间接免疫细胞化学法快速检测新城疫病毒抗原的研究

本研究旨在建立一种简单、方便、准确、特异的方法检测新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)。比较间接HRP-免疫细胞化学法与间接免疫荧光法两种方法检测NDV在COS-7细胞中的定位。两种试验方法都可以检测到NDV主要定位在COS-7细胞的胞浆内。间接HRP-免疫细胞化学法检测NDV要求一抗滴度≤1∶100,间接免疫荧光法要求的滴度≤1∶100。间接HRP-免疫细胞化学法检测NDV要求二抗滴度≤1∶300,间接免疫荧光法要求的滴度≤1∶50。而且结果观察中间接HRP-免疫细胞化学法要比间接免疫荧光法方便。间接HRP-免疫细胞化学法进行NDV检测优于间接免疫荧光法,是一种简单、快捷、准确的适用于检测NDV的技术。

免疫细胞化学法检测大鼠骨髓细胞转铁蛋白受体

目的 建立检测大鼠骨髓细胞转铁蛋白受体 (TfR)的免疫细胞化学法 ,应用于大鼠慢性病贫血动物模型。方法 免疫细胞化学法 (SP系统 )。结果 慢性病贫血组TfR表达总积分为 6 8.6分 ,较正常对照组 (14 4 .8分 )明显降低 ,抑制剂组为 10 1.2分 ,介于正常组与炎症组之间 ,经单因素方差分析 ,P <0 .0 1。结论 该法简明、方便 ,特异性强 。

免疫细胞化学法检测ITP病人血清血小板抗体

目的 :建立新的原发性血小板减少性紫癜 (ITP)病人的血清学检测方法。方法 :采用免疫细胞化学法 ,用巨核细胞 血小板系Dami细胞株进行涂片 ,利用Dami细胞膜上的表面标志物GpⅡb/Ⅲa、GpⅠb、vWF等作为抗原 ,检测ITP病人血清中的血小板自身抗体。结果 :部分Dami细胞内可见红色沉淀颗粒 ,颗粒着色深浅不一 ,部分Dami细胞胞膜呈红色 ,ITP病人组红色沉淀颗粒明显多于正常人组和非ITP性血小板减少组。结论

直接免疫细胞化学法检测红细胞内血红蛋白及其在血红蛋白病诊断中的应用

目的 :建立直接免疫细胞化学法检测红细胞内血红蛋白类型 ,以鉴别胎儿有核红细胞 ,开展从母血分离胎儿细胞进行遗传病无创性产前诊断研究。方法 :用荧光素标记的 anti- Hb A,anti- α- globin,anti- Hb E,anti- β- globin和 anti- γ- globin抗体特异性检测正常成人外周血、 Hb Bart's水肿死胎心脏血、血红蛋白 E杂合子患者和 β°地中海贫血纯合子患者外周血的细胞涂片 ,在荧光显微镜下观察阳性细胞。结果 :正常成人外周血和 Hb E杂合子患者外周血的细胞涂片在荧光显微镜下分别观察到anti- Hb A,anti- Hb E阳性细胞。Hb Bart's水肿死胎心脏血的细胞涂片 ,未见 anti- α- globin阳性细胞 ,可见 anti- γ- globin阳性细胞。β°地中海贫血纯合子患者外周血的细胞涂片 ,未见 anti- β- globin阳性细胞 ,可见 anti- γ- globin阳性细胞。结论 :直接免疫细胞化学法是一种简便有效检测红细胞内血红蛋白的方法 ,可用于鉴别从母血中分离的胎儿有核红细胞 ,开展无创性产前基因诊断研究 ,并进行生理、病理和治疗状态下特异红细胞族群的标识、分离、富集。

应用细胞化学法与X-射线能谱仪对深低温停循环后脑神经细胞中Ca^(++)浓度的定量研究

用草酸－焦锑酸钾细胞化学法显示深低温（１８℃）停循环（ＤＨＣＡ）１２０ｍｉｎ后脑神经细胞内Ｃａ＋＋的分布及超微结构改变，同时利用Ｘ－射线能谱仪测量细胞内Ｃａ＋＋浓度以及停循环时应用１．６－二磷酸果糖（ＦＤＰ）保护液后细胞内Ｃａ＋＋浓度的变化。结果显示：（ＤＨＣＡ）１２０ｍｉｎ后脑神经细胞超微结构破坏严重，细胞内Ｃａ＋＋浓度明显增加。但在（ＤＨＣＡ）期间应用（ＦＤＰ）脑保护液后可以明显减轻术后神经细胞内Ｃａ＋＋聚积与脑损伤，是（ＤＨＣＡ）下脑保护的可行方法。

肿瘤单克降抗体免疫细胞化学法在腹部包块细针穿刺细胞学检查中的意义

本文应用肿瘤单克降抗体(MG_7、MGd1)免疫细胞化学法,对32例腹部包块患者作细针穿刺细胞学检查.结果免疫酶标(ABC法)染色,胃癌和结肠癌阳性率分别为78.6%和85.7%,病理细胞学检查胃癌和结肠癌阳性率分别为64.3%和71.4%,其它肿瘤,肠结核均为阴性.

