阿霉素诱导肝细胞黏附分子基因下调肾癌细胞细胞分裂周期基因2的表达

目的:研究阿霉素联合hepaCAM基因对肾癌细胞786-0生物学的影响。方法:阿霉素处理后,用腺病毒向肾癌786-0导入肝细胞黏附分子(Hepatocyte cell adhesion molecule,hepaCAM),以噻唑蓝(Methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)测抑制率,流式细胞术(Flow cytometer,FCM)测细胞周期,实时荧光定量聚合酶链反应(Real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)、Western blot检测hepaCAM和细胞分裂周期基因2(Cell division cycle 2,cdc2)的mRNA及蛋白水平。结果:MTT显示:与对照组相比,实验组抑制率显著升高(P<0.01)。FCM证实:实验组出现明显G2/M期阻滞。RT-qPCR及Western blot检测到实验组cdc2 mRNA及蛋白水平显著下调(P<0.01)。结论:阿霉素处理后,导入hepaCAM基因,可引起细胞抑制率显著升高及G2/M期阻滞,这可能与阿霉素诱导hepaCAM下调cdc2的表达有关。

慢病毒介导的细胞分裂周期相关蛋白2基因沉默对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨应用慢病毒介导小干扰核糖核酸(siRNA)沉默细胞分裂周期相关蛋白2(CDCA2)基因对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(q RT-PCR)与蛋白质印迹法(Western blotting)法分别检测人正常乳腺上皮细胞株MCF-10A与乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、BT549中CDCA2 mRNA及蛋白表达。构建慢病毒表达载体转染乳腺癌MCF-7细胞,实验分为对照组、Lv-NC组、Lv-siRNA-CDCA2组。采用噻唑蓝(MTT)实验及克隆形成实验检测沉默CDCA2表达对细胞增殖能力的影响;采用流式细胞仪检测沉默CDCA2表达对细胞凋亡能力的影响。Western blotting法检测细胞周期素D1(Cyclin D1)、CDK4、P21、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X(Bax)蛋白表达。采用裸鼠移植瘤实验观察LvsiRNA-CDCA2对移植瘤体积及体质量的影响。结果乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、BT549中CDCA2 mRNA[(2.18±0.13)、(1.56±0.09)、(1.83±0.10)比(1.02±0.06)]及蛋白表达水平[(1.13±0.15)、(0.56±0.08)、(0.79±0.11)比(0.23±0.04)]与MCF-10A相比显著升高(P<0.05),乳腺癌MCF-7细胞中CDCA2的表达水平升高最为显著;与Lv-NC组相比,Lv-siRNA-CDCA2组MCF-7细胞增殖活性与克隆形成率显著降低(P<0.05),而细胞凋亡率显著升高(P<0.05),可促进P21、Bax表达(P<0.05),而抑制Cyclin D1、CDK4、Bcl-2表达(P<0.05);与Lv-NC组比较,Lv-siRNA-CDCA2组移植瘤体积和体质量均显著降低(P<0.05)。结论慢病毒介导的CDCA2基因沉默可乳腺癌细胞细胞增殖,诱导细胞凋亡,并抑制肿瘤生长。

Taurolidine联合X射线对小鼠恶性黑色素瘤细胞周期进程的影响

目的:观察taurolidine联合X射线照射对小鼠恶性黑色素瘤(B16-4A5和B16-F10)细胞周期进程的影响,探讨其诱导肿瘤细胞凋亡的发生机制。方法:选择B16-4A5和B16-F10细胞系按给药浓度随机分为4组,taurolidine剂量分别为0、25、50和100μmol.L-1,同时进行1、2和4Gy X射线照射,采用流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期,Western blotting分析cyclin B、cdc2和caspase-3的表达。结果:与25μmol.L-1taurolidine组比较,50和100μmol.L-1 taurolidine组诱导B16-4A5和B16-F10细胞发生G0/G1期阻滞,细胞数分别升高54.9%、73.7%和36.8%、55.5%(P<0.05);50μmol.L-1 taurolidine联合2和4Gy X射线照射组,细胞G2/M期阻滞消除,细胞数分别降低52.1%、44.2%和59.3%、52.7%(P<0.05)。与对照组、单纯taurolidine组及单纯照射组比较,联合4Gy X射线照射组cyclin B和cdc2的表达降低,caspase-3的表达升高(P<0.05)。结论:taurolidine联合X射线照射可去除G2/M期阻滞,可选择地抑制肿瘤细胞cyclin B和cdc2的表达、增强caspase-3的表达,共同诱导细胞凋亡。

