高危型人乳头瘤病毒感染与宫颈病变组织中细胞周期蛋白依赖性激酶6和E2F转录因子1蛋白表达的关系

目的 分析高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染与宫颈病变组织中细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)和E2F转录因子1(E2F-1)蛋白表达的关系。方法 选取2018年1月—2020年12月杭州市第一人民医院收治的慢性宫颈炎患者134例,宫颈上皮内瘤变(CIN)Ⅰ/Ⅱ级患者131例,CINⅢ级患者129例,宫颈癌患者118例,分别记为A组、B组、C组、D组,4组均取病灶组织,采用免疫组化二步法检测CDK6、E2F-1蛋白表达,比较4组高危型HPV感染率、病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达情况及阳性率;比较D组不同临床病理特征患者癌组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率;分析各组高危型HPV感染与病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达的关系。结果 4组高危型HPV感染率,病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。D组中Ⅲ+Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移的患者病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率,高危型HPV感染率均高于Ⅰ+Ⅱ期、中/高分化、无淋巴结转移的患者(均P<0.05)。在4组中,高危型HPV感染与病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达均呈正相关(r=0.612、0.703、0.747、0.846,均P<0.05;r=0.549、0.697、0.721、0.835,均P<0.05)。结论 宫颈病变高危型HPV感染率,病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率高,Ⅲ+Ⅳ期、未/低分化、有淋巴结转移的患者病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达阳性率高,高危型HPV感染与病灶组织CDK6、E2F-1蛋白表达均呈正相关。

对肿瘤细胞中p27^(kip1)蛋白功能的再认识

p27kip1（以下简称p27）蛋白是一种调控细胞周期并抑制细胞分裂的重要因子,被认为是人类多种肿瘤独立的预后因子和未来可能的肿瘤治疗靶点。传统经典观点认为p27是细胞周期素依赖性激酶抑制因子（cyclindepen dent kinaseinh ibitor，CDKI），

缺血性脑卒中患者的外周血CDC42表达水平、炎症相关Th和细胞因子水平及其与神经功能缺损、焦虑/抑郁及认知功能障碍程度的相关性

目的分析缺血性脑卒中患者的外周血细胞分裂周期蛋白42(CDC42)表达水平、炎症相关Th和细胞因子水平,并探讨上述指标与神经功能缺损、焦虑/抑郁及认知功能障碍程度的相关性。方法纳入200例缺血性脑卒中患者、200例健康体检者分别作为观察组、对照组。比较两组外周血的CDC42 mRNA表达水平及Th1、Th2、Th17、白细胞介素(IL)-6、IL-10、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平。分析观察组上述指标与美国国立卫生院卒中量表(NIHSS)评分、焦虑自评量表(SAS)评分、抑郁自评量表(SDS)评分、简易智力状况检查(MMSE)量表评分的相关性。结果观察组的IL-6、TNF-α、Th1、Th17水平高于对照组,而CDC42 mRNA表达水平及Th2、IL-10水平低于对照组(P<0.05)。观察组Th1、Th17、IL-6、TNF-α水平与NIHSS评分、SAS评分、SDS评分呈正相关,与MMSE量表评分呈负相关(P<0.05),而CDC42 mRNA表达水平及IL-10、Th2水平与NIHSS评分、SAS评分、SDS评分呈负相关,与MMSE量表评分呈正相关(P<0.05)。结论缺血性脑卒中患者外周血促炎性Th(Th1、Th17)及细胞因子(IL-6、TNF-α)水平升高,而抗炎性Th(Th2)及细胞因子(IL-10)水平降低,免疫调节因子CDC42表达水平下调,上述指标可在一定程度上反映患者的神经功能缺损、焦虑/抑郁及认知功能障碍程度,有助于监测患者的病情程度及进展情况。

CDK6及E2F-1参与细胞周期调控pRb通路的研究进展

目前肿瘤的本质被认为是一种细胞周期病,细胞周期的调控是一种受多条件限制、由多因素参与的复杂并且精细的过程,其经典途径包括pRb途径及p53途径,其中任何一个环节出现异常,均可能导致肿瘤的发生。细胞周蛋白依赖性激酶6(CDK6)、核转录调节因子E2F-1均参与细胞周期调控的RB通路,在G1期向S期转换过程中起到非常关键的作用。现有研究已证实,在人体的很多肿瘤中CDK6、E2F-1表达均呈现异常,其与肿瘤的发生发展有密切联系。因此,进一步了解二者在细胞周期调控中的作用及其在不同类别肿瘤中的表达异常对了解肿瘤的发生发展有重大意义。