检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法的建立及初步应用

目的 建立检测细胞内细胞因子的生物素-链霉亲和素免疫细胞化学法（BSA—ICC）并作临床初步应用。方法 从健康人外周血单个核细胞（PBMC）中富集CD4细胞，加入莫能霉素，用不同浓度的佛波醇酯（PMA）和钙离子载体（A23817）诱导CD4细胞不同时间，比较其胞内表达白细胞介素-2（IL-2）／白细胞介素-4（IL-4）的细胞百分率，确定最适诱生条件；用不同稀释度的IL-2McAb、IL-4McAb、不同浓度的生物素化羊抗鼠IgG（bio-SAMIgG）和辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素（HRP-SA）作棋盘配比试验，确认McAb、bio-SAMIgG和HRP—SA的最适浓度，根据上述结果建立了检测细胞内细胞因子的BSA—ICC法。用所建方法检测20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中表达IL-2／IL-4细胞的百分率。结果 诱导CD4细胞胞内表达IL-2和IL-4的细胞最高百分率的PMA和A23817浓度分别为100μg/L和2．0μmol／L，诱导高峰时间分别为5和7h，BSA-ICC法中所用IL-2McAb、IL-4McAb最适稀释度分别为1：20和1：40，bio—SAMIgG和HRP-SA浓度分别为10～15μg/ml和15μg/ml。20名健康献血员、16例妇科良性疾病和18例妇科恶性肿瘤患者CD4细胞中分泌IL-2的细胞百分率分别为（45．90±4．39）％、（37．28±2．67）％和（25．19±3．49）％，分泌IL-4的细胞百分率分别为（10．5±1．50）％、（9．94±1．06）％和（16．13±2．50）％，IL-2^＋CD4^＋／IL-4^＋CD4^＋比值分别为3．65±0．94、3．55±0．76和1．27±0．26。结论 所建方法可用于T辅助（Th）细胞亚型的测定，从而判断Th细胞的极化状态。妇科恶性肿瘤患者Th细胞功能失衡极化，呈Th2反应，可能与恶性肿瘤的发生有关。

免疫细胞化学法检测大鼠骨髓细胞转铁蛋白受体的建立及应用

目的 建立检测大鼠骨髓细胞转铁蛋白受体(TfR)的免疫细胞化学法,应用于大鼠慢性病贫血动物模型。方法 免疫细胞化学法(S-P)系统。结果 慢性病贫血组TfR表达总积分为68.6分,较正常对照组(144.8分)明显降低,抑制剂组为101.2分,介于正常组与炎症组之间,经单因素方差分析P<0.01。结论 该法简明、方便、特异性强,准确地反映了骨髓细胞TfR表达的程度。

放射免疫洁、免疫细胞化学法检测癌胚抗原在胸水鉴别诊断中的应用

本文用放射免疫法（ＲＩＡ）测定良、恶性胸水各３０例的癌胚抗原（ＣＥＡ）的含量，并用过氧化酶—抗—过氧化酶法（ＰＡＰ法）对胸水中脱落细胞行抗ＣＥＡ染色的免疫细胞化学研究。ＲＩＡ测定恶性胸水中ＣＥＡ值为２５．１５±８．８８ｎｇ／ｍｌ，良性胸水中ＣＥＡ值为５．２４±２．１５ｎｇ／ｍｌ，有高度显著性差异（Ｐ＜０．００１）；以２０ｎｇ／ｍｌ为阳性界限，其敏感性为４０％，特异性为１００％，正确诊断率为７０％。ＰＡＰ法敏感性为７３．３％，特异性为９６．７％，正确诊断率为８５％。结果提示两法检测ＣＥＡ对良恶性胸水的鉴别诊断都有一定的实用价值，但ＰＡＰ较ＲＩＡ法敏感性高。