基因Cdca2敲除对小鼠精子发生和生育力无明显影响

目的探究睾丸高表达细胞分裂周期相关蛋白2基因(Cdca2)在小鼠精子发生和生育力中的生理功能。方法通过Q-PCR和Western blot检测Cdca2在小鼠不同组织部位的表达情况;利用CRISPR/Cas9基因编辑技术和Cre-loxP介导的重组系统构建Cdca2组织特异性敲除的小鼠品系;通过苏木精-伊红(HE)染色和形态学分析了解小鼠CDCA2缺失对精子发生的各个阶段生精细胞形态的影响;通过精子全自动检测分析系统检测小鼠CDCA2缺失对精子活率及运动参数的影响;通过生育力测试实验检测CDCA2缺失对雄性小鼠生育能力的影响。结果Cdca2是一个睾丸高表达的基因;利用CRISPR/Cas9技术和生殖系统特异性Cre的工具鼠,成功获得了Cdca2生殖细胞特异性敲除的小鼠;小鼠CDCA2缺失对精子发生中各阶段生精细胞、精子运动参数及雄性生育能力的影响改变无统计学意义。结论基因Cdca2对于小鼠精子发生和雄性生育力的维持可能是非必需的。

食管鳞癌中CDC2、MCM2的表达及其临床意义

目的:检测细胞分裂周期2(CDC2)、微小染色体维持蛋白2(MCM2)在食管鳞癌组织中的表达情况,探讨其与食管鳞癌临床病理参数的关系以及在食管鳞癌发生、发展中的作用。方法:应用免疫组化Elivision法检测90例食管鳞癌患者癌组织、28例食管鳞癌患者癌旁正常上皮组织及16例重度不典型增生患者上皮组织中CDC2、MCM2的表达情况。结果:CDC2、MCM2在食管鳞癌组织中的表达明显高于食管癌旁正常上皮、重度不典型增生组织(P<0.01);食管鳞癌组织中CDC2的表达程度与其临床分期有关(P<0.05),MCM2的表达与其分化程度和淋巴结转移均有一定关系(P<0.05);食管鳞癌组织中CDC2和MCM2表达呈正相关关系(P<0.05)。结论:CDC2、MCM2在细胞周期调控中起决定性作用,两者相互协调共同促进了食管鳞癌的发生、发展,可作为临床早期诊断的重要指标。

CDC2表达与乳腺癌临床病理参数和C-erbB-2的关系

目的:探讨细胞分裂周期2(cell division cycle 2,CDC2)在乳腺癌组织中的表达及其与乳腺癌临床病理参数和人类表皮生长因子受体2(C-erbB-2)表达的关系。方法:应用免疫组织化学(EliVision法)检测60例乳腺癌组织中CDC2及C-erbB-2的水平。结果:CDC2在乳腺癌中强阳性表达率为61.7%,且其表达与组织学分级有一定关系(P<0.01),CDC2和C-erbB-2两者呈正相关关系(P<0.01)。结论:CDC2在乳腺癌中表达上调,并与乳腺癌的分化程度有关;CDC2有促进细胞增殖的功能。联合检测CDC2和C-erbB-2在乳腺癌中的表达,有望成为估计乳腺癌生物学行为的参考指标。

细胞分裂周期相关蛋白2在恶性肿瘤中的研究进展

细胞分裂周期相关(CDCA)基因家族是细胞增殖过程中重要的调节因子,其中细胞分裂周期相关蛋白2(CDCA2)是蛋白磷酸酶1γ(PP1γ)的靶向亚单位,参与有丝分裂中染色质重塑、细胞周期中的DNA损伤反应以及核包膜的形成。CDCA2在多种癌症中表达上调,并与恶性肿瘤的侵袭、转移及凋亡密切相关。本文主要就近年来CDCA2基因在恶性肿瘤中的作用及机制做简要综述。

