-92,共3页
目的:Kupffer细胞是固定于肝脏的吞噬细胞,Kupffer细胞的分离、培养对肝脏疾病发生机制中的有关细胞和分子生物学的研究具有重要意义。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠Ku-pffer细胞,再经贴壁培养,并应... 目的:Kupffer细胞是固定于肝脏的吞噬细胞,Kupffer细胞的分离、培养对肝脏疾病发生机制中的有关细胞和分子生物学的研究具有重要意义。方法:用链霉蛋白酶和胶原酶原位灌流,Nycodenz密度梯度离心分离大鼠Ku-pffer细胞,再经贴壁培养,并应用免疫组织化学、吞噬功能试验、电镜等方法进行鉴定。结果:本法能成功地获得高纯度的Kapffer细胞,Kapffer细胞得率为3~5×10~6/肝,贴壁后呈典型的星形及多角形,免疫组化染色示溶菌酶阳性、胞浆内见吞噬的印度墨汁及乳胶珠颗粒,电镜观察细胞表面有发达的伪足、微绒毛,胞浆内含大量溶酶体及吞噬的乳胶珠颗粒。结论:本实验所用的Kupffer细胞分离培养方法简单易行、可靠、细胞纯度高,可用于进一步研究Ku-pffer细胞的生物学功能。 展开更多
关键词 KUPFFER细胞 细胞分离、培养和鉴定 大鼠
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新生大鼠心脏微血管内皮细胞的分离培养及鉴定 被引量:6
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作者 周燕琼 郭福晓 +4 位作者 贾强用 张艳美 郑燕珊 李乐娜 石刚刚 《汕头大学医学院学报》 2008年第3期135-136,139,F0002,共4页
目的:介绍一种改良的心脏微血管内皮细胞(CMECs)的分离培养及鉴定方法。方法:应用酶消化法分离大鼠CMECs,再用差速贴壁进行纯化。结果:用光学显微境、免疫细胞化学法进行第Ⅷ因子相关抗原染色来鉴定CMECs,其纯度约98%。结论:该法简单且... 目的:介绍一种改良的心脏微血管内皮细胞(CMECs)的分离培养及鉴定方法。方法:应用酶消化法分离大鼠CMECs,再用差速贴壁进行纯化。结果:用光学显微境、免疫细胞化学法进行第Ⅷ因子相关抗原染色来鉴定CMECs,其纯度约98%。结论:该法简单且经济。 展开更多
关键词 新生大鼠 心脏微血管内皮细胞 分离 培养 鉴定
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大鼠肝星形细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:3
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作者 张永晶 谢来峰 +2 位作者 王磊 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第6期670-674,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞,用结蛋白(desmin,DES)和波形蛋白(vimentin,VIM)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regen... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心和免疫磁珠相结合分离肝星形细胞,用结蛋白(desmin,DES)和波形蛋白(vimentin,VIM)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝星形细胞,用RT-PCR定量肝星形细胞的DES和VIM mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝星形细胞DES和VIM.初步证实,分离的肝星形细胞中DES和VIM阳性细胞占95%以上,从PH后各时间点分离的肝星形细胞的DES和VIM mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝星形细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离鉴定 肝星形细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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大鼠肝库普弗细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:2
5
作者 丁博 王磊 +2 位作者 谢来峰 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第11期1377-1381,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(partial hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离库普弗细胞(Kupffer cell,KC),用外胚层发育不良抗原2(ectodermal dysplasia antigen2,ED2)和溶菌... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(partial hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离库普弗细胞(Kupffer cell,KC),用外胚层发育不良抗原2(ectodermal dysplasia antigen2,ED2)和溶菌酶(lysozyme,LYZ)的免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的库普弗细胞,用RT-PCR定量库普弗细胞的ED2和LYZmRNA,用蛋白免疫印迹方法定量库普弗细胞的ED2和LYZ蛋白.初步证实,分离的肝库普弗细胞中ED2和LYZ阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的库普弗细胞ED2和LYZmRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离库普弗细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离鉴定 库普弗细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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大鼠胆管上皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:2
