新型细胞分裂周期25磷酸酯酶B和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂三唑并噻二唑-均三嗪的合成

以苯亚氨基为桥,设计合成了18个含有三唑并噻二唑和均三嗪双杂环的新型分子(4a^4i和5a^5i),并利用红外光谱、核磁共振谱和高分辨质谱等技术手段对其进行了结构表征。将吗啉和四氢吡咯分别与三聚氯氰发生双取代反应合成三嗪衍生物(1A和1B),然后将1A和1B分别与对氨基苯甲酸反应,合成重要中间体(2A和2B)。通过熔融法将8种脂肪酸与二氨基硫脲缩合得1,2,4-三唑衍生物3a^3h,最后将2A和2B在三氯氧磷和四丁基溴化铵催化下分别与3a^3h反应得目标产物。为了进一步比较3-脂肪基和3-苯基对药效活性的影响,利用相同方法设计合成了目标产物4i和5i。评价了目标产物对细胞分裂周期25磷酸酯酶B(Cdc25B)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性。结果发现:所有目标分子对Cdc25B均表现出良好的抑制活性,半抑制浓度(IC_(50)值)在2.40~0.31 mg/L之间,目标分子4a^4f和5a^5i的IC_(50)值均低于阳性参照物Na_3VO_4[(1.25±0.14)mg/L],有望成为潜在的Cdc25B抑制剂;在PTP1B测试中,14个目标分子具有优良的抑制活性,IC_(50)值在0.98~0.37 mg/L之间,低于阳性参照物齐墩果酸[(1.19±0.27)mg/L],有望成为潜在的PTP1B抑制剂。

3,6-二取代三唑并噻二唑衍生物的合成及其对细胞分裂周期25B磷酸酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性评价

合成出了一系列含苯并咪唑/芳氧甲基骨架的3,6-二取代三唑并噻二唑衍生物3a^3l,其结构经傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)、核磁共振波谱仪(NMR)和元素分析得以确认。评价了它们对细胞分裂周期25B磷酸酶(Cdc25B)/蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)的抑制活性,讨论了构效关系。生物活性测试结果显示,化合物3a对Cdc25B和PTP1B的抑制活性最高,其半数抑制浓度(IC 50)值分别为(0.46±0.02)μg/mL和(1.77±0.40)μg/mL。所得研究结果为开发新型Cdc25B/PTP1B抑制剂提供了参考依据。

细胞分裂周期25磷酸酯酶B抑制剂双1,2,4-三唑多杂环分子的设计合成

以1,2,4-三唑为核心结构的杂环分子,因其优良而广泛的生物活性,已成为药物筛选中重要的研究对象。本文为了研究其构效关系,针对1,2,4-三唑结构中3个位点分别进行不同的结构修饰,并将其与哌嗪和均三嗪分别偶联,首次合成了两类共28个双三唑多杂环目标分子[TM1~TM3(a^f)]和[TM4~TM5(a^e)]。为了比较三唑中4-氨基对生物活性的影响,还与化合物6-吗啉-2,4-(5-硫醚基-4-氨基-3-正戊基1,2,4-三唑)-1,3,5-三嗪(C)和6-吡咯-2,4-(5-巯基-4-氨基-3-正戊基-1,2,4-三唑)-1,3,5-三嗪(D)进行了比较。通过傅里叶变换红外光谱仪(IR)、核磁共振谱(~1H NMR)和高分辨率质谱仪(HRMS)等技术手段对28个目标分子进行了结构表征,研究了其对细胞分裂周期25磷酸酯酶B(Cdc25B)的抑制活性。结果表明,21个目标分子表现出优良的抑制活性,9个目标分子的抑制活性优于阳性参照物,有望成为抗肿瘤药物先导物。

