新型细胞分裂周期25磷酸酯酶B和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制剂三唑并噻二唑-均三嗪的合成

以苯亚氨基为桥,设计合成了18个含有三唑并噻二唑和均三嗪双杂环的新型分子(4a^4i和5a^5i),并利用红外光谱、核磁共振谱和高分辨质谱等技术手段对其进行了结构表征。将吗啉和四氢吡咯分别与三聚氯氰发生双取代反应合成三嗪衍生物(1A和1B),然后将1A和1B分别与对氨基苯甲酸反应,合成重要中间体(2A和2B)。通过熔融法将8种脂肪酸与二氨基硫脲缩合得1,2,4-三唑衍生物3a^3h,最后将2A和2B在三氯氧磷和四丁基溴化铵催化下分别与3a^3h反应得目标产物。为了进一步比较3-脂肪基和3-苯基对药效活性的影响,利用相同方法设计合成了目标产物4i和5i。评价了目标产物对细胞分裂周期25磷酸酯酶B(Cdc25B)和蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性。结果发现:所有目标分子对Cdc25B均表现出良好的抑制活性,半抑制浓度(IC_(50)值)在2.40~0.31 mg/L之间,目标分子4a^4f和5a^5i的IC_(50)值均低于阳性参照物Na_3VO_4[(1.25±0.14)mg/L],有望成为潜在的Cdc25B抑制剂;在PTP1B测试中,14个目标分子具有优良的抑制活性,IC_(50)值在0.98~0.37 mg/L之间,低于阳性参照物齐墩果酸[(1.19±0.27)mg/L],有望成为潜在的PTP1B抑制剂。

3,6-二取代三唑并噻二唑衍生物的合成及其对细胞分裂周期25B磷酸酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性评价

合成出了一系列含苯并咪唑/芳氧甲基骨架的3,6-二取代三唑并噻二唑衍生物3a^3l,其结构经傅里叶变换红外光谱仪(FT-IR)、核磁共振波谱仪(NMR)和元素分析得以确认。评价了它们对细胞分裂周期25B磷酸酶(Cdc25B)/蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)的抑制活性,讨论了构效关系。生物活性测试结果显示,化合物3a对Cdc25B和PTP1B的抑制活性最高,其半数抑制浓度(IC 50)值分别为(0.46±0.02)μg/mL和(1.77±0.40)μg/mL。所得研究结果为开发新型Cdc25B/PTP1B抑制剂提供了参考依据。

分裂相关增强子1、细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C在直肠癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨分裂相关增强子1(Hairy and enhancer of split related protein 1,HESR-1)、细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(Cell division cycle 25C,CDC25C)在直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法选择166例行根治性手术的直肠癌患者为研究对象,采用免疫组织化学法检测癌组织及癌旁组织中HESR-1和CDC25C的表达,收集患者临床病理参数并进行随访,分析HESR-1和CDC25C表达对直肠癌患者临床病理参数及预后的影响。结果肠癌组织中CDC25C、HESR-1的阳性率均高于癌旁组织(46.9%vs 12.6%,41.6%vs 7.6%),差异有统计学意义(P<0.05)。在癌组织中,CDC25C mRNA与HESR-1 mRNA的表达呈正相关(r=0.862,P=0.003)。癌组织CDC25C及HESR-1表达阳性患者的肿瘤直径和淋巴结转移率均高于表达阴性者(P<0.05)。Cox多因素分析结果显示,肿瘤直径、淋巴结转移、CDC25C阳性及HESR-1阳性是影响直肠癌患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论HESR-1和CDC25C在直肠癌组织中表达升高,且与患者预后密切相关。

细胞分裂周期25磷酸酯酶B抑制剂双1,2,4-三唑多杂环分子的设计合成

以1,2,4-三唑为核心结构的杂环分子,因其优良而广泛的生物活性,已成为药物筛选中重要的研究对象。本文为了研究其构效关系,针对1,2,4-三唑结构中3个位点分别进行不同的结构修饰,并将其与哌嗪和均三嗪分别偶联,首次合成了两类共28个双三唑多杂环目标分子[TM1~TM3(a^f)]和[TM4~TM5(a^e)]。为了比较三唑中4-氨基对生物活性的影响,还与化合物6-吗啉-2,4-(5-硫醚基-4-氨基-3-正戊基1,2,4-三唑)-1,3,5-三嗪(C)和6-吡咯-2,4-(5-巯基-4-氨基-3-正戊基-1,2,4-三唑)-1,3,5-三嗪(D)进行了比较。通过傅里叶变换红外光谱仪(IR)、核磁共振谱(~1H NMR)和高分辨率质谱仪(HRMS)等技术手段对28个目标分子进行了结构表征,研究了其对细胞分裂周期25磷酸酯酶B(Cdc25B)的抑制活性。结果表明,21个目标分子表现出优良的抑制活性,9个目标分子的抑制活性优于阳性参照物,有望成为抗肿瘤药物先导物。