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作者 李永霞 王磊 +2 位作者 谢来峰 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第7期804-808,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,在32%~90%Perco11密度梯度离心法的基础上进一步用免疫磁珠分离胆管上皮细胞(biliary epithelial cell,BEC),用γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl ... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,在32%~90%Perco11密度梯度离心法的基础上进一步用免疫磁珠分离胆管上皮细胞(biliary epithelial cell,BEC),用γ-谷氨酰转肽酶(γ-glutamyl transferase,GGT)和角蛋白19(cyto-keratin19,CK19)免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的胆管上皮细胞,用RT-PCR定量胆管上皮细胞的GGT和CK18mRNA,用蛋白免疫印迹定量胆管上皮细胞的GGT、角蛋白18(cytokeratin 18,CK18).初步证实分离的细胞中GGT和CK19阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的胆管上皮细胞的GGT和CK18mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离胆管上皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,方便适用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离鉴定 胆管上皮细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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大鼠肝窦内皮细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:2
7
作者 王泽 王磊 +2 位作者 谢来峰 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第8期930-934,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60% Percoll梯度离心和免疫磁珠分离肝窦内皮细胞(hepatic sinusoidal endothelial cell,SEC),用分化抗原簇14(cluster of differentiation ... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60% Percoll梯度离心和免疫磁珠分离肝窦内皮细胞(hepatic sinusoidal endothelial cell,SEC),用分化抗原簇14(cluster of differentiation 14,CD14)和内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的免疫组织化学定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的窦内皮细胞,用RT-PCR定量窦内皮细胞的CD14和ET-1的mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量窦内皮细胞的CD14和ET-1蛋白.初步证实,分离的窦内皮细胞中CD14和ET-1阳性细胞占95%以上,从PH后各时间点分离的窦内皮细胞的CD14和ET-1mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离窦内皮细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离鉴定 窦内皮细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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大鼠肝陷窝细胞分离、鉴定及纯度、活性分析 被引量:1
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作者 和春肖 谢来峰 +2 位作者 王磊 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第9期1072-1076,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60% Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离陷窝细胞(pit cell),用分化抗原簇8(cluster of differentiation8,CD8)和分化抗原簇56(cluster of... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60% Percoll梯度离心结合免疫磁珠方法分离陷窝细胞(pit cell),用分化抗原簇8(cluster of differentiation8,CD8)和分化抗原簇56(cluster of differentiation 56,CD56)的免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的肝陷窝细胞,用RT-PCR定量肝陷窝细胞的CD8和CD56 mRNA,用蛋白免疫印迹定量肝陷窝细胞的CD8和CD56蛋白.初步证实,分离的肝陷窝细胞中,CD8和CD56阳性细胞占95%以上;PH后各时间点分离的陷窝细胞的CD8和CD56的mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离陷窝细胞方法具有收率和纯度高、活性好等特点,值得采用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离鉴定 陷窝细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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大鼠肝卵圆细胞的分离、鉴定及纯度、活性分析
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作者 陆琼 谢来峰 +2 位作者 王磊 樊晋宇 徐存拴 《河南科学》 2009年第10期1219-1223,共5页