细胞分裂周期因子25-A与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药的相关性研究

目的探讨细胞分裂周期因子25-A(CDC25A)与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药的相关性。方法选取2016年7月至2020年11月本院收治的100例胃癌患者作为观察组,进行奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶方案化疗,根据化疗后疗效评估标准,分为敏感组(n=53,完全缓解+部分缓解)和耐药组(n=47,稳定+进展),另选取同期于本院行胃镜检查的100例胃炎患者作为对照组,通过免疫组化比较CDC25A在胃癌组织、胃炎组织中的表达情况,并结合临床及病理资料统计分析其表达水平与肿瘤分级、淋巴结转移、TNM分期的相关性,比较CDC25A在敏感组和耐药组中的表达情况,分析CDC25A与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药的相关性。结果观察组CDC25A的阳性率高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。CDC25A在胃癌中的表达水平与分化程度、淋巴结转移、TNM分期有关(P<0.05),与性别、年龄、解剖位置无关。100例胃癌患者中有47例对奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药,耐药率为47.00%。敏感组CDC25A阳性率低于耐药组,差异有统计学意义(P<0.05)。Spearman相关性分析显示,CDC25A表达水平与胃癌化疗药物奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶耐药呈正相关(r=0.582,P<0.05)。结论CDC25A的表达水平与分化程度、淋巴结转移、TNM分期等相关,且CDC25A表达较低者接受奥沙利铂联合5-氟尿嘧啶化疗后,耐药性更低。

宫颈鳞癌组织中miR-590-3P、FoxM1及Cdc25B细胞核内蛋白水平与高危型HPV感染的相关性研究

目的:研究宫颈鳞癌组织中微小RNA-590-3P(miR-590-3P)、叉头盆蛋白质M1(FoxM1)及细胞分裂周期因子25B(Cdc25B)细胞核内蛋白水平与高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法:将2014年2月—2019年12月医院通过宫颈活检、锥切以及子宫切除获取的宫颈组织标本300份纳入研究。将其分为正常组织59例,宫颈上皮内瘤变(CIN)1组织62例,CIN2/3组织101例,宫颈鳞癌组织78例。采用实时荧光定量PCR检测不同组织中的miR-590-3P表达水平,以免疫组织化学法检测FoxM1、Cdc25B蛋白表达情况,并进行23种基因型HPV DNA的检测。比较不同宫颈组织中的miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白表达情况,高危型HPV感染情况,并以Spearman相关性分析明确宫颈鳞癌组织中的miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白表达情况与高危型HPV感染的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线明确miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白诊断CIN2+的效能。结果:CIN2/3组织以及宫颈鳞癌组织中的miR-590-3P表达水平均高于正常组织、CIN1组织,且CIN1组织中的miR-590-3P表达水平均高于正常组织(F=46.873,P=0.000);CIN2/3组织以及宫颈鳞癌组织中的FoxM1蛋白阳性率及Cdc25B蛋白阳性率均高于正常组织及CIN1组织,且CIN1组织中的FoxM1、Cdc25B蛋白阳性率均高于正常组织(χ^(2)=47.293、51.041,P=0.000、0.000)。CIN2/3组织以及宫颈鳞癌组织中的高危型HPV感染率明显高于正常组织、CIN1组织,且CIN1组织中的高危型HPV感染率明显高于正常组织(χ^(2)=67.293,P=0.000)。经Spearman相关性分析可得:宫颈鳞癌组织中miR-590-3、FoxM1、Cdc25B蛋白表达率均和高危型HPV感染呈正相关。经ROC曲线分析发现:miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白联合检测诊断CIN2+的曲线下面积、灵敏度、特异度分别为0.884、0.90、0.88,均高于上述三项指标单独检测。结论:宫颈鳞癌组织中miR-590-3P、FoxM1及Cdc25B细胞核内蛋白水平与高危型HPV感染密切相关,有望成为早期诊断CIN2+的潜在生物学指标,值得临床重点关注。

白血病抑制因子受体gp190细胞内区与HL-60细胞内Cdc25B激活的关系

目的 :观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基完整的细胞内区和 gp190胞内区 C末端片段在人白血病细胞系HL - 6 0中与细胞周期调控因子 Cdc2 5 B表达和激活的关系 ,进一步了解 L IF引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。 方法 :用基因重组技术将 gp130的细胞内区换成 gp190的细胞内区 ,用 PCR技术扩增合成 gp190细胞内区 C末端的一个多肽 ,构成嵌合体受体基因 130 /190及 190 CT片段 ,并分别在 HL - 6 0细胞表达。用免疫组化和 Western印迹方法 ,分析在 L IF的诱导下 ,细胞生长和形态与 Cdc2 5 B表达的关系。 结果 :转染 pc DNA 3.0 130 /190的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量降低 ,细胞数量减少 ,细胞体积增大 ;转染 pc DNA3.0 190末端的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量增高 ,细胞表现为增殖 ,细胞体积普遍减小。 结论 :Cdc2 5 B表达量降低与 L IF诱导引发的白血病细胞 HL - 6 0增殖抑制有关 ,上述效应是由 gp190亚基细胞内区介导的 ,而gp190 C末端片段可干扰 L