Cdt1和Mcm6在视网膜母细胞瘤中的表达和意义

目的:探讨Cdc10依赖性转录因子1(Cdt1)和微小染色体维持蛋白6(Mcm6)在视网膜母细胞瘤(Rb)中的表达及其与Rb分化程度和视神经浸润的关系。方法:应用免疫组织化学方法对26例Rb常规石蜡标本中Cdt1和Mcm6的表达进行检测,分析二者与肿瘤分化程度及视神经浸润的关系。结果:Cdt1和Mcm6在所有Rb中呈阳性表达,在瘤旁正常视网膜中不表达;二者在未分化组中的表达高于分化组,差异有统计学意义(P<0.01);在视神经浸润组中Cdt1的表达低于未浸润组差异有统计学意义(P<0.05);Mcm6的表达与视神经浸润不相关,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:Cdt1和Mcm6与Rb的分化程度有关,Cdt1与视神经浸润有关。

ATF1与CDK3蛋白相互作用研究

研究真核细胞转录激活因子1(activating transcription factor1,ATF1)与细胞周期蛋白依赖性蛋白激酶3(cyclin-dependent kinase3,CDK3)的相互作用机制,分别构建ATF1的激酶诱导区域(kinaseinducible domain,KID)结构域、谷氨酰胺富含域(glutamine rich domain,Q2)结构域及亮氨酸拉链区(basic leucine zipper domain,bZIP)结构域缺失体与VP16的融合表达载体,在HEK293细胞过表达,应用真核细胞双杂交系统,研究ATF1结构域与CDK3的相互作用.结果表明,ATF1全蛋白与CDK3蛋白之间存在强烈的相互作用;ATF1结构域缺失体与VP16的融合蛋白在HEK293细胞中可获得高表达,但ATF1的任何一种结构缺失体与CDK3蛋白结合都会严重减弱其与CDK3蛋白的相互作用,只有完整的ATF1蛋白才能实现与上游CDK3蛋白的结合.

沉默CDKN2B-AS1调控miR-98-5p、STAT3对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的影响

[目的]探讨细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂2B反义RNA 1(CDKN2B-AS1)是否通过靶向miR-98-5p影响高糖诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤。[方法]将HUVEC分为对照组(含5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型组(含33.5 mmol/L葡萄糖的DMEM培养)、模型+si-NC组、模型+si-CDKN2B-AS1组、模型+miR-NC组、模型+miR-98-5p模拟物组、模型+si-CDKN2B-AS1+anti-miR-NC组、模型+si-CDKN2B-AS1+anti-miR-98-5p组。运用实时定量聚合酶链反应检测HUVEC的CDKN2B-AS1、miR-98-5p表达;Western blot检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡;超氧化物歧化酶(SOD)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)试剂盒检测SOD、LDH、MDA水平。双荧光素酶报告实验分析miR-98-5p与CDKN2B-AS1、STAT3的靶向结合。[结果]高糖使HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平升高,miR-98-5p表达、SOD水平降低(P<0.05)。沉默CDKN2B-AS1或过表达miR-98-5p后,高糖诱导的HUVEC中CDKN2B-AS1、STAT3表达、凋亡率、LDH、MDA水平降低,miR-98-5p表达、SOD水平升高(P<0.05)。双荧光素酶报告实验显示,CDKN2B-AS1靶向miR-98-5p,miR-98-5p靶向STAT3。抑制miR-98-5p逆转了沉默CDKN2B-AS1对高糖诱导的HUVEC凋亡、氧化应激、STAT3蛋白表达的抑制作用。[结论]沉默CDKN2B-AS1通过调节miR-98-5p/STAT3轴抑制高糖诱导的HUVEC氧化应激和凋亡,CDKN2B-AS1可作为糖尿病相关血管并发症的候选治疗靶标。

蒲公英多糖通过下调LncRNA CCAT1表达抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移和侵袭