人CDC2基因的克隆和原核表达及鉴定

目的:从人肝癌组织中克隆出人细胞分裂周期基因2(CDC2),并在大肠杆菌中表达CDC2蛋白。方法:从人肝癌组织中提取RNA,采用RT-PCR法扩增CDC2cDNA,用DNA凝胶回收试剂盒纯化并回收RT-PCR产物,将RT-PCR产物插入pET28a(+)载体NdeⅠ和XhoⅠ两酶切位点之间,转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导表达人CDC2蛋白。结果:RT-PCR扩增出约894bp的DNA片段,与GenBank中的CDC2基因序列完全一致。经限制性内切图谱和测序鉴定,成功构建了pET28a(+)/CDC2原核表达载体。SDS-PAGE分析结果显示人CDC2蛋白在大肠杆菌中得已表达。结论:从人肝癌组织中成功地扩增出CDC2基因,并在大肠杆菌中表达。

肌醇多磷酸5磷酸酶PIPP在小鼠受精卵内对细胞周期蛋白Cdc2的影响

目的研究脯氨酸丰富的肌醇多磷酸5磷酸酶(PIPP)在小鼠1-细胞期胚胎中的定位以及它对Cdc2在Tyr15位点磷酸化的调节作用。方法提取质粒、酶切鉴定并转染PEFBOS PIPP质粒以及空载体PEFBOS vector到小鼠受精卵,用免疫荧光染色检测PIPP的定位,Western blot检测PIPP对Cdc2在Tyr15位点磷酸化的影响。结果PIPP的定位在小鼠受精卵有丝分裂过程中不断变化,并且PIPP在小鼠受精卵中的过度表达增加了Cdc2在Tyr15位点的磷酸化。结论 PIPP存在于小鼠受精卵中并通过调节Cdc2的磷酸化参与小鼠受精卵的有丝分裂过程。

携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒对C型尼曼-皮克病小鼠神经元细胞骨架损伤的保护作用

目的评估经小脑注射携带cdc2-siRNA的重组腺相关病毒(rAAV)对C型尼曼-皮克病(NPC)小鼠神经元细胞骨架损伤是否具有保护作用。方法将携带cdc2-siRNA重组腺相关病毒(rAAV)注射入2周龄npc-/-小鼠的小脑,采用免疫组织化学及免疫印迹方法观察该病毒对npc-/-小鼠神经元细胞骨架损伤的保护作用。结果(1)携带cdc2-siRNA的rAAV明显减少npc-/-小鼠轴突球状体的数量;(2)携带cdc2-siRNA的rAAV有效抑制磷酸化的神经丝(由SMI31识别)及磷酸化的Tau蛋白(由PHF-1识别)的表达。结论小脑注射携带cdc2-siRNA的rAAV对npc-/-小鼠神经元细胞骨架损害具有保护作用。

宫颈癌患者癌组织Cdc2、Cdc25B表达与HR-HPV感染及病毒载量的关系

目的探讨宫颈癌(CC)患者癌组织细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)、细胞分裂周期蛋白25B(Cdc25B)表达与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)感染及病毒载量的关系。方法选取2019年1月-2022年6月锦州医科大学附属第一医院诊治的68例CC患者为CC组、54例宫颈上皮内瘤变(CIN)患者为CIN组、30例慢性宫颈炎(CCS)患者为CCS组,采用免疫组化法检测宫颈组织中Cdc2、Cdc25B表达情况,采用第二代基因杂交捕获法检测HR-HPV DNA载量,分析Cdc2、Cdc25B表达与CC患者临床特征的关系,采用Spearman相关系数分析Cdc2、Cdc25B表达与HR-HPV DNA载量的关系。结果CC组Cdc2、Cdc25B阳性表达率、HR-HPV感染率、HR-HPV DNA载量均高于CIN组及CCS组,CIN组高于CCS组(P<0.05);CINⅢ患者及CINⅡ患者Cdc2、Cdc25B阳性表达率均高于CINⅠ患者(P<0.05);CC患者癌组织中Cdc2、Cdc25B表达情况与FIGO分期、分化程度、淋巴结转移情况及HR-HPV感染有关(P<0.05);Spearman分析显示,CC患者癌组织中Cdc2、Cdc25B表达与HR-HPV DNA载量成正相关(P<0.05)。结论HR-HPV感染率、Cdc2及Cdc25B阳性表达率随宫颈病变程度增加而升高,Cdc2及Cdc25B阳性表达与CC患者病理特征有关,并与HR-HPV DNA载量呈正相关。