dbcAMP通过Cdc25B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育

为了研究PKA激活剂dbcAMP通过调控小鼠Cdc25B蛋白S149和S321位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育,将质粒pBSK-Cdc25B-WT、pBSK-Cdc25B-S149A、pBSK-Cdc25B-S321A和pBSK-Cdc25B-S149A/S321A体外转录成mRNA;显微注射入S期受精卵中,在2 mmol/LdbcAMP的M16培养基中培养,观察其对受精卵发育、MPF活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果显示,在有dbcAMP存在时,各组受精卵卵裂时间延迟,但Cdc25B-S/A-mRNAs注射组受精卵卵裂率明显高于Cdc25B-WT-mRNA注射组,MPF活性提前达到高峰;CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致.因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Cdc25B蛋白S149位点与S321位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式.

CDC25B蛋白亚细胞定位调控小鼠1-细胞期受精卵发育

为探讨小鼠细胞分裂周期25B(CDC25B)蛋白149位丝氨酸磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵中CDC25B的亚细胞定位和发育的影响,应用定制的CDC25B-pS149位的磷酸化和非磷酸化抗体检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞时期的磷酸化和非磷酸化状态;应用免疫荧光观察各期受精卵中CDC25B蛋白的定位情况;将质粒pEGFP-CDC25B-WT、pEGFP-CDC25B-S149A和pEGFP-CDC25B-S149D融合质粒及空载体质粒显微注射入G1期受精卵中,观察不同显微注射组小鼠1-细胞期受精卵中外源性CDC25B蛋白亚细胞定位.结果显示,CDC25B-S149位丝氨酸在G1和S期被磷酸化,在G2和M期去磷酸化.1-细胞期受精卵从G2向M期的转换过程中,发生了CDC25B向细胞核区的移位,到2-细胞初期,部分CDC25B蛋白又从细胞核回到细胞浆.实验结果提示,小鼠1-细胞期受精卵G2/M期转换过程中,CDC25B的S149位点磷酸化修饰可能是对CDC25B细胞内定位及其活性的精确调节方式.

β-谷甾醇靶向CDC25B抑制肝癌细胞增殖

【目的】探讨β-谷甾醇对肝癌细胞增殖的影响及其可能作用机制。【方法】通过SwissTarget和TargetNet数据平台预测β-谷甾醇的靶点、GEO2R分析GSE101728肝癌数据集中表达上调基因并分析两者共同基因,通过下载TCGA_LIHC数据矩阵分析得到细胞分裂周期25B(CDC25B)与肝癌临床分期和患者生存预后存在关系。CCK-8、细胞集落形成实验、流式细胞法检测β-谷甾醇作用下肝癌细胞HepG2和Hep3B细胞活力、细胞增殖、细胞周期分布和细胞凋亡情况;构建HepG2皮下移植瘤裸鼠模型分为Control组和β-谷甾醇组,β-谷甾醇组腹腔注射β-谷甾醇(50 mg/kg·d),测量移植瘤体积和质量,免疫组化检测Ki67表达水平;Western blot检测β-谷甾醇不同作用浓度和不同作用时间HepG2和Hep3B细胞系中CDC25B蛋白水平,构建稳定过表达CDC25B的HepG2和Hep3B细胞系并给予β-谷甾醇处理,同上方法检测HepG2和Hep3B细胞系细胞活力、细胞增殖、细胞周期分布和细胞凋亡情况。【结果】CDC25B表达水平,肝癌组织高于其癌旁组织(P<0.05),TNM分期(T2-4)高于TNM分期(T1)(P<0.05),肝癌临床分期Ⅱ-Ⅳ高于临床分期I(P<0.05),肝癌G3-4分化高于G1-2分化(P<0.05),复发患者高于未复发者(P<0.05),预后不良者高于预后良好者(P<0.05);CDC25B高表达组患者的总生存率低于CDC25B低表达组(P<0.05)。Hep3B和HepG2的细胞活力随着β-谷甾醇作用剂量增加、作用时间延长而降低,Hep3B(β-谷甾醇15µmol/L)和HepG2(β-谷甾醇18µmol/L)的相对克隆数目、S期细胞百分比均显著低于Control组(P<0.05),而G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率均显著高于Control组(P<0.05)。β-谷甾醇组移植瘤的体积、质量和Ki67相对表达水平均显著低于Control组(P<0.05)。Hep3B和HepG2细胞中的CDC25B蛋白表达均随着β-谷甾醇浓度增加、作用时间延长而减低,Hep3B和HepG2细胞的β-谷甾醇+CDC25B组的细胞生长、相对克隆数目、S期细胞百分比均显著高于β-谷甾醇组(P<0.05),而G0/G1期细胞百分比、细胞凋亡率均显著低于β-谷甾醇组(P<0.05)。【结论】β-谷甾醇可促进肝癌细胞凋亡和抑制细胞增殖,其抑制细胞增殖可能与抑制CDC25B蛋白表达有关。