核转运蛋白α2和细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C在肝细胞癌组织中的表达及相关性

目的研究核转运蛋白α2(KPNA2)和细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(CDC25C)在肝细胞癌组织中的表达及相关性。方法回顾性收集山西省人民医院2012年9月至2015年10月手术切除的肝细胞癌石蜡包埋组织标本100例,另选取20例癌旁组织石蜡包埋标本。采用免疫组织化学染色检测肝细胞癌和癌旁组织中KPNA2和CDC25C的表达情况,采用Pearson相关性方法分析KPNA2和CDC25C表达的相关性,采用Kaplan-Meier法绘制生存曲线。结果肝细胞癌组织中KPNA2、CDC25C高表达率均高于癌旁组织(均P<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,KPNA2与CDC25C的表达呈正相关(r=0.317,P=0.002)。将患者分为KPNA2高表达组(53例)和低表达组(47例),CDC25C高表达组(65例)和低表达组(35例)。KPNA2高表达组和CDC25C高表达组甲胎蛋白>400μg/L、肿瘤直径>5 cm比例均高于相应的低表达组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。Kaplan-Meier生存曲线分析结果显示,KPNA2高表达组和CDC25C高表达组总生存率均低于相应的低表达组(Log-rankχ^(2)=3.887、10.339,P=0.049、0.001)。结论肝细胞癌组织中KPNA2、CDC25C表达增加,且二者表达呈正相关。KPNA2、CDC25C高表达患者总生存率较低。

带绿色荧光蛋白标签的人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白的真核表达及其生物学功能研究

目的:构建带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标签的人细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cdc25c)基因的真核表达载体pEGFP-cdc25c,并检测其在人胚肾293T细胞中的表达定位情况及生物学功能。方法:采用PCR技术从实验室已有质粒中扩增人cdc25c基因,并将其克隆到pEGFP-C1载体中;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,Western印迹检测转染细胞的表达情况,荧光显微镜观察cdc25c蛋白在细胞中的定位,并利用cdc2 Tyr15位特异性抗体验证EGFP-cdc25c作为磷酸酯酶的生物学功能。结果:双酶切和测序鉴定表明,pEGFP-cdc25c真核表达质粒构建成功;转染293T细胞后获得表达,在荧光显微镜下,表达阳性的细胞呈绿色,并定位于细胞质;Western印迹结果表明,EGFP-cdc25c能增加cdc2 Tyr15位的磷酸化水平,起到拮抗内源性cdc25c的功能。结论:构建了带EGFP标签的人cdc25c基因真核表达载体,该载体能够在哺乳动物细胞293T中表达,表达产物定位于细胞质;EGFP-cdc25c能够发挥显性负性作用,为深入研究cdc25c的生物学功能奠定了重要基础。

细胞分裂周期蛋白14B在肿瘤中的研究进展

细胞分裂周期蛋白14B(cell division cycle 14B,CDC14B)作为一类高度保守的双特异性磷酸酶,在真核细胞中广泛表达。研究表明,CDC14B广泛参与有丝分裂、胞质分裂、减数分裂、DNA损伤修复、纤毛形成等生理、病理过程。近年来研究发现,CDC14B过高或过低表达都会影响细胞的正常分裂,甚至导致癌变或瘤变,与肿瘤的发生发展密切相关。该文旨在对CDC14B蛋白的结构、功能以及与肿瘤的关系作一综述。

细胞分裂周期蛋白14与细胞分裂周期蛋白25相互作用研究进展

细胞分裂周期蛋白14(CDC14)与细胞分裂周期蛋白25(CDC25)是真核细胞生物中广泛表达的一类特殊的高度保守的双重特异性磷酸酶,在真核细胞中发挥稳定生物学作用。CDC14广泛参与有丝分裂、胞质分裂、减数分裂、DNA损伤修复等生理、病理过程,CDC25的表达与细胞增殖和发育有关。真核生物可通过CDC14/CDC25途径调控G 2/M期转换从而控制细胞周期进程。目前我国关于CDC14的研究甚少,本文旨在对CDC14的结构、功能以及与CDC25之间的相互作用作一综述。