目的通过观察蒲公英多糖(dandelion polysaccharide,DP)联合小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶向沉默长链非编码RNA(LncRNA)结肠癌相关转录因子1(colon cancer-associated transcript 1,CCAT1)对三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响,探究DP抗乳腺癌可能的分子机制。方法在线数据工具分析CCAT1在乳腺癌组织中的差异表达,qRT-PCR分别检测CCAT1在乳腺癌细胞系中的差异表达、DP(100、200μg/mL)对MCF-10A、MCF-7、MDA-MB-231细胞中CCAT1表达的影响以及siCCAT1对MDA-MB-231细胞中CCAT1表达的影响;CCK-8实验、划痕实验和Transwell实验分别检测DP联合siCCAT1对MDA-MB-231细胞活力、迁移和侵袭能力的影响;在线数据工具预测CCAT1下游靶基因及靶基因富集的信号通路;Western blotting检测DP联合siCCAT1对MDA-MB-231细胞EMT相关蛋白及蛋白激酶B(protein kinase B,Akt)/糖原合成激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)/细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)/周期蛋白依赖性激酶6(cyclin-dependent kinases 6,CDK6)信号通路中关键蛋白表达的影响。结果与癌旁正常组织及正常乳腺上皮细胞MCF-10A相比,CCAT1在人乳腺癌组织和细胞中高表达(P<0.01);与对照组比较,DP呈剂量和时间相关性地抑制MDA-MB-231及MCF-7细胞活力(P<0.05、0.01),但对MCF-10A细胞活力无明显影响;与MCF-10A及MCF-7细胞相比,DP可显著下调MDA-MB-231细胞中CCAT1表达水平(P<0.01);与siNC组比较,siRNA可显著降低CCAT1在MDA-MB-231细胞中的表达(P<0.01),且DP(200μg/mL)联合siCCAT1更加显著降低了MDA-MB-231细胞中CCAT1的表达水平(P<0.01);与对照组及siNC组比较,DP(200μg/mL)和siCCAT1均能抑制MDA-MB-231细胞活力(P<0.01),且DP(200μg/mL)联合siCCAT1对MDA-MB-231细胞活力的抑制作用更为明显(P<0.01);与对照组及siNC组比较,DP(200μg/mL)和siCCAT1均能抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭(P<0.01),且DP(200μg/mL)联合siCCAT1抑制MDA-MB-231细胞迁移和侵袭能力的作用更为明显(P<0.01);与单独用DP或siCCAT1相比,DP联合siCCAT1处理MDA-MB-231细胞中EMT进程相关蛋白E-cadherin表达上调更为显著(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达下调更为显著(P<0.01);在线生物工具预测出CCAT1靶基因共1929个,这些靶基因主要富集在RNA聚合酶II启动子转录调控、信号转导、转录调控等关键生物过程;富集的通路主要有癌症、磷脂酰肌醇3-激酶(phosphatidylinositol 3-kinase,PI3K)/Akt信号通路;与对照组及siNC组比较,DP(200μg/mL)和siCCAT1均能下调MDA-MB-231细胞中Akt/GSK-3β/Cyclin D1/CDK6信号通路关键蛋白p-PI3K、p-Akt、p-GSK-3β、Cyclin D1、CDK6蛋白表达水平(P<0.05、0.01),且DP(200μg/mL)联合siCCAT1应用时对其关键蛋白下调作用更为显著(P<0.01)。结论DP联合siCCAT1显著抑制MDA-MB-231细胞增殖、迁移、侵袭和EMT进程,其机制可能与下调MDA-MB-231细胞中CCAT1表达进而抑制Akt/GSK-3β/Cyclin D1/CDK6信号通路有关。