小鼠受精卵微注射Cdc25b mRNA可提高卵裂率并促进受精卵发育

为了观察Cdc25B蛋白及PKA/Cdc25B信号途径在小鼠受精卵发育中的作用,将突变型和野生型Cdc25b转录成mRNA,显微注射到小鼠受精卵中,放入含有或不含有dbcAMP的M16中,相差显微镜下观察受精卵卵裂情况;用蛋白激酶活性测定方法检测MPF的活性;利用Western印迹检测Cdc2-Tyr15的磷酸化状态.结果显示,未加dbcAMP的Cdc25b-S321A mRNA注射组与Cdc25b-WT组相比,能够提前使受精卵发生G2/M期转变,导致卵裂,并明显提高卵裂率;MPF的活性测定和Cdc2-Tyr15磷酸化状态的检测结果也显示,Cdc25b-S321A组先于Cdc25b-WT组提前激活MPF.此外,Cdc25b-S321A mRNA注射组可以有效恢复由PKA引起的受精卵G2期阻滞,显著增加卵裂率;MPF的活性测定和Cdc2-Tyr15磷酸化状态的检测结果也显示,在PKA持续激活的情况下,对比于Cdc25b-WT组,Cdc25b-S321A组提前激活MPF.因此,在小鼠受精卵发育过程中PKA主要通过磷酸化Cdc25B的321位丝氨酸,从而调控MPF的激活与失活来控制有丝分裂进程.

三阴性浸润性导管乳腺癌中CDC25B表达及其预后分析

目的检测细胞分裂周期蛋白25B(CDC25B)在三阴性浸润性导管癌中的表达情况,分析其与三阴性浸润性导管癌预后的相关性。方法应用免疫组化染色技术检测92例三阴性浸润性导管癌石蜡标本中的CDC25B表达情况,并分析其与三阴性浸润性导管癌患者的年龄、TMN分期、淋巴结转移以及预后间的关系。结果三阴性浸润性导管癌中CDC25B高表达率为39.1%(36/92);CDC25 B高表达与腋窝淋巴结癌转移情况、TNM分期、年龄、病理学类型、肿瘤大小均无统计学意义相关,CDC25B高表达组的总生存率、无病生存率均显著低于低表达组(P<0.05)。Cox多因素分析结果显示CDC25B表达及腋窝淋巴结为无病生存率的独立预测因素。结论三阴性浸润性导管癌中CDC25B存在高表达,与乳腺癌的发展及预后有关,检测CDC25B对三阴性浸润性导管癌治疗及预后评估有一定参考意义。