免疫细胞化学法在检测大肠癌患者腹腔冲洗液中脱落癌细胞的应用

大肠癌患者腹腔脱落癌细胞是术后腹膜种植转移的最常见原因，经术中腹腔冲洗液进行细胞涂片HE染色检查是临床病理学发现脱落癌细胞的主要检查方法，多数能做出及时肯定的诊断，但有时分化好的腺癌细胞光镜下形态表现与反应性或增生性间皮细胞难以鉴别，尤其在腺癌细胞较少时其阳性率更低。我们对48例大肠癌患者术中腹腔冲洗液标本采用免疫细胞化学法（immunocytochemistry，ICC）和HE法进行比较分析，以探讨其临床实用价值。

免疫细胞化学法测定鱼类淋巴囊肿病毒(LCDV)滴度

利用免疫细胞化学法测定鱼类淋巴囊肿病毒(LCDV)滴度。以牙鲆鳃细胞系(FG)作为感染细胞,将生长旺盛的FG细胞接种于48孔培养板中培养至形成细胞单层,用2倍连续稀释的LCDV粗提液分别接种FG细胞。固定各稀释度LCDV感染后的FG细胞,孵育抗牙鲆LCDV单克隆抗体,其后再运用生物素-亲合素反应系统,以碱性磷酸酶底物AP-Red试剂盒发色。倒置显微镜观察,被病毒感染的FG细胞的细胞质呈现红色,未被感染细胞的细胞质呈无色。记录各稀释度病毒感染的阳性细胞孔数,按Reed-Muench法计算组织细胞培养半数感染量(TCID50)。结果显示,免疫细胞化学法测得LCDV在FG的滴度为1.77×210 TCID50/mL。该法可以用来有效测定LCDV滴度,且结果直观、准确性较好,灵敏度较高。

免疫细胞化学法检测羟基喜树碱对乳腺癌MCF-7细胞的TIMP-3及空泡化作用

目的探索羟基喜树碱对乳腺癌细胞MCF-7细胞信号转导相关基因TIMP-3表达,观察羟基喜树碱处理乳腺癌细胞MCF-7细胞形态的改变,从而探讨羟基喜树碱在乳腺癌治疗中的潜在新靶点。方法以乳腺癌细胞MCF-7为研究模型,细胞暴露于羟基喜树碱浓度为10、40、80mg/L的培养液中24h,PBS组为对照组。采用免疫组化法检测羟基喜树碱(HCPT)对乳腺癌MCF-7细胞TIMP-3表达特征及细胞形态的变化。结果 HCPT对TIMP-3诱导表达作用差异不明显,但HCPT处理组细胞呈现明显的空泡化。结论 HCPT可诱导乳腺癌MCF-7细胞空泡化作用。

液基薄层细胞学检查联合免疫细胞化学法对肺癌病理类型的诊断价值

目的分析液基薄层细胞学检查(TCT)联合免疫细胞化学法(ICC)对肺癌病理类型的诊断价值。方法选取2017年9月至2019年3月平顶山市第一人民医院收治的74例肺癌患者(均经组织病理学检查确诊),行TCT、ICC联合诊断,统计TCT、ICC联合诊断肺癌病理类型的诊断符合率,对比p63、细胞角蛋白7(CK7)、突触素(Syn)、细胞角蛋白5/6(CK5/6)、甲状腺转录因子-1(TTF-1)、神经细胞黏附分子(NCAM-1)抗体在不同类型肺癌中的表达水平。结果TCT联合ICC对肺癌病理类型的诊断符合率为90.54%(67/74)。在鳞癌、腺癌与小细胞癌中,各种抗体的阳性率相比,差异有统计学意义(均P<0.05)。p63、CK5/6在鳞癌中阳性率较高,分别为93.94%(31/33)、90.91%(30/33);CK7、TTF-1在腺癌中阳性率较高,均为96.55%(28/29);Syn、NCAM-1在小细胞癌中阳性率较高,均为83.33%(10/12)。结论TCT联合ICC对肺癌病理类型的诊断符合率较高,各种抗体在不同类型肺癌中阳性率不同,可为临床诊断和分型提供信息支持。

免疫细胞化学法活体染色鉴别人体周围神经感觉束的临床研究

应用食用亮蓝标记的人感觉蛋白单克隆抗体对周围神经损伤６例进行术中活体染色定性研究。结果显示，新鲜损伤４例，感觉束蓝染、运动束不染，陈旧性损伤２例，感觉、运动束染色对比度不强，神经损伤近端染色比远端满意。文中分析了新鲜与陈旧性神经损伤染色差异的原因。

用BAS免疫细胞化学法检测人抗脊髓灰质炎病毒抗体

采用生物素─链霉亲和素系统（ＢＡＳ）试剂，通过免疫细胞化学法技术，检测接种脊髓灰质炎疫苗儿童血清中Ｉ、Ⅱ脊髓灰质炎病毒抗体，并与传统的中和试验作对比。结果表明，ＢＡＳ免疫细胞化学法所测得抗体效价明显高于中和试验结果。前者操作简便，反应快速，更适合大批标本的检测。