氧化应激通过激活Cdk5抑制FOXO1的神经元损伤及其机制

目的探究氧化应激通过激活细胞周期蛋白依赖性激酶5(cyclin-dependent kinase 5, Cdk5)抑制叉头框转录因子O亚家族蛋白1(forkhead box O1, FOXO1)的神经元损伤的具体机制。方法在HEK细胞中,共同转染过表达P39/Cdk5和FOXO1-WT或者FOXO1-S249A突变体,利用特异性磷酸化抗体pS249-FOXO1能够特异识别FOXO1的Ser249位点磷酸化特点,通过Western blot检测Cdk5/p39对FOXO1的磷酸化。通过体外培养HEK细胞中过表达Cdk5、p39和FOXO1,免疫共沉淀探究Cdk5和FOXO1以及Cdk5和p39的相互作用。在原代神经元过表达不同的Cdk5激活因子(p25、p35、p39)以及Cdk5激酶复合物,使用双荧光素酶实验探究其不同组合对FOXO1转录活性的影响。用Cdk5抑制剂rocovitine干预,观察其对FOXO1出入的影响;同时通过核质分离的方法对比了Cdk5杂合小鼠和野生型大脑皮层组织的FOXO1核质定位。分别用H_2O_2、glutamate处理神经元,通过Western blot观察氧化应激对Cdk5的活性调节,同时用双荧光素酶实验探究其对FOXO1转录因子的影响;最后通过caspase-3染色观察H_2O_2、glutamate的不同时间梯度处理对神经元凋亡的影响。结果 Cdk5和p39能够直接与FOXO1相互作用,并磷酸化FOXO1的Ser249位点。激活Cdk5能够显著抑制FOXO1的转录活性,而用Cdk5抑制剂(roscovitine)能够显著提高FOXO1的转录活性并诱导FOXO1入核。与野生型对比,在Cdk5杂合子中,FOXO1蛋白在细胞核中定位显著提高。H_2O_2和glutamate处理诱导p35切割形成p25,同时抑制FOXO1的转录活性,而敲低Cdk5能够缓解H_2O_2和glutamate对FOXO1的转录活性的抑制。通过H_2O_2和glutamate处理的原代神经元,caspase3染色显著增加。结论 Cdk5/p39可以磷酸化FOXO1-ser249位点,并抑制FOXO1的转录活性;而氧化应激能够通过激活Cdk5,抑制FOXO1的转录活性,并诱导神经元凋亡。

曲古抑菌素A对卵巢癌细胞分化、增殖的影响及其机制

目的观察曲古抑菌素A(TSA)对卵巢癌细胞分化、增殖及细胞周期的影响,并探讨其机制。方法培养卵巢癌上皮细胞系HO8910,将细胞分为A、B、C、D组,分别加入0、100、200、400 nmol/L TSA。分别于培养24、48、72 h观察A、C组细胞形态变化;于培养24 h后采用Western blotting法检测四组细胞中的Y染色体上的性别决定区盒2(SOX-2)、八聚体结合转录因子4(OCT-4)和叉头样转录因子A2(FOXA-2)。分别采用MTT法及Ed U染色法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测不同周期细胞。采用Western blotting法检测各组细胞中的Cyclin D1和p21Cip1蛋白。结果 A组细胞多为类圆形或椭圆形,外表规整,成簇生长。C组细胞发生形态转变,细胞密度有所下降。与A组相比,B、C、D组细胞中SOX-2、OCT-4表达下调,FOXA-2表达升高(P均<0.05)。与A组相比,B、C、D组细胞增殖率降低,G_0/G_1期细胞比例增高,S期细胞比例减小,Cyclin D1蛋白表达下调,p21Cip1蛋白表达上调(P均<0.05)。结论 TSA可诱导卵巢癌HO8910细胞分化,抑制细胞增殖,其机制可能与调节细胞分化相关蛋白及细胞周期相关蛋白表达有关。

口腔鳞状细胞癌患者预后相关基因标志物的生物信息学分析

目的通过生物信息分析方法筛选口腔鳞状细胞癌与癌旁组织之间的差异表达基因,初步确定潜在生物标志物。方法从基因表达数据库(Gene Expression Omnibus,GEO)中下载口腔鳞状细胞癌相关芯片数据集GSE23558、GSE37991、GSE30784,利用GEO在线分析工具筛选差异表达基因,并对其进行基因本体、京都基因与基因组百科全书分析。利用STRING在线数据库,构建差异基因蛋白互作(protein⁃protein interaction,PPI)网络,并通过Cytoscape筛选关键基因。进而使用Kaplan Meier在线软件对差异表达基因进行预后分析,并使用GEPIA(http://gepia.cancer⁃pku.cn/)验证其表达情况。结果共筛选出212个差异表达基因,进一步分析发现16个核心基因,其中与预后相关的核心基因包括:极光激酶A(aurora kinase A,AURKA)、极光激酶B(aurora kinase B,AURKB)、细胞凋亡抑制因子5(baculoviral IAP repeat containing 5,BIRC5)、细胞分裂周期蛋白6(cell division cycle 6,CDC6)、E2F转录因子7(E2F transcription factor 7,E2F7)、泛素样含PHD和环指域蛋白1(ubiquitin⁃like with PHD and ring finger domains 1,UHRF1),这些关键基因与癌旁组织相比在口腔鳞状细胞癌组织呈高表达并且患者生存时间均较短,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论AURKA、AURKB、BIRC5、CDC6、E2F7和UHRF1可作为口腔鳞状细胞癌患者预后潜在的标志物。