CDC25B在大肠癌中的表达及意义

目的检测细胞分裂周期蛋白25B(CDC25B)在正常大肠组织、大肠增生性息肉、大肠腺瘤及大肠癌组织中的表达,探讨其是否可以作为大肠癌早期诊断的分子标志物。方法采用免疫组化染色(SP法)技术检测50例大肠癌组织、30例大肠腺瘤组织、10例大肠增生性息肉组织、10例正常大肠组织中CDC25B的表达。结果 CDC25B在在正常大肠、大肠增生性息肉、大肠腺瘤及大肠癌组织中的表达率分别为0、0、53.33%和76.00%,与大肠癌组织比较差异均有统计学意义(P<0.05)。CDC25B的表达与血清CEA有相关性(P<0.05),而与大肠癌患者的发病年龄、性别、民族、肿瘤大小、临床分期、有无淋巴结转移、组织学分级、血清CA-199及远处转移无相关性(P>0.05)。结论 CDC25B在大肠腺瘤及大肠癌中高表达,其可能参与了大肠腺瘤到大肠癌的转变过程;CDC25B在大肠癌组织的表达与大肠癌患者血清CEA有关,表明CDC25B表达可能参与了大肠癌发生发展,在大肠癌的进展中起一定的作用。

食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15表达变化及其临床意义

目的观察食管癌组织细胞分裂周期蛋白25B(CDC25B)、凋亡抑制蛋白PED/PEA-15表达变化,并探讨其临床意义。方法选择食管癌患者80例,取手术切除的新鲜食管癌组织及其配对的癌旁正常组织,采用免疫组化法检测CDC25B、PED/PEA-15表达。比较食管癌组织与癌旁正常组织CDC25B、PED/PEA-15阳性表达变化,并分析食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15阳性表达与患者临床病理特征的关系。采用Spearman秩相关分析法分析食管癌组织CDC25B阳性表达与PED/PEA-15阳性表达的关系。采用Kaplan-Meier生存分析法分析食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15表达与患者预后的关系。结果食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15阳性表达率均高于癌旁正常组织(χ^2分别为53.461、57.427,P均<0.01)。食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15阳性表达与肿瘤临床分期有关(P均<0.05),而与患者性别、年龄、肿瘤直径、肿瘤部位、肿瘤组织分化程度和淋巴结转移无关(P均>0.05)。Spearman秩相关分析显示,食管癌组织CDC25B表达与PED/PEA-15表达呈正相关关系(ρ=0.580,P<0.01)。CDC25B、PED/PEA-15阳性表达者5年总体生存率均低于其阴性表达者(χ^2分别为4.557、3.845,P均<0.05)。结论食管癌组织CDC25B、PED/PEA-15表达升高,其表达变化与肿瘤临床分期和患者预后有关。CDC25B、PED/PEA-15有可能成为食管癌早期诊断和靶向治疗的生物标志物。

1,3,4-噁二唑硫醚酰胺为核心骨架的新型多杂环分子的合成及对Cdc25B与PTP1B的抑制活性

首先利用含有三嗪的芳香酰肼(3)构筑了1,3,4-噁二唑衍生物(5),然后将化合物5与含有1,3,4-噻二唑的衍生物(6)拼合合成了18个目标分子.利用红外光谱(IR)、核磁共振波谱(NMR)和高分辨质谱(HRMS)等技术对其结构进行了表征.考察了目标分子对细胞分裂周期25磷酸酯酶B(Cdc25B)和蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B(PTP1B)的抑制活性.结果表明,有8个目标分子的抑制活性优于其阳性对照物,有望成为潜在的Cdc25B抑制剂;有12个目标分子的抑制活性优于其对照物,有望成为潜在的PTP1B抑制剂.