小脑微量注射cdc2-siRNA对C型尼曼-匹克病小鼠共济运动的影响

目的观察抑制cdc2基因的异常激活对C型尼曼-匹克病（Niemann-PickdiseasetypeC，NPC）小鼠共济运动的影响。方法包装携带ode2-siRNA的重组腺相关病毒（rAAV），将该病毒注射至2周龄npc-/-小鼠的小脑中，8周龄时采用足印实验、垂直屏实验检查小鼠的共济运动，并用HE染色及蛋白免疫印迹法分别检查小脑浦肯野细胞数量及微管相关蛋白Tau的磷酸化（由PHF-1抗体识别）情况。结果（1）足印实验显示cdc2-siRNAnpc组的步长[（4．92±0．31）cm]比空载体npe。组[（4．05±0．19）em]显著增加（P〈O．05）。（2）垂直屏实验显示cdc2-siRNAnpc。一组小鼠转头向r、爬至网屏上边缘的时间[（26．01±1．82）s、（50．93±1．98）s]分别比空载体npc组[（31．96±3．47）s、（56．89±2．97）S]明显缩短（均P〈0．05）。（3）cde2-siRNAnpe。一组小鼠小脑浦肯野细胞数目[（11．0±2．5）个]较空载体npc组[（5．1±2．2）个]显著增加（P〈0．05）。（4）cdc2-siRNAnpc。组小鼠cdc2及磷酸化Tau蛋白免疫反应条带相对灰度值（1．42±0．22、0．95±0．31）分别较空载体npc-/-组（2．11±0．29、2．61±0．62）明显降低（均P〈0．05）。结论抑制cdc2基因的异常激活可通过挽救浦肯野细胞的脱失和减轻小脑Tau蛋白的过度磷酸化以改善npe-/-小鼠的共济运动。

HPV感染对子宫内膜癌患者癌组织中P53、Cdc2蛋白表达水平的影响

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)感染对子宫内膜癌(EC)患者癌组织中P53蛋白、细胞分裂周期蛋白2(Cdc2)表达水平的影响。方法收集2018年1月-2020年7月南阳市中心医院收治的105例EC患者为研究组;另选取同期45例行子宫肌瘤手术患者为对照组。收集两组患者临床资料及HPV感染情况,免疫组化法检测研究组患者EC癌组织及对照组患者正常增生期子宫内膜组织中P53、Cdc2蛋白表达水平,分析HPV感染对EC患者癌组织中P53、Cdc2蛋白表达水平的影响。结果研究组HPV感染率、P53蛋白阳性表达率、Cdc2蛋白阳性表达率分别为29.52%、40.95%、36.19%,均高于对照组(P<0.05)。在不同年龄、病理类型、淋巴结转移情况及分化程度的EC患者中,HPV感染率比较差异均无统计学意义;但当患者国际妇产科协会(FIGO)肿瘤分期较高时,HPV感染率升高(P<0.05)。P53蛋白在不同年龄、病理类型及分化程度的EC患者中的阳性表达率差异均无统计学意义,但FIGO分期较高、出现淋巴结转移时,P53蛋白阳性表达率升高(P<0.05)。Cdc2蛋白在不同年龄、病理类型、淋巴结转移情况及分化程度的EC患者中的阳性表达率差异均无统计学意义,但FIGO分期较高时,Cdc2蛋白阳性表达率升高(P<0.05)。HPV感染的EC患者癌组织中P53、Cdc2蛋白的阳性表达率均高于HPV未感染组(P<0.05)。结论EC患者癌组织中存在着HPV感染情况,且HPV感染可能会造成癌组织中P53、Cdc2蛋白的阳性表达率升高,对EC的发生、发展过程有促进作用。