TTF-1、CDK4、EGFR在非小细胞肺癌组织中的表达及与临床病理特征的相关分析

目的 探讨甲状腺转录因子1(TTF-1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、表皮生长因子受体(EGFR)在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达,并分析其与临床病理特征的关系。方法 选取2021年1月—2022年10月在驻马店市中心医院诊治的NSCLC患者115例,检测癌组织和癌旁组织TTF-1、CDK4、EGFR表达,并分析癌组织TTF-1、CDK4、EGFR表达与年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤位置、肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移、吸烟等临床病理特征的关系。结果 NSCLC患者癌组织TTF-1阳性率(58.26%vs 10.43%)、CDK4阳性率(92.17%vs 84.35%)、EGFR阳性率(64.35%vs 6.09%)明显高于癌旁组织(P<0.05)。NSCLC患者癌组织TTF-1阳性表达与年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤位置、吸烟无关(P>0.05),与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05);NSCLC患者癌组织EGFR阳性表达与年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤位置、吸烟无关(P>0.05),与肿瘤分期、分化程度、淋巴结转移有关(P<0.05);NSCLC患者癌组织CDK4阳性表达与年龄、性别、肿瘤直径、肿瘤位置、淋巴结转移、吸烟无关(P>0.05),与肿瘤分期、分化程度有关(P<0.05)。结论 TTF-1、CDK4、EGFR在NSCLC患者癌组织呈高表达,TTF-1、EGFR与NSCLC的发生、发展以及转移有关,CDK4与NSCLC的发生以及发展有关。

全反式视黄酸阻断苯并(a)芘致成纤维细胞周期改变的通路

目的观察全反式视黄酸(ATRA)逆转苯并(a)芘诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)细胞周期紊乱过程中细胞周期素D1(cyclinD1)、细胞周期素依赖性激酶K4(CDK4)、转录因子E2F1和E2F4的作用。方法用0.1μmol/LATRA预处理细胞后,再用2μmol/L苯并(a)芘作用细胞,用Westernblotting方法测定其蛋白表达水平;建立稳定转染了反义cyclinD1质粒和反义CDK4质粒的细胞系,应用反义技术证明上下游关系;用流式细胞技术测定细胞周期。结果2μmol/L苯并(a)芘作用于HELF24h后,cyclinD1、E2F1蛋白表达水平明显增高,CDK4和E2F4蛋白表达水平无明显变化;用0.1μmol/LATRA预处理24h后,cyclinD1、E2F1蛋白表达水平明显下降;与相同作用的对照组相比,苯并(a)芘刺激反义cyclinD1或反义CDK4细胞后E2F1表达增加的幅度明显降低;与相同作用的对照组相比ATRA预处理的反义cyclinD1或反义CDK4细胞中,苯并(a)芘诱导的E2F1过表达水平降低的幅度明显降低;流式细胞术测定结果显示,苯并(a)芘诱导细胞从G1期进入S期,ATRA通过聚积G1期细胞而阻滞苯并(a)芘诱导的细胞周期进程。结论ATRA通过cyclinD1/E2F1途径阻断苯并(a)芘诱导的HELF的细胞周期改变。