细胞分裂周期蛋白14B功能研究进展

细胞分裂周期蛋白14B(CDC14B)是真核细胞中广泛表达的一类特殊的高度保守的丝/苏氨酸双特异性磷酸酶,是CDC14家族的一个亚型。从酵母到人类的各种研究表明,CDC14B的功能并不保守,其参与细胞内多种重要的生命活动,包括细胞的生理、病理进程,具体涉及有丝分裂、胞质分裂、减数分裂、DNA损伤修复、中心体复制、纤毛形成等。CDC14B的功能是目前研究的热点,基于此,本文就CDC14B的生物学作用进行综述。

弥漫大B细胞淋巴瘤中细胞分裂周期蛋白6的表达及其临床意义

目的探讨细胞分裂周期蛋白6(CDC6)在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的表达及其预后意义。方法选择原发DLBCL患者60例为研究组,同期取20例淋巴结反应性增生组织的患者为对照组。采用免疫组化检测并比较两组CDC6蛋白表达水平,进而分析CDC6蛋白与DLBCL临床病理特征及预后的关系。结果研究组CDC6蛋白阳性率(56.67%)高于对照组(25.00%),差异有统计学意义(χ^(2)=6.02,P<0.05);在DLBCL组织中,非生发中心型B细胞样(non-GCB)亚型患者CDC6蛋白阳性率(71.05%)明显高于生发中心型B细胞样(GCB)亚型(31.82%),差异有统计学意义(χ^(2)=8.74,P<0.05);进一步分析预后结果显示,GCB亚型的总生存期(OS)和无进展生存时间(PFS)长于non-GCB亚型,差异均有统计学意义(χ^(2)分别=13.16、12.39,P均<0.05);联合利妥昔单抗方案化疗患者的OS和PFS均长于未联合利妥昔单抗方案化疗患者,差异均有统计学意义(χ^(2)分别=4.18、4.72,P均<0.05),CDC6蛋白阳性表达患者的OS和PFS短于CDC6蛋白阴性表达患者,差异均有统计学意义(χ^(2)分别=6.96、7.25,P均<0.05)。结论CDC6蛋白在DLBCL中的表达高于淋巴结反应性增生组织,CDC6蛋白在non-GCB亚型中的表达高于GCB亚型;CDC6蛋白阳性的DLBCL患者可能预后不良。

dbcAMP通过Cdc25B蛋白调控小鼠1-细胞期受精卵发育

为了研究PKA激活剂dbcAMP通过调控小鼠Cdc25B蛋白S149和S321位点磷酸化状态影响小鼠1-细胞期受精卵的发育,将质粒pBSK-Cdc25B-WT、pBSK-Cdc25B-S149A、pBSK-Cdc25B-S321A和pBSK-Cdc25B-S149A/S321A体外转录成mRNA;显微注射入S期受精卵中,在2 mmol/LdbcAMP的M16培养基中培养,观察其对受精卵发育、MPF活性及CDC2-pTyr15磷酸化状态的影响.结果显示,在有dbcAMP存在时,各组受精卵卵裂时间延迟,但Cdc25B-S/A-mRNAs注射组受精卵卵裂率明显高于Cdc25B-WT-mRNA注射组,MPF活性提前达到高峰;CDC2-pTyr15磷酸化状态和MPF活性变化相一致.因此,在小鼠1-细胞期受精卵有丝分裂过程中,PKA对小鼠Cdc25B蛋白S149位点与S321位点的磷酸化修饰是控制受精卵G2/M转换的重要方式.

CDC25B蛋白亚细胞定位调控小鼠1-细胞期受精卵发育

为探讨小鼠细胞分裂周期25B(CDC25B)蛋白149位丝氨酸磷酸化状态对小鼠1-细胞期受精卵中CDC25B的亚细胞定位和发育的影响,应用定制的CDC25B-pS149位的磷酸化和非磷酸化抗体检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞时期的磷酸化和非磷酸化状态;应用免疫荧光观察各期受精卵中CDC25B蛋白的定位情况;将质粒pEGFP-CDC25B-WT、pEGFP-CDC25B-S149A和pEGFP-CDC25B-S149D融合质粒及空载体质粒显微注射入G1期受精卵中,观察不同显微注射组小鼠1-细胞期受精卵中外源性CDC25B蛋白亚细胞定位.结果显示,CDC25B-S149位丝氨酸在G1和S期被磷酸化,在G2和M期去磷酸化.1-细胞期受精卵从G2向M期的转换过程中,发生了CDC25B向细胞核区的移位,到2-细胞初期,部分CDC25B蛋白又从细胞核回到细胞浆.实验结果提示,小鼠1-细胞期受精卵G2/M期转换过程中,CDC25B的S149位点磷酸化修饰可能是对CDC25B细胞内定位及其活性的精确调节方式.

