细胞分裂周期相关蛋白激酶7和微小染色体维持蛋白2的表达与弥漫大B细胞淋巴瘤患者预后的关系

目的探讨弥漫大B细胞淋巴瘤（DLBCL）组织中细胞分裂周期相关蛋白激酶7（Cdc7）和微小染色体维持蛋白2（MCM2）的表达以及与患者预后的关系。方法收集经病理证实的60例DLBCL患者的临床资料，应用荧光定量PCR法测定患者外周血和骨髓中Cdc7和MCM2基因的表达，分析Cdc7和MCM2基因表达与患者预后的关系。结果外周血Cdc7高表达组和低表达组患者的2年生存率分别为38．3％和65．4％（P=0．001），骨髓Cdc7高表达组和低表达组患者的2年生存率分别为37．2％和75．5％（P=0．032），外周血MCM2高表达组和低表达组患者的2年生存率分别为44．0％和68．2％（P=0．025），骨髓MCM2高表达组和低表达组患者的2年生存率分别为39．0％和63．4％（P=0．007）。外周血和骨髓中Cdc7和MCM2基因高表达是DLBCL患者的预后不良因素。结论Cdc7和MCM2的表达与传统预后指标相结合可以准确预测DLBCI．患者的预后，靶向调控Cdc7和MCM2通路可能成为治疗难治性DLBCL患者的新途径。

细胞分裂周期相关蛋白7在恶性肿瘤中的研究进展

近年来,恶性肿瘤成为人类死亡的最主要原因之一。细胞分裂周期相关蛋白7(CDCA7)是一种在细胞分裂过程中起关键作用的蛋白质,在多种恶性肿瘤(食管癌、乳腺癌、卵巢癌等)细胞系中过表达。CDCA7在介导DNA复制、DNA损伤信号通路和刺激细胞周期终止等过程中起关键作用,可结合多种受控基因、诱发异常有丝分裂,使正常细胞转变为肿瘤细胞。未来,CDCA7有望成为多数恶性肿瘤的新的肿瘤标志物及治疗靶点,并基于此开发出高选择性、强效且低毒的CDCA7抑制剂。

细胞分裂周期相关蛋白7通过增强细胞增殖和干性促进人乳腺癌进程

目的探讨细胞分裂周期相关蛋白7(CDCA7)在人类乳腺癌中的相关功能及潜在的作用机制。方法通过癌症和肿瘤基因图谱(TCGA)数据库分析检索出不同乳腺癌亚型差异表达基因,找到在基底型乳腺癌中高表达基因,在这些基因中找到CDCA7,通过临床患者的相关标本做免疫组织化学分析,确定其研究意义,进而建立CDCA7稳转细胞系,通过集落形成实验、成球实验及流式细胞术分析研究其在乳腺癌中的功能,最后通过Realtime PCR及Western blotting实验分析其在乳腺癌中的分子机制。结果数据库和免疫组织化学结果均显示,CDCA7在基底型乳腺癌细胞中表达高于其他亚型,高表达的CDCA7预示乳腺癌患者不良预后。在luminal细胞系中稳定地过表达CDCA7后,细胞表现出更强的增殖能力,进入分裂期的细胞明显增多,而凋亡细胞显著减少。同时流式细胞术分析表明,过表达CDCA7的细胞表现出了干细胞标记(CD133,乙醛脱氢酶)上调。Real-time PCR和Western blotting结果提示,CDCA7能够上调β-连环蛋白(β-catenin)表达,以此影响Wnt信号通路,并影响细胞增殖和干性。结论 CDCA7作为一个促瘤基因,能够通过依赖β-catenin以及Wnt信号通路的方式来诱导luminal乳腺癌细胞向basal-like亚型转化的能力。