CDT1在肝细胞癌中的表达及其预后预测价值

目的探讨肝细胞癌(肝癌)患者中细胞分裂周期蛋白10依赖性转录因子1(CDT1)的表达及其预后预测价值。方法回顾性分析2014年1月至2016年1月在中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院行肝切除术的237例肝癌患者临床资料(肝癌组),同时选取200例健康志愿者作为对照组。入组人员均签署知情同意书,符合医学伦理学规定。其中肝癌组男149例,女88例;年龄31~82岁,中位年龄51岁。对照组男110例,女90例;年龄30~70岁,中位年龄48岁。采用Western blot检测肝癌和癌旁组织中CDT1蛋白表达情况,荧光原位杂交技术检测肝癌组织中CDT1 mRNA表达,RT-PCR检测血清CDT1 mRNA表达。根据癌组织中CDT1 mRNA相对表达量平均值,将肝癌组分为CDT1高表达组和CDT1低表达组。癌组织CDT1 mRNA表达与HCC患者术前临床病理参数的关系分析采用t检验或单因素方差分析。血清CDT1 mRNA表达与血清AFP的关系分析采用线性相关分析。生存分析采用Kaplan-Meier法和Log-rank检验。肝癌患者术后肿瘤复发转移影响因素分析采用Cox多因素分析。结果肝癌组癌组织CDT1 mRNA平均相对表达量为2.20±0.18,明显高于癌旁组织的1.86±0.24(t=16.705,P<0.05)。肝癌组血清CDT1 mRNA相对表达量为1.62±0.18,明显高于对照组的1.34±0.15(t=17.398,P<0.05)。肝癌组癌组织CDT1蛋白表达明显强于癌旁组织。癌组织CDT1 mRNA相对表达量与肝癌患者术前肿瘤直径、肿瘤包膜、术前HBsAg、微血管侵犯、肿瘤分化相关(t=-3.107,-8.352,-2.221,-2.981,3.745;P<0.05)。肝癌术前和再复发时血清CDT1 mRNA相对表达量均与血清AFP成正相关(r=0.507,0.403;P<0.05)。CDT1高表达组和低表达组术后3年复发率分别为35.11%和24.53%,5年生存率分别为56.49%和73.58%,差异有统计学意义(χ^(2)=6.520,5.566;P<0.05)。Cox多因素分析显示,CDT1 mRNA相对表达量≥2.20是患者术后肿瘤复发转移的独立危险因素(HR=1.950,95%CI:1.217~3.124,P<0.05)。结论CDT1在肝癌患者中高表达,且与肝癌复发、进展相关,CDT1高表达患者复发率较高,预后较差。

辣椒碱对乳腺癌MCF-7细胞增殖及p21和FBI-1表达的影响

目的：观察辣椒碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及可能的分子机制。方法：设立辣椒碱组以及空白组,采用细胞计数试剂盒-8法（CCK-8）检测辣椒碱（50,100,150,200,250,300μmol·L-1）处理MCF-7细胞24,48,72 h后的细胞活性;克隆形成实验检测辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）处理MCF-7细胞18 h再更换为完全培养基继续培养14 d后的克隆形成能力;实时荧光定量PCR（Real-time PCR）检测辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）处理MCF-7细胞24 h后细胞中细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21（p21）和人类免疫缺陷病毒短转录诱导物连接因子-1（FBI-1）mRNA表达水平;蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）处理MCF-7细胞24 h后细胞中p21和FBI-1蛋白的表达水平。结果：与空白组比较,辣椒碱（50,100,150,200,250,300μmol·L-1）在体外对MCF-7细胞活性具有明显的抑制作用（P〈0.05,P〈0.01）,并且这种抑制作用呈浓度和时间依赖效应;与空白组比较,辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）均能显著抑制MCF-7细胞的克隆形成能力（P〈0.01）;与空白组比较,辣椒碱（100,150,200μmol·L-1）能显著上调MCF-7细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平（P〈0.01）,下调FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平（P〈0.01）。结论：辣椒碱干预在体外对乳腺癌MCF-7细胞增殖具有抑制作用,潜在机制可能与其上调细胞中p21 mRNA和蛋白的表达水平,下调细胞中FBI-1 mRNA和蛋白的表达水平有关。

子宫内膜异位症患者异位病灶组织FoxM、CDK表达观察

目的观察子宫内膜异位症(EMs)患者异位病灶组织叉头框转录因子M1(FoxM1)、细胞周期蛋白依赖性激酶6(CDK6)表达变化,并探讨其临床意义。方法105例EMs患者为观察组,其中临床分期为Ⅰ期11例、Ⅱ期27例、Ⅲ期58例、Ⅳ期9例;卵巢型86例,深部浸润型19例。同期行子宫切除手术的子宫肌瘤患者为对照组。术中收集观察组异位病灶组织及对照组正常子宫内膜组织,采用免疫组织化学染色法检测组织中FoxM1、CDK6;分析EMs异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达与患者病理分期、临床分型的关系;采用Spearman分析EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达的相关性。结果与对照组正常子宫内膜组织相比,观察组异位病灶组织中FoxM1、CDK6阳性表达率高(P均<0.05)。不同分期EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6阳性表达率相比,P均<0.05;不同分型EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6阳性表达率相比,P均<0.05。EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达呈正相关(r=0.512,P<0.05)。结论EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6阳性表达率高,且均与患者病理分型、临床分期有关。EMs患者异位病灶组织中FoxM1、CDK6表达呈正相关关系。