Cdc25C和CyclinB1在细胞周期调控及肿瘤发生发展中的作用

细胞周期是指能持续分裂的真核细胞从一次有丝分裂结束后生长,再到下一次分裂结束的循环过程,包括分裂间期和分裂期2个阶段。细胞分裂间期包括DNA合成前期（G1期）、DNA合成期（S期）、DNA合成后期（G2期）3个时期,细胞分裂期被称为M期。细胞在G1期进行必需的生长物质准备,在S期进行DNA的合成与复制,在G2/M期检查点对遗传物质DNA进行必要的检查和修复确保其准确性,

宫颈鳞癌组织中miR-590-3P、FoxM1及Cdc25B细胞核内蛋白水平与高危型HPV感染的相关性研究

目的:研究宫颈鳞癌组织中微小RNA-590-3P(miR-590-3P)、叉头盆蛋白质M1(FoxM1)及细胞分裂周期因子25B(Cdc25B)细胞核内蛋白水平与高危型人乳头状瘤病毒(HPV)感染的相关性。方法:将2014年2月—2019年12月医院通过宫颈活检、锥切以及子宫切除获取的宫颈组织标本300份纳入研究。将其分为正常组织59例,宫颈上皮内瘤变(CIN)1组织62例,CIN2/3组织101例,宫颈鳞癌组织78例。采用实时荧光定量PCR检测不同组织中的miR-590-3P表达水平,以免疫组织化学法检测FoxM1、Cdc25B蛋白表达情况,并进行23种基因型HPV DNA的检测。比较不同宫颈组织中的miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白表达情况,高危型HPV感染情况,并以Spearman相关性分析明确宫颈鳞癌组织中的miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白表达情况与高危型HPV感染的关系。采用受试者工作特征(ROC)曲线明确miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白诊断CIN2+的效能。结果:CIN2/3组织以及宫颈鳞癌组织中的miR-590-3P表达水平均高于正常组织、CIN1组织,且CIN1组织中的miR-590-3P表达水平均高于正常组织(F=46.873,P=0.000);CIN2/3组织以及宫颈鳞癌组织中的FoxM1蛋白阳性率及Cdc25B蛋白阳性率均高于正常组织及CIN1组织,且CIN1组织中的FoxM1、Cdc25B蛋白阳性率均高于正常组织(χ^(2)=47.293、51.041,P=0.000、0.000)。CIN2/3组织以及宫颈鳞癌组织中的高危型HPV感染率明显高于正常组织、CIN1组织,且CIN1组织中的高危型HPV感染率明显高于正常组织(χ^(2)=67.293,P=0.000)。经Spearman相关性分析可得:宫颈鳞癌组织中miR-590-3、FoxM1、Cdc25B蛋白表达率均和高危型HPV感染呈正相关。经ROC曲线分析发现:miR-590-3P以及FoxM1、Cdc25B蛋白联合检测诊断CIN2+的曲线下面积、灵敏度、特异度分别为0.884、0.90、0.88,均高于上述三项指标单独检测。结论:宫颈鳞癌组织中miR-590-3P、FoxM1及Cdc25B细胞核内蛋白水平与高危型HPV感染密切相关,有望成为早期诊断CIN2+的潜在生物学指标,值得临床重点关注。