青蒿琥酯对人食管癌细胞的抑制作用及其可能的机制

目的:探讨青蒿琥酯(artesunate,Art)对人食管癌细胞的抑制作用及其可能的机制。方法:将人食管癌细胞Eca109接种到裸鼠左前上肢,建立食管癌荷瘤裸鼠动物模型,腹腔注射用药,第1组Art 100 mg/kg,第2组Art 200 mg/kg,第3组Art 300 mg/kg,第4组顺铂(cisplalin,又称DDP)3 mg/kg,第5组生理盐水对照组。观察各组裸鼠移植瘤体积和质量的变化,流式细胞术检测移植瘤组织的细胞周期、凋亡以及细胞分裂周期素25A(cell division cycle 25 A,CDC25A)、Smad3和转化生长因子-α(transforming growth facto-β,TGF-β)蛋白的表达,RT-PCR检测移植瘤组织中CDC25A、Smad3和TGF-βmRNA的表达水平。结果:成功建立食管癌荷瘤裸鼠动物模型。Art治疗后,裸鼠移植瘤体积和质量均明显小于对照组(P<0.05或P<0.01),其中Art 200 mg/kg组抑瘤作用最强,与DDP组相当。Art组与对照组相比,细胞周期G_0-G_1期显著增高(P<0.05)、S期显著减少(P<0.05),凋亡率显著增高(P<0.05);CDC25A蛋白及mRNA显著减少(P<0.05),Smad3和TGF-β蛋白及mRNA显著增高(P<0.05)。结论:Art具有抑制人食管癌细胞增殖的作用,其机制可能与通过下调CDC25A、上调Smad3和TGF-β的表达量而使肿瘤细胞停滞在G_0-G_1期,并诱导肿瘤细胞凋亡有关。

蛋白激酶A对CDC25B蛋白S149与S321位点磷酸化的修饰抑制小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂

在小鼠1-细胞期受精卵,蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）可通过磷酸化细胞分裂周期25B（cell division cycle25B,CDC25B）的321位Ser引起受精卵分裂阻滞。本文旨在研究PKA对CDC25B149位点Ser的磷酸化对小鼠受精卵发育的影响,及其与321位点的关系。质粒pBSK-CDC25B-WT（野生型）、pBSK-CDC25B-S149A（149位Ser突变成Ala）、pBSK-CDC25B-S321A（321位Ser突变成Ala）、pBSK-CDC25B-S149A/S321A（149位和321位Ser联合突变成Ala）体外转录成mRNAs;显微注射入小鼠S期受精卵中,在PKA抑制剂H-89预处理的M16培养基中培养,观察其对受精卵发育、有丝分裂成熟促进因子（matu-ration promoting factor,MPF）活性及CDC2-Tyr15磷酸化状态的影响。结果显示,H-89呈剂量（0~50μmol/L）依赖性的方式加速小鼠受精卵卵裂。然后选择卵裂率接近100%、H-89（40μmol/L）培养的小鼠受精卵,与对照组相比,CDC25B各种mRNAs注射组受精卵卵裂率明显增高,MPF活性提前达到高峰;CDC2-Tyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致,以上结果说明,CDC25B蛋白的149位Ser也是PKA在体内调控CDC25B的重要靶点。因此在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠CDC25B蛋白S149位点与S321位点的磷酸化修饰可能是控制受精卵G2/M转换的重要方式。

CDC25A与肿瘤的研究进展

细胞分裂周期因子25A(CDC25A)作为CDC25家族中的重要成员,具有双特异性磷酸酶活性,可以催化激活细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK),在细胞周期各期转换及有丝分裂过程中起重要作用,是细胞周期的重要调控因子。CDC25A的编码基因定位于染色体3p21上,具有癌基因功能,编码酪氨酸磷酸酶,过量的CDC25A可导致细胞生长失控从而引起细胞恶性转化及肿瘤生长。目前在多种恶性肿瘤中观察到CDC25A呈高表达状态,并与患者不良预后密切相关。近年的研究还发现CDC25A在细胞凋亡、细胞代谢、肿瘤细胞转移中发挥着关键作用。CDC25A在肿瘤中过表达的调控机制可归结于转录、转录后和翻译后水平的调控紊乱。肿瘤中异常表达的CDC25A表现出的原癌基因特性,使其逐渐成为抗癌药物研发中一个极具价值的分子靶标。CDC25A抑制剂的运用有望成为肿瘤治疗的有效途径。本文就CDC25A与肿瘤关系的研究进展作一综述。