细胞分裂周期相关蛋白5在肝细胞肝癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)、细胞外调节蛋白激酶(ERK)在肝细胞肝癌中的表达及临床意义。方法取260例原发性肝细胞肝癌患者的肝细胞肝癌组织,取52例肝脏良性病变患者的正常肝组织作为对照。蛋白质印迹法(Western blot)检测CDCA5、ERK、细胞周期蛋白依赖性激酶1(CDK1)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)的相对表达量;实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定CDCA5、ERK mRNA的相对表达量,并分析其与患者临床特征的关系。采用Pearson相关性分析CDCA5和ERK与肝细胞肝癌患者病理特征间的相关性。结果肝细胞肝癌组织中CDCA5、ERK mRNA的相对表达量均高于正常肝组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。肝细胞肝癌组织中CDCA5、ERK、CDK1和cyclin B1蛋白的相对表达量均高于正常肝组织,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。不同肿瘤直径、Edmondson分级、巴塞罗那临床肝癌(BCLC)分期、合并门静脉癌栓情况和甲胎蛋白(AFP)水平肝细胞肝癌患者肝细胞肝癌组织中CDCA5、ERK mRNA的相对表达量比较,差异均有统计学意义(P﹤0.05)。CDCA5、ERK的表达与Edmondson分级为Ⅲ~Ⅳ级、BCLC分期为B~C期、有门静脉癌栓和AFP水平升高呈正相关(P﹤0.05)。结论CDCA5可能依赖ERK的磷酸化来促进CDK1、cyclin B1的表达,促进肿瘤细胞的恶性增殖,临床有望将其作为治疗肝细胞肝癌的新靶点。

CDC7 MCM2在弥漫大B细胞淋巴瘤预后和治疗中的作用

弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)是最常见的非霍奇金淋巴瘤,占成人淋巴瘤发病率的30%～40%。由于受预后危险因素和生物学特性的影响,不同患者的5年生存率差异很大。DLBCL的发病率呈逐年上升趋势,仅40%～45%的患者可经CHOP方案治愈,美罗华联合CHOP方案可以显著延长患者的生存期。临床工作中发现IPI评分不能准确预测DLBCL患者的预后,所以急需找到能反映其生物学行为的特异性分子指标来准确预测患者的预后并指导个体化治疗方案的制定。CDC7是一种丝氨酸/苏氨酸激酶,最早在酵母中发现,与DNA复制有关。人CDC7通过磷酸化微小染色体维持蛋白2(MCM2)来启动DNA的复制。许多恶性肿瘤细胞中存在CDC7的高表达,包括DLBCL。CDC7高表达是DLBCL患者的预后不良因素之一,可作为DLBCL的特异性预后指标指导患者预后;靶向抑制CDC7基因通路可以诱导DLBCL细胞的凋亡,与美罗华联合有协同增效作用。CDC7和MCM2在指导DLBCL的预后及临床治疗方面具有重要的临床意义。CDC7基因通路可以成为治疗DLBCL患者的新的治疗靶点。CDC7抑制剂与美罗华联合可以有效提高难治性DLBCL患者的疗效。

Rock2对细胞周期检查点Cdc25A的调节作用

目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中,Western blotting检测Cdc25A蛋白表达变化;针对Rock2干扰序列,利用PCR定点突变技术进行碱基突变,构建Rock2突变质粒从而"恢复"Rock2表达,分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变。Western blotting检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中检查点激酶1(Chk1)和检查点激酶2(Chk2)蛋白的变化,免疫共沉淀及免疫荧光分析Rock2与Cdc25A的相互作用。结果:Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达,而且两者呈正相关。肝癌细胞中稳定低表达Rock2后,Cdc25A蛋白表达明显下降;"恢复"Rock2表达后,Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象。Rock2低表达对Chk1和Chk2蛋白变化无明显影响。免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用,免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位。结论:Rock2对细胞周期检查点Cdc25A起直接的正向调控作用,而且不依赖于Chk1/Chk2,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。