按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心给合免疫磁珠分离方法卵圆细胞(oval cell,OC).用卵圆细胞标志蛋白OC2和OV6的免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regener... 按Higgins等方法制作大鼠2/3肝切除(parital hepatectomy,PH)模型,用两步灌流法分散肝脏细胞,用60%Percoll梯度离心给合免疫磁珠分离方法卵圆细胞(oval cell,OC).用卵圆细胞标志蛋白OC2和OV6的免疫组织化学方法定性、定位再生肝(regenerating liver,RL)、分散的肝脏细胞及分离的卵圆细胞,用RT-PCR定量卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA,用蛋白免疫印迹方法定量卵圆细胞的OC2和OV6蛋白.初步证实分离的肝卵圆细胞中,OC2和OV6阳性细胞占96%以上,从PH后各时间点分离的肝卵圆细胞的OC2和OV6 mRNA量稳定,相应的蛋白量亦稳定.表明改进的分离肝卵圆细胞方法具有收率和纯度高、活性好等优点,值得采用. 展开更多
关键词 大鼠 细胞分离鉴定 肝卵圆细胞 免疫磁珠 标记蛋白
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肝星形细胞的研究进展 被引量:1
10
作者 张永晶 徐存拴 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期323-325,共3页
肝星形细胞(HSCs)是肝脏中具有储存脂质特别是维生素A、合成细胞外基质、调节肝窦微循环等功能的非肝实质细胞,它们与多种肝脏疾病,特别是肝纤维化密切相关。我们简要总结了近几年有关肝星形细胞的分离、鉴定、增殖及增殖调控、在肝再... 肝星形细胞(HSCs)是肝脏中具有储存脂质特别是维生素A、合成细胞外基质、调节肝窦微循环等功能的非肝实质细胞,它们与多种肝脏疾病,特别是肝纤维化密切相关。我们简要总结了近几年有关肝星形细胞的分离、鉴定、增殖及增殖调控、在肝再生、肝病等中作用的研究进展。 展开更多
关键词 肝星形细胞 肝再生 肝纤维化 细胞分离鉴定
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免核酸提取Real-time PCR技术在细胞分离病毒快速鉴定中的应用 被引量:1
11
作者 吴衍恒 师舞阳 +1 位作者 谢颖 林金思 《中国热带医学》 CAS 2017年第1期98-100,共3页
目的探讨应用免核酸提取Real-time PCR技术直接对细胞培养液进行检测鉴定,判断成功分离病毒的可行性。方法应用C6/36细胞和MDCK细胞分别对登革病毒和甲型H3亚型流感病毒进行病毒分离培养,应用Real-timePCR技术分别对经提取的核酸溶液和... 目的探讨应用免核酸提取Real-time PCR技术直接对细胞培养液进行检测鉴定,判断成功分离病毒的可行性。方法应用C6/36细胞和MDCK细胞分别对登革病毒和甲型H3亚型流感病毒进行病毒分离培养,应用Real-timePCR技术分别对经提取的核酸溶液和细胞培养液进行目标病原体检测,判断是否成功分离病毒。结果登革病毒和甲型H3亚型流感病毒细胞培养液经核酸提取后进行Real-time PCR检测,检测结果CT值范围分别为12.0~14.6和8.5~9.8,病毒培养液直接检测结果范围分别为18.5~21.2和10.1~12.8,定性结果完全一致。结论免核酸提取Real-timePCR技术可直接对细胞培养液进行病毒核酸检测,判断是否成功分离病毒。 展开更多
关键词 病毒 REAL-TIME PCR 细胞分离鉴定
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能力验证试验单核细胞增生李斯特氏菌分离与鉴定 被引量:1
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作者 刘楚云 袁月明 黄锐敏 《河南预防医学杂志》 2012年第5期412-414,共3页
目的能力验证是对实验室检测能力和管理状况进行客观检验的有效方法[1],能力验证活动对完善和强化实验室质量管理体系,增强和提高实验室的竞争力具有重要的意义[2]。方法 GB4789.30-2010食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验。结... 目的能力验证是对实验室检测能力和管理状况进行客观检验的有效方法[1],能力验证活动对完善和强化实验室质量管理体系,增强和提高实验室的竞争力具有重要的意义[2]。方法 GB4789.30-2010食品微生物学检验单核细胞增生李斯特氏菌检验。结果 mini VIDAS检测、荧光PCR检测结果阳性,API、溶血试验等鉴定为单核细胞增生李斯特氏菌。结论CNAS对该实验室检测样品能力验证试验结果结论为满意。 展开更多
关键词 实验室 能力验证 单核细胞增生李斯特氏菌分离鉴定
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体外血脑屏障模型的构建及致脑膜炎粪肠球菌对其的影响 被引量:4
13
作者 李益涛 曹梦园 +1 位作者 陈明杰 齐亚银 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第7期2549-2558,共10页
试验旨在探索致脑膜炎粪肠球菌对体外血脑屏障功能的影响,寻求稳定的构建体外血脑屏障损伤模型的方法。选用1周龄ICR小鼠进行原代脑微血管内皮细胞(BMEC)分离并通过BMEC特有的凝血因子Ⅷ(coagulation factorⅧ,FactorⅧ)进行荧光标记,... 试验旨在探索致脑膜炎粪肠球菌对体外血脑屏障功能的影响,寻求稳定的构建体外血脑屏障损伤模型的方法。选用1周龄ICR小鼠进行原代脑微血管内皮细胞(BMEC)分离并通过BMEC特有的凝血因子Ⅷ(coagulation factorⅧ,FactorⅧ)进行荧光标记,鉴定分离的细胞并判定分离率。选用1~3日龄ICR小鼠分离星形胶质细胞并通过其特有的胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)对进行荧光标记,鉴定分离的细胞并判定分离率。将原代细胞传至3代,用Transwell二维小孔分别构建单层BMEC和BMEC与星形胶质细胞共培养的血脑屏障模型。选用致脑膜炎粪肠球菌、非致脑膜炎粪肠球菌和大肠杆菌DH5α感受态细胞分别与构建的体外血脑屏障模型共培养,评估致脑膜炎粪肠球菌对体外血脑屏障模型的穿透性。通过4 h渗透试验、荧光素钠通透性试验和血脑屏障损伤相关标志基因基质金属蛋白酶2(MMP-2)表达量的检测,评估致脑膜炎粪肠球菌对体外血脑屏障模型的影响。结果显示,试验成功分离到BMEC和星形胶质细胞,纯度分别达90%和95%以上。细菌穿透试验结果显示,所选的3株细菌只有致脑膜炎粪肠球菌可穿越体外血脑屏障模型。4 h渗透试验和荧光素钠通透性试验结果显示,共培养模型优于单层BMEC模型。与其他组相比,构建的体外血脑屏障与致脑膜炎粪肠球菌共培养组荧光素钠的穿透力更高,MMP-2基因的表达量明显上升。综上,BMEC与星形胶质细胞共培养的模型优于单层BMEC模型,致脑膜炎粪肠球菌可穿越体外血脑屏障模型,并介导体外血脑屏障损伤,本试验结果为揭示致脑膜炎粪肠球菌对体外血脑屏障损伤机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 粪肠球菌 细胞分离鉴定 体外血脑屏障 损伤模型
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长沙走马楼东吴竹简蚀斑微生物的研究(英文) 被引量:4