沉默CDC25A基因后肝癌裸鼠移植瘤组织中差异表达基因的筛选

目的:探讨应用基因芯片技术筛选出可能受细胞分裂周期因子25A(cell division cycle 25A,CDC25A)调控的基因,阐明并验证CDC25A对肝癌相关基因的表达具有调控作用。方法:本课题组前期通过siRNA干扰技术沉默人肝癌HepG2细胞中CDC25A的表达并成功构建了肝癌裸鼠移植瘤模型。基于上述研究成果,在本研究中应用Affymetrix基因表达谱芯片技术进一步筛选沉默CDC25A后肝癌移植瘤组织中的差异表达基因,并进行GO及KEGG分析,应用qPCR对部分差异表达基因进行验证。结果:通过芯片技术筛选出沉默CDC25A基因的肝癌移植组织中的差异表达基因188个,其中上调基因78个、下调基因110个。这些差异表达基因主要涉及细胞增殖、细胞凋亡、蛋白复合物结合、细胞外间隙等方面,参与黏着斑、细胞外基质(extracellular matrix,ECM)受体相互作用等通路的改变。q PCR对部分差异表达基因验证的结果显示,HIPK2 mRNA表达上调,微纤丝关联蛋白5(microfibrillar-associated protein 5,MFAP5)和细胞周期蛋白D1(cyclin D1,CCND1)mRNA表达下调,与芯片检测结果一致。结论:应用人基因表达谱芯片技术成功筛选出沉默CDC25A后肝癌裸鼠移植瘤组织中的差异表达基因,为探究CDC25A影响肝癌细胞生长提供了支持线索。

大鼠实验性隐睾对睾丸间质细胞的影响

目的探讨大鼠实验性隐睾对睾丸间质细胞数量、形态及相关功能的影响。方法采用手术诱导方法制作大鼠(6月龄)双侧隐睾模型(每组6只),分别于术后第3天、7天、20天和28天取左侧睾丸入Bouin液固定,假手术组作为对照组。应用体视学方法检测睾丸间质细胞的数量、形态变化;应用免疫组织化学检测细胞分裂周期蛋白25A(CDC25A)、干细胞因子(SCF)、雄激素受体(AR)和雌激素受体α(ERα)的表达变化。结果隐睾术后睾丸间质体积分数明显增加,但睾丸间质的绝对体积无明显变化。间质细胞数量和光镜形态也无明显变化。免疫组织化学方法显示,CDC25A和SCF在间质细胞区域强表达,隐睾对其表达无明显影响;AR在间质细胞表达较弱,位于细胞质内,各组之间表达强度无明显变化;ERα在对照组睾丸间质细胞内表达较弱,间质细胞核基本无阳性着色,但随着隐睾时间的延长,间质细胞核阳性表达比例明显升高,在隐睾术后第28天时达到93.6%。结论大鼠实验性隐睾对睾丸间质细胞的数量和光镜形态无明显影响,但对其甾体类激素合成及相关调节功能有明显影响。

宫颈癌患者癌组织Cdc2、Cdc25B表达与HR-HPV感染及病毒载量的关系

目的探讨宫颈癌(CC)患者癌组织细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)、细胞分裂周期蛋白25B(Cdc25B)表达与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染及病毒载量的关系。方法选取2019年1月-2022年6月锦州医科大学附属第一医院诊治的68例CC患者为CC组、54例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者为CIN组、30例慢性宫颈炎(CCS)患者为CCS组,采用免疫组化法检测宫颈组织中Cdc2、Cdc25B表达情况,采用第二代基因杂交捕获法检测HR-HPV DNA载量,分析Cdc2、Cdc25B表达与CC患者临床特征的关系,采用Spearman相关系数分析Cdc2、Cdc25B表达与HR-HPV DNA载量的关系。结果CC组Cdc2、Cdc25B阳性表达率、HR-HPV感染率、HR-HPV DNA载量均高于CIN组及CCS组,CIN组高于CCS组(P<0.05);CINⅢ患者及CINⅡ患者Cdc2、Cdc25B阳性表达率均高于CINⅠ患者(P<0.05);CC患者癌组织中Cdc2、Cdc25B表达情况与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移情况及HR-HPV感染有关(P<0.05);Spearman分析显示,CC患者癌组织中Cdc2、Cdc25B表达与HR-HPV DNA载量成正相关(P<0.05)。结论HR-HPV感染率、Cdc2及Cdc25B阳性表达率随宫颈病变程度增加而升高,Cdc2及Cdc25B阳性表达与CC患者病理特征有关,并与HR-HPV DNA载量呈正相关。