上皮性卵巢癌组织CDCA7表达水平及其与患者预后的相关性研究

目的探讨上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)组织细胞分裂周期相关蛋白(cell division cycle associated protein 7,CDCA7)表达水平及其与患者预后的相关性。方法收集2010年10月~2020年10月河北省秦皇岛市第一医院收治的90例EOC患者癌组织标本和50例癌旁组织标本,采用免疫组织化学法检测癌组织、癌旁组织标本CDCA7阳性表达情况;采用实时荧光定量(qRT-PCR)法检测癌组织、癌旁组织标本CDCA7 mRNA相对表达量。比较EOC癌组织标本中CDCA7表达情况与临床病理特征的关系;Kaplan-Meier法分析EOC癌组织标本中CDCA7表达情况与患者无进展生存期(progression-free survival,PFS)和生存率的相关性以及COX风险比例回归分析影响预后的因素。结果CDCA7蛋白在EOC癌组织中阳性表达率为78.33%,高于癌旁组织的64.17%,差异有统计学意义(χ^(2)=70.767,P=0.000);CDCA7mRNA在癌组织中的相对表达量为6.05±0.32,高于癌旁组织(1.08±0.06),差异有统计学意义(t=108.600,P=0.000);CDCA7高表达与EOC患者病理分期、肿瘤浸润深度、病理分型、淋巴结转移、CA125水平和HE4水平等临床特征有关(χ^(2)=3.947~8.420,均P<0.05);Kaplan-Meier法生存分析,CDCA7低表达EOC患者PFS生存时间为98.15±10.72个月,高于CDCA7高表达患者(63.25±7.49个月),差异有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=3.849,P=0.049);CDCA7低表达患者12个月的总生存率为87.35%,高于CDCA7高表达患者的45.76%,差异有统计学意义(Log-Rankχ^(2)=6.905,P=0.012);COX比例风险回归,TNM分期为Ⅲ~Ⅳ期、并发淋巴结转移、CDCA7高表达为影响患者12个月PFS的独立危险因素(Waldχ^(2)=4.858,4.892,5.025,P=0.028,0.028,0.026)。结论CDCA7在EOC患者癌组织中阳性表达率高于癌旁组织,CDCA7高表达是影响患者12个月PFS的独立危险因素,可作为EOC患者不良预后评估的分子标志物。

CDCA7L在人脑胶质瘤组织中的表达及意义

目的探讨细胞分裂周期相关7样蛋白(CDCA7L)在胶质瘤组织中的表达及其与病人预后的关系。方法免疫组织化学染色法检测2012年1月至2013年5月手术切除的112例胶质瘤组织和2018年1~12月颅脑损伤内减压术中切除的45例正常脑组织中CDCA7L的表达水平,根据染色情况将胶质瘤病人分为高表达组和低表达组。胶质瘤病人随访截止2019年6月,记录总生存期(OS)和无进展生存期(PFS)。结果胶质瘤组织CDCA7L高表达率(66.96%,75/112)明显高于正常脑组织(17.78%,8/45;P<0.05)。高级别胶质瘤组织CDCA7L高表达率(79.41%,54/68)明显高于低级别胶质瘤(47.73%,21/44;P<0.05)。多因素Cox比例风险回归模型分析结果显示,CDCA7L高表达是胶质瘤病人OS和PFS较短的独立影响因素(P<0.05)。生存曲线分析显示,高表达组中位OS(21个月,四分位区间16~41个月)和中位PFS(18个月,四分位区间13~38个月)均明显低于低表达组[分别为60个月(48~65个月)和45个月(41~52个月);P<0.05]。结论胶质瘤组织CDCA7L呈高表达,而且与胶质瘤不良生存预后和肿瘤进展有关。

CDCA5、miR-146a、S100A7水平与过敏性鼻炎严重程度的关系及其临床价值

目的 检测过敏性鼻炎(AR)患者外周血中细胞分裂周期相关蛋白5(CDCA5)、微小RNA-146a(miR-146a)及鼻腔分泌物中S100钙结合蛋白A7(S100A7)的水平,分析上述3项指标与AR病情严重程度的关系及其对AR的临床诊断价值。方法 回顾性选取2019年7月至2022年3月于延安市人民医院就诊的83例AR患者作为观察组,另选取同期在该院体检且无过敏性疾病和呼吸道相关疾病的健康人50例作为对照组。采用实时荧光定量聚合酶联反应和酶联免疫吸附试验分别检测两组受试者外周血中CDCA5、miR-146a水平及鼻腔分泌物中S100A7水平;采用Spearman相关分析CDCA5、miR-146a、S100A7与AR病情严重程度的相关性,绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析CDCA5、miR-146a、S100A7对AR的诊断效能。结果 观察组患者CDCA5水平高于对照组,miR-146a和S100A7水平低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。CDCA5水平与AR病情严重程度呈正相关(r=0.637,P<0.05);miR-146a、S100A7水平与AR病情严重程度呈负相关(r=-0.596、-0.605,P<0.05)。CDCA5、miR-146a、S100A7单独诊断AR的曲线下面积(AUC)分别为0.778、0.784、0.806,而3项指标联合诊断AR的AUC为0.897、灵敏度为87.9%、特异度为83.6%。结论 CDCA5、miR-146a、S100A7水平与AR患者病情严重程度关系密切,3项指标联合检测能提高对AR的临床诊断效能,对评估患者病情及指导临床诊治具有重要意义。