14
作者 曾维政 陈锐 +10 位作者 宋少华 方北松 谈静泉 唐雅丽 罗雪松 汪杨 张珞珍 辛晓红 汪力工 金平 方呈祥 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2007年第5期50-56,共7页
竹简为我国古代早期文字记录的一种重要载体。湖南长沙竹简博物馆珍藏了一大批走马楼出土的三国时期东吴竹简,具有极为重要的史料价值。以吴简为材料,从竹简中分离微生物,获得10株细菌纯培养,并对这些分离菌株进行多相分类学鉴定。根据... 竹简为我国古代早期文字记录的一种重要载体。湖南长沙竹简博物馆珍藏了一大批走马楼出土的三国时期东吴竹简,具有极为重要的史料价值。以吴简为材料,从竹简中分离微生物,获得10株细菌纯培养,并对这些分离菌株进行多相分类学鉴定。根据其培养特征、生理生化特性、细胞脂肪酸组份的测定以及部份菌株16S rRNA基因序列分析,将10个菌株划归为4个属。这些菌株可作为进一步探讨竹制品文物的微生物腐蚀提供有价值的材料。 展开更多
关键词 走马楼东吴竹简分离鉴定细胞脂肪酸组份16S RRNA
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Culture and Identification of Myoblasts Isolated from Duck Embryos 被引量:2
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作者 Yanju SHAN Jingting SHU +3 位作者 Chi SONG Yan HU Jian CHEN Huifang LI 《Agricultural Science & Technology》 CAS 2014年第8期1281-1284,共4页
Using embryonic myoblasts to research the formation and de-velopmental mechanisms of skeletal muscle is becoming a research hotspot. This study aimed to establish a method of isolation, culture and identification of m... Using embryonic myoblasts to research the formation and de-velopmental mechanisms of skeletal muscle is becoming a research hotspot. This study aimed to establish a method of isolation, culture and identification of my-oblasts in duck embryos. [Method] Pectoral and leg muscle samples were isolated from the embryos of Gaoyou duck at 13 d of hatching, then disassociated with col-lagenase and trypsin and purified via differential adhesion. The isolated cells were cultured in vitro and detected for the expression of Pax7 protein using immunofluo-rescence technique. [Result] Myoblasts were obtained successful y both from pectoral and leg muscles in duck embryos and these cells proliferated strongly and differen-tiated wel . Immunofluorescence staining showed that more than 95% cells could express Pax7 protein. [Conclusion] In summary, we report the successful establish-ment of a complete system for the isolation, purification, identification and culture of myoblasts from duck embryos. 展开更多
关键词 MYOBLASTS DUCK EMBRYONIC IDENTIFICATION CULTURE
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Isolation and characterization of Zika virus imported to China using C6/36 mosquito cells 被引量:12
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作者 Chenglin Deng Siqing Liu +7 位作者 Qiuyan Zhang Mingyue Xu Honglei Zhang Dayong Gu Lei Shi Jian'an He Gengfu Xiao Bo Zhang 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2016年第2期176-179,共4页
Dear Editor,Zika virus(ZIKV)is a mosquito-borne flavivirus that usually causes asymptomatic infections or mild illness in humans.However,the unprecedented epidemics of ZIKV in Latin America since early 2015 have mad... Dear Editor,Zika virus(ZIKV)is a mosquito-borne flavivirus that usually causes asymptomatic infections or mild illness in humans.However,the unprecedented epidemics of ZIKV in Latin America since early 2015 have made this flavivirus an international health risk(Liu and Zhang,2016). 展开更多
关键词 imported unprecedented Jiangxi Figure Guangdong illness passage registered isolation borne
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