Rock2对细胞周期检查点Cdc25A的调节作用

目的:探讨肝癌细胞中Rho相关含卷曲螺旋蛋白激酶2(Rock2)对细胞周期检查点细胞分裂周期蛋白25A(Cdc25A)的调节作用。方法:Western blotting检测51对肝癌及癌旁组织中Rock2与Cdc25A的蛋白表达情况。构建并筛选shRock2干扰质粒,稳定转染到人肝细胞癌Huh-7和HepG2细胞中,Western blotting检测Cdc25A蛋白表达变化;针对Rock2干扰序列,利用PCR定点突变技术进行碱基突变,构建Rock2突变质粒从而"恢复"Rock2表达,分析Cdc25A蛋白表达变化并用MTT法检测肝癌细胞增殖的改变。Western blotting检测Rock2稳定低表达的肝癌细胞中检查点激酶1(Chk1)和检查点激酶2(Chk2)蛋白的变化,免疫共沉淀及免疫荧光分析Rock2与Cdc25A的相互作用。结果:Rock2与Cdc25A蛋白在肝癌组织中较癌旁组织呈现高表达,而且两者呈正相关。肝癌细胞中稳定低表达Rock2后,Cdc25A蛋白表达明显下降;"恢复"Rock2表达后,Cdc25A蛋白表达增加而且肝癌细胞也出现增殖加快现象。Rock2低表达对Chk1和Chk2蛋白变化无明显影响。免疫共沉淀表明Rock2与Cdc25A直接相互作用,免疫荧光检测表明Rock2与Cdc25A存在共定位。结论:Rock2对细胞周期检查点Cdc25A起直接的正向调控作用,而且不依赖于Chk1/Chk2,可能为肝癌基因表达调控研究提供新的靶基因。

CDC25C蛋白和CLDN6蛋白在肝细胞癌中的表达及临床意义

目的:研究肝细胞癌(hepatic cell carcinoma,HCC)组织中细胞分裂周期蛋白25同源蛋白C(cell division cyclin 25 homolog C,CDC25C)与紧密连接蛋白Claudin-6(CLDN6)的表达情况,探讨其与HCC的发生、发展、预后的关系。方法:应用免疫组织化学SABC法检测58例HCC、24例癌旁组织和18例正常肝脏组织中CDC25C和CLDN6的表达情况,并分析两者与临床病理特征和术后无瘤生存期的关系。结果:CDC25C在HCC组织、癌旁组织、正常肝脏组织表达阳性率分别为86.2%、45.8%、11.1%,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。CDC25C在HCC组织中的表达与乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、肿瘤直径大小和肿瘤分化程度有关(P<0.05)。CLDN6在HCC组织、癌旁组织、正常肝脏组织表达阳性率分别为77.6%、41.7%、16.7%,表达差异均有统计学意义(P<0.05)。CLDN6在HCC组织中的表达与肿瘤直径大小有关(P<0.05)。HCC中CDC25C阳性组及CDC25C阴性组的中位无瘤生存时间分别为12个月和15个月,差异有统计学意义(P<0.05)。CLDN6阳性组及CLDN6阴性组中位无瘤生存时间分别为12个月和14个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CDC25C和CLDN6可能在肝细胞癌的发生、发展及复发过程中起重要作用,有望成为肝癌诊断及预测预后的重要指标。

喉鳞癌组织中miR-1225-5p和CDC14B蛋白水平表达与临床病理特征及预后的关系

目的探究喉鳞癌组织中miR-1225-5p基因和细胞分裂周期蛋白14B(CDC14B)蛋白表达与临床病理特征及预后的关系。方法选取2012年1月~2015年6月在延安市人民医院行手术切除的67例喉鳞癌患者癌组织及其对应癌旁正常组织进行实验。采用qRT-PCR法检测癌组织及癌旁正常组织中miR-1225-5p mRNA表达;采用SP免疫组化染色法检测癌组织及癌旁正常组织中CDC14B蛋白表达;探究miR-1225-5p及CDC14B与临床病理特征及预后的关系。结果喉鳞癌组织中miR-1225-5p mRNA表达水平显著低于癌旁正常组织(1.7±0.5 vs 5.9±1.6),差异具有统计学意义(t=20.508,P<0.001);CDC14B蛋白阳性表达率显著高于癌旁正常组织(76.1%vs 37.3%),差异具有统计学意义(χ2=20.550,P<0.001)。miR-1225-5p mRNA不同表达在喉鳞癌患者分化程度(χ2=3.824,P=0.000)、T分期(χ2=1.859,P=0.034)、TNM分期(χ2=3.597,P=0.000)及是否淋巴结转移(χ2=2.191,P=0.016)之间的差异均具有统计学意义。CDC14B蛋白不同表达在喉鳞癌患者肿瘤直径(χ2=5.060,P=0.025)、分化程度(χ2=6.125,P=0.013)、T分期(χ2=10.129,P=0.001)、TNM分期(χ2=8.114,P=0.014)及是否淋巴结转移(χ2=4.273,P=0.038)之间的差异均具有统计学意义。miR-1225-5p低表达、CDC14B阳性患者术后5年总生存率低于miR-1225-5p高表达、CDC14B阴性患者(Log-rank P=0.046,0.023)。结论喉鳞癌组织中miR-1225-5p低表达、CDC14B阳性表达与喉鳞癌恶性程度及预后密切相关,可作为喉鳞癌潜在的肿瘤标志物及治疗靶点。