抗人CDC7单克隆抗体的制备与鉴定

目的制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。方法以GST-CDC7为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗人CDC7单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用间接ELISA,WesternBlot,免疫细胞化学(ICC)对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到1株能稳定分泌抗人CDC7的细胞株1F7D2C9。亚类鉴定为IgG2a,轻链为kappa链,ELISA法鉴定该抗体腹水效价为1:102400,抗体亲和常数为1.558×109L/mol,WesternBlotting分析表明,此抗体能特异识别细胞株的天然CDC7蛋白质。免疫细胞化学进一步显示CDC7分布于细胞核中。结论成功制备了抗人CDC7单克隆抗体,为研究CDC7与细胞癌变的关系建立了基础。

CDCA5促进子宫内膜癌细胞增殖和迁移的作用及机制

目的:探讨CDCA5在促进子宫内膜癌细胞增殖和迁移上的作用及相关机制。方法:生物信息学预测和分析CDCA5与CCNB1在子宫内膜癌中可能存在的相关性。慢病毒敲低CDCA5表达后检测CCNB1表达水平的变化情况,以及检测子宫内膜癌细胞增殖、迁移能力。使用特异性ERK抑制剂后检测磷酸化ERK1/2及CDCA5表达水平,以及验证ERK抑制剂对子宫内膜癌细胞增殖、迁移能力的影响。过表达CDCA5后检测子宫内膜癌细胞功能及相关蛋白表达的变化。结果:生物信息学分析结果显示,CDCA5和CCNB1在子宫内膜癌中高表达且两者之间存在相关性。敲降CDCA5表达显著降低子宫内膜癌中CCNB1表达,抑制细胞增殖和迁移。特异性MAPK通路抑制剂能有效抑制子宫内膜癌细胞中CDCA5和磷酸化ERK1/2蛋白表达并抑制细胞增殖和迁移能力。过表达CDCA5能促进ERK1/2蛋白磷酸化并增强子宫内膜癌细胞的增殖和迁移能力。结论:CDCA5可能成为子宫内膜癌的潜在治疗靶点,其可能通过上调CCNB1表达,激活ERK信号通路促进子宫内膜癌的发生发展,抑制和干扰CDCA5或其通路关键因子,可能为子宫内膜癌的临床诊断和治疗提供更多思路。