分析尿糖对白细胞干化学法检测结果的影响

目的探讨尿糖对白细胞干细胞化学法检测结果的影响。方法回顾性分析该院于2011年12月—2013年12月收治的50例尿糖阳性且镜检白细胞阳性患者的临床资料,将其作为观察组,选取同期该院收治的30例尿糖阴性镜检白细胞阳性患者作为对照组,观察对比两组患者的干化学法检测结果。结果观察组患者随着尿糖的增高,干化学法检测的假阴性率也随之增高。对照组的假阴性率为26.67%（8/30）,观察组的假阴性率为33.33%~80.00%,组间比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论尿糖会干扰干化学法检测结果 ,造成一定假阴性率的出现,且其影响程度会随着的尿糖的增加而增加,因此在检测时要辅以镜检,以确保检测的准确性。

大鼠肺泡巨噬细胞NOS表达的细胞化学和免疫细胞化学研究

用 NADPH-黄递酶细胞化学和 i NOS免疫细胞化学方法 ,结合图像定量分析 ,动态研究了 1μg/ml脂多糖诱导培养的大鼠肺泡巨噬细胞 i NOS的表达情况。结果发现 :脂多糖刺激 1小时染色反应强度与对照组相比无显著差异 ,6小时后明显高于对照组 ,随刺激时间延长 ,染色反应强度呈增高趋势 ,18小时后则趋于相对平稳 ;两种染色法显示的阳性细胞均以核周区染色反应为著。实验从形态学角度表明 :(1) NADPH-黄递酶细胞化学染色能够反映培养的大鼠肺泡巨噬细胞 NOS表达状况 ;(2 )脂多糖可诱导肺泡巨噬细胞 i NOS表达 ,其主要存在于核周区胞浆中。

免疫细胞化学对胸腔积液中的肺非小细胞癌分类与恶性间皮瘤的鉴别诊断分析

目的 分析对非小细胞肺癌病患胸腔积液实施免疫细胞化学法检测作用以及其同恶性间皮瘤之间诊断区别.方法 选择在怀化市第二人民医院进行胸腔积液检查的320例病患为研究样本,其检查时间均在2018年5月-2019年5月之间,采集全部病患胸腔积液样本,并实施液基细胞学检查,最终有42例病患诊断为非小细胞肺癌,有50例病患诊断为恶性间皮瘤.对非小细胞肺癌病患及恶性间皮瘤病患胸腔积液样本实施切片处理,并使用免疫细胞化学技术检测非小细胞肺癌样中细胞角蛋白5/6、细胞角蛋白14、细胞角蛋白7、甲状腺转录因子-1以及P63抗体阳性率,同时选择细胞角蛋白5/6、间皮细胞抗体、表皮生长因子受体、钙视网膜蛋白、波形蛋白、甲状腺转录因子-1以及癌胚抗原进行肺腺癌病患以及恶性间皮瘤病患胸腔积液样本检测,并进行鉴别诊断.观察诊断结果.结果 经免疫细胞化学诊断后发现42例小细胞肺癌中,有26例是腺癌,9例是鳞癌,7例是神经内分泌癌.恶性间皮瘤同肺腺癌在细胞角蛋白5/6、间皮细胞抗体、表皮生长因子受体、钙视网膜蛋白、波形蛋白、甲状腺转录因子-1以及癌胚抗原抗体方面诊断阳性率比较存在显著差异(P<0.05);并且细胞角蛋白5/6、间皮细胞抗体、表皮生长因子受体、钙视网膜蛋白以及波形蛋白在诊断恶性间皮瘤方面阳性率较高.结论 肺非小细胞肺癌实施免疫细胞化学检查可分为腺癌、鳞癌以及神经内分泌癌,细胞角蛋白5/6、间皮细胞抗体、表皮生长因子受体、钙视网膜蛋白、波形蛋白、甲状腺转录因子-1以及癌胚抗原是鉴别恶性间皮瘤的最优抗体.

去甲肾上腺素性心肌损害心肌细胞膜结合Ca^(2+)变化的细胞化学研究

研究利用细胞化学ＰＰＡ法观察去甲肾上腺素性心肌损害心肌细胞膜结合Ｃａ２＋的变化。结果表明，去甲肾上腺素可使心肌细胞膜及闰盘两侧的结合Ｃａ２＋丢失，线粒体内大量Ｃａ２＋沉淀物聚集。可能系胞质内ＰＨ下降，肌膜的酸性磷脂数量发生了变化，丧失了与钙的亲和力所致。