白血病抑制因子受体gp190细胞内区与HL-60细胞内Cdc25B激活的关系

目的 :观察白血病抑制因子 (L IF)受体 gp190亚基完整的细胞内区和 gp190胞内区 C末端片段在人白血病细胞系HL - 6 0中与细胞周期调控因子 Cdc2 5 B表达和激活的关系 ,进一步了解 L IF引发白血病细胞增殖抑制和分化的机制。 方法 :用基因重组技术将 gp130的细胞内区换成 gp190的细胞内区 ,用 PCR技术扩增合成 gp190细胞内区 C末端的一个多肽 ,构成嵌合体受体基因 130 /190及 190 CT片段 ,并分别在 HL - 6 0细胞表达。用免疫组化和 Western印迹方法 ,分析在 L IF的诱导下 ,细胞生长和形态与 Cdc2 5 B表达的关系。 结果 :转染 pc DNA 3.0 130 /190的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量降低 ,细胞数量减少 ,细胞体积增大 ;转染 pc DNA3.0 190末端的 HL - 6 0细胞 Cdc2 5 B的表达量增高 ,细胞表现为增殖 ,细胞体积普遍减小。 结论 :Cdc2 5 B表达量降低与 L IF诱导引发的白血病细胞 HL - 6 0增殖抑制有关 ,上述效应是由 gp190亚基细胞内区介导的 ,而gp190 C末端片段可干扰 L

CDC25C表达下调的黑色素瘤细胞线粒体应激反应和线粒体途径凋亡情况观察

目的探讨细胞分裂周期蛋白25C(CDC25C)对黑色素瘤B16细胞线粒体应激反应和线粒体途径凋亡的影响。方法取黑色素瘤B16细胞进行培养,将细胞随机分为转染组、转染对照组、空白对照组。转染组转染CDC25C低表达慢病毒质粒,转染对照组转染慢病毒空质粒,空白对照组正常培养。利用Rhod-2/AM与MitoSOX荧光探针检测细胞线粒体内Ca^(2+)浓度及线粒体活性氧(ROS),RT-qPCR法和Western blotting法分别检测细胞线粒体应激反应相关分子ClpP、LONP1及线粒体途径凋亡相关分子Caspase-9、Caspase-3 mRNA和蛋白表达。结果与转染对照组和空白对照组相比,转染组细胞线粒体Ca^(2+)及ROS含量增加,ClpP、LONP1、Caspase-9、Caspase-3 mRNA及蛋白表达水平升高(P<0.05或<0.01)。结论CDC25C表达下调激活黑色素瘤B16细胞发生线粒体应激反应,并诱导线粒体途径的细胞凋亡。

CDC14B在小鼠1-细胞期受精卵各细胞周期的动态表达及其定位

目的:检测小鼠1-细胞期受精卵各细胞周期中细胞分裂周期蛋白14B(CDC14B)的表达水平及其定位,初步阐明CDC14B对哺乳动物受精卵早期发育调控的机制。方法:通过超排卵技术分别收集小鼠1-细胞期受精卵,采用RT-PCR和Western blotting法检测小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中CDC14B mRNA和蛋白表达水平;采用细胞免疫荧光法观察小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中CDC14B和β微管蛋白(β-tubulin)的共定位情况。结果:与G 1期比较,小鼠S、G 2和M期1-细胞期受精卵中CDC14B mRNA和蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。间接免疫荧光实验,CDC14B(红色荧光)和β-tubulin(绿色荧光)在G 1期和S期共定位于小鼠受精卵皮质;在G 2早期,CDC14B和β-tubulin共定位于皮质和细胞质;在G 2晚期,部分CDC14B入核;在M期,CDC14B和β-tubulin共定位于纺锤体。结论:CDC14B在小鼠不同细胞周期1-细胞期受精卵中动态表达,CDC14B存在核浆纺锤体转位,CDC14B的定位变化可能调控纺锤体的功能。