CDCA7通过与MCM3相互作用介导胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移

目的:探讨细胞分裂周期相关蛋白7(cell division cycle-associated protein 7,CDCA7)对人胰腺癌细胞增殖、侵袭及迁移能力的影响,及其可能的作用机制。方法:利用癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)和基因表达谱数据动态分析(Gene Expression Profiling Interactive Analysis,GEPIA)数据库分析胰腺癌组织及癌旁组织中CDCA7表达水平的差异,并采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法分别检测CDCA7 mRNA和蛋白在人正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌Bxpc-3、CFPAC-1、PANC-1、MIA PaCa-2、Capan2及SW1990细胞中的表达水平。构建干扰CDCA7基因表达的重组慢病毒,稳定转入PANC-1细胞,并分别采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测干扰效率。干扰CDCA7基因表达后,分别采用CCK-8法和平板克隆实验检测对PANC-1细胞增殖能力的影响,细胞划痕愈合实验及Transwell小室法检测对PANC-1细胞迁移及侵袭能力的影响;进一步采用蛋白质印迹法检测干扰CDCA7表达后对上皮-间质转化相关蛋白波形蛋白(Vimentin)和E-钙黏蛋白(E-cadherin),以及细胞周期蛋白D1(cyclin D1)和cyclin E1表达水平的影响。通过生物信息学网站(STING和GEPIA)预测CDCA7与微型染色体维持蛋白3(minichromosome maintenance protein 3,MCM3)的关系,并进一步采用免疫共沉淀法检测CDCA7与MCM3的相互作用,采用蛋白质印迹法检测干扰CDCA7表达后MCM3蛋白表达水平的变化。结果:CDCA7在胰腺癌组织中的表达水平明显高于癌旁组织(P<0.05);CDCA7 mRNA及蛋白在胰腺癌PANC-1、MIA PaCa-2和SW1990细胞中的表达水平均明显高于人正常胰腺导管上皮细胞HPDE(P值均<0.05)。干扰CDCA7表达后,PANC-1细胞中CDCA7 mRNA和蛋白的表达水平明显下降(P值均<0.05),PANC-1细胞的增殖、侵袭及迁移能力明显降低(P值均<0.05);Vimentin、cyclin D1和cyclin E1蛋白的表达水平均明显下调,而E-cadherin蛋白的表达水平明显上调(P值均<0.05)。CDCA7与MCM3存在相互作用,且干扰CDCA7表达后MCM3蛋白的表达水平明显降低(P<0.05)。结论:CDCA7在部分胰腺癌细胞中高表达,干扰其表达可抑制胰腺癌PANC-1细胞的增殖、侵袭及迁移能力。

小白菊内酯通过CDCA4调控PI3K/AKT通路抑制三阴性乳腺癌转移

目的研究小白菊内酯(PTL)对乳腺癌MDA-MB-231细胞转移干预作用的影响及其相关机制。方法配置0、2.5、5.0、10.0、20.0、40.0μmol/L的PTL处理乳腺癌MDA-MB-231细胞24 h,采用MTS法和划痕实验检测不同浓度的PTL对MDA-MB-231细胞活力和迁移能力的影响。利用转染技术建立空白组,阴性对照组和CDCA4转染组;用PI3K抑制剂处理细胞24 h,建立PI3K抑制剂组和对照组。利用蛋白质印迹法和RT-PCR技术检测各组细胞人类细胞分裂周期相关基因4(CDCA4)、磷脂酰肌醇-3-激酶催化亚基α(PIK3CA)及丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(AKT)等信号分子的蛋白水平和mRNA的表达水平。结果PTL可抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞的增殖和迁移,并且能够下调CDCA4、PIK3CA、AKT的蛋白和mRNA表达水平,差异均有统计学意义(P<0.05)。与空白组和阴性对照组相比,CDCA4转染后的PIK3CA、AKT的mRNA和蛋白的表达量明显减少,差异均有统计学意义(P<0.05)。与对照组相比,PI3K抑制剂组的AKT、CDCA4的蛋白表达量明显下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论PTL可能通过下调CDCA4的表达,减少PIK3CA的突变从而抑制PI3K/AKT信号通路的激活,降低乳腺癌MDA-MB-231细胞的迁移能力。

人结直肠癌组织中CDCA7表达水平与临床意义分析

目的探讨人结直肠癌组织中细胞分裂周期相关蛋白7(CDCA7)的表达水平并分析其临床意义。方法以2012年10月至2013年11月于广西医科大学第一附属医院接受结直肠癌根治术的105例结直肠癌患者为研究对象,患者术前均未接受放化疗,均取结直肠癌标本及正常结直肠黏膜组织标本各一份,采用免疫组织化学SP法检测上述标本中CDCA7的表达,并分析CDCA7的表达水平与结直肠癌患者临床病理特征的关系。结果 105例患者的组织标本中正常结直肠黏膜组织与结直肠癌组织的CDCA7阳性表达率分别为56.19%(59/105)、80.00%(84/105),组间差异有统计学意义(P<0.05)。CDCA7阳性表达与结肠癌患者肿瘤浸润深度、分化程度、TNM临床分期、是否发生淋巴结转移和远处转移有关(均P<0.05)。结论 CDCA7在人结直肠癌组织中阳性表达率高于正常结直肠黏膜组织,且其表达水平与结直肠癌患者的多个临床病理参数有关,CDCA7可能参与了结直肠癌的发生发展。