阿霉素诱导肝细胞黏附分子基因下调肾癌细胞细胞分裂周期基因2的表达

目的:研究阿霉素联合hepaCAM基因对肾癌细胞786-0生物学的影响。方法:阿霉素处理后,用腺病毒向肾癌786-0导入肝细胞黏附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM),以噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)测抑制率,流式细胞术(Flow cytometer,FCM)测细胞周期,实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)、Western blot检测hepaCAM和细胞分裂周期基因2(Cell division cycle 2,cdc2)的mRNA及蛋白水平。结果:MTT显示:与对照组相比,实验组抑制率显著升高(P<0.01)。FCM证实:实验组出现明显G2/M期阻滞。RT-qPCR及Western blot检测到实验组cdc2 mRNA及蛋白水平显著下调(P<0.01)。结论:阿霉素处理后,导入hepaCAM基因,可引起细胞抑制率显著升高及G2/M期阻滞,这可能与阿霉素诱导hepaCAM下调cdc2的表达有关。

人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定

目的:从人肝癌组织中克隆出人细胞分裂周期基因2(CDC2),并在大肠杆菌中表达CDC2蛋白。方法:从人肝癌组织中提取RNA,采用RT-PCR法扩增CDC2cDNA,用DNA凝胶回收试剂盒纯化并回收RT-PCR产物,将RT-PCR产物插入pET28a(+)载体NdeⅠ和XhoⅠ两酶切位点之间,转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导表达人CDC2蛋白。结果:RT-PCR扩增出约894bp的DNA片段,与GenBank中的CDC2基因序列完全一致。经限制性内切图谱和测序鉴定,成功构建了pET28a(+)/CDC2原核表达载体。SDS-PAGE分析结果显示人CDC2蛋白在大肠杆菌中得已表达。结论:从人肝癌组织中成功地扩增出CDC2基因,并在大肠杆菌中表达。