生物素标记的人IL-6受体基因探针的制备及在细胞原位杂交中的应用

制备了人IL-6受体cDNA 1.7 kb片段及其胞外区近膜侧区段0.5kb片段,分别用生物素标记制备了人IL-6受体基因探针,用斑点杂交分析了探针的灵敏度和特异性,并将探针用于四种白血病细胞系的原位杂交。结果表明,探针的灵敏度可达15～125pg/μl、特异性较好,所检测的四种细胞的IL-6受体mRNA表达水平与其细胞膜表面IL-6受体表达水平相一致。

细胞原位杂交技术在先天愚型诊断上的应用

细胞原位杂交技术在先天愚型诊断上的应用周东风，刘树茂，费洪宝，龚维龙先天愚型（２１三体，唐氏综合征）是常见的常染色体疾病，为先天性智力低下的主要原因之一，发病率为１／７００，其发病机理主要是２１三体或易位所致２１ｑ２２→ｔｅｒ三体型。绝大多数的患者（...

细胞内RNA的原位杂交

本文介绍用原位杂交方法测定细胞内的RNA。该方法特异性较高,能保持细胞曲完整性。我们测定了不同细胞的rRNA基因的转录和原癌基因c-myc,c-H-rgs的转录,取得了较满意的结果。RNase处理细胞或质粒pBR322作探针,细胞中显影颗粒很少。本文对原位杂交方法学进行了初步的讨论。

荧光原位杂交原理及其在染色体畸变研究中的应用

荧光原位杂交原理及其在染色体畸变研究中的应用上海医科大学劳动卫生教研室逄兵蒋学之华西医科大学卫生毒理教研室倪祖尧中山医科大学劳动卫生教研室郑履康张桥细胞染色体畸变一直是人们广泛研究的热点。染色体异常。如染色体结构畸变、非整倍体、微核等，在肿瘤、心血管...

RNA-RNA原位杂交检测人肝癌C-myc和H-ras-1基因的表达

中国医科院肿瘤研究所 在癌生物学最近的研究工作中,癌基因在肿瘤发生发展中的作用正日益受到重视。近年来杂交技术的发展为研究癌基因在细胞中的作用及肿瘤的发生机制提供了强有力的工具。这些分子生物学的分析技术检测的是整体细胞群体,因此,资料反映了群体细胞或组织的平均变化情况。细胞原位杂交则是在单细胞水平上检测细胞的基因表达变化。我们用RNA-RNA原位杂交的方法检测了原发性肝癌组织C-myc和H-ras-1的基因表达变化。

腺性膀胱炎患者周围血淋巴细胞端粒长度的测定及意义

目的 探讨腺性膀胱炎的发生原因。方法 采用流式细胞术原位杂交法 (FlowFish)检测 2 3例腺性膀胱炎患者 (实验组 )外周血淋巴细胞端粒长度。采用相同性别、年龄的配对健康人作为对照组 ,培养细胞作为内对照。结果 实验组和对照组外周血淋巴细胞端粒长度 (Q FISH值 ) :实验组为 0 .0 9± 0 .0 2 ,对照组为 0 .0 7±0 .0 2 ;两者相比有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 腺性膀胱炎患者外周血淋巴细胞端粒长度明显大于对照组 。

人乳头状瘤病毒感染的宫颈上皮内肿瘤和宫颈鳞状细胞癌中的间期细胞遗传学分析

目的探讨人乳头状瘤病毒(HPV)感染的宫颈上皮内肿瘤(CIN)和宫颈鳞状细胞癌中的间期细胞遗传学改变。方法对HPV感染的9例CIN(其中CINⅠ2例、CINⅡ3例、CINⅢ4例)和4例宫颈鳞状细胞癌的石蜡包埋组织,应用组织切片间期细胞核原位杂交技术检测染色体11、16、17和X的数目异常,3例正常宫颈鳞状上皮作为对照。结果除2例CINI的患者中被检染色体无异常外,其余11例(包括3例CINⅡ,4例CINⅢ以及4例宫颈浸润性鳞状细胞癌)均出现1条或多条被检测染色体的异常,其中4例分别发现了染色体11、17和X单体型。结论HPV16感染与11、16、17及X号染色体数目异常有关,而HPV DNA与宿主细胞染色体整合可能导致染色体的单体型出现。

重组合异种骨移植局部白细胞介素-8 mRNA和蛋白质的表达

目的 :探讨在重组合异种骨 (RBX)移植局部白细胞介素 8(IL 8)mRNA和蛋白质的表达规律 .方法 :将重组人骨形成蛋白 (rhBMP2 )复合于牛松质骨中制成RBX并植入小鼠股部肌肉内 ,于术后 4 ,7,14和 2 1d取材 ,应用原位杂交和免疫组织化学技术检测植骨局部IL 8mRNA及蛋白的表达与细胞定位 .标准对照组动物植入单纯牛松质骨 ,并另设空白对照 .结果 :术后 4 ,7,14和 2 1d ,实验组和标准对照组动物植骨局部均可检测到IL 8mRNA及蛋白的表达 .IL 8主要定位于单核细胞、巨噬细胞、中性粒细胞和成纤维细胞以及部分软骨细胞、成骨细胞和新生骨髓中部分骨髓细胞 .结论 :在RBX移植局部多种细胞表达IL 8,提示RBX可能通过新生骨中的多种细胞成分表达IL 8。

内源性内毒素移位在失血性休克中的作用及其分子机理研究

内源性内毒素移位在失血性休克中的作用及其分子机理研究Ｒｏｌｅｏｆｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｅｎｄｏｔｏｘｉｎｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎｉｎｈｅｍｏｒｒｈａｇｉｃｓｈｏｃｋａｎｄｉｔｓｍｏｌｅｃｕｌａｒｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ蒋建新，陈惠孙，胡德耀（第三军医大学...

医用硅橡胶对骨桥蛋白mRNA基因表达的影响

通过观察医用硅橡胶对成骨细胞的骨桥蛋白mRNA基因表达的影响,进行生物材料的分子生物相容性研究方法的初探.将医用硅橡胶的浸提液与原代成骨细胞共同培养,用骨桥蛋白探针与细胞进行原位杂交.镜下观察细胞内有无特殊的染色颗粒.结果表明:无细胞毒性的整形外科用植入性硅橡胶材料组显示出该基因表达的蓝黑色颗粒;有细胞毒性的口腔印模硅橡胶则无明显表达现象.原位杂交法观察医用硅橡胶对成骨细胞骨桥蛋白基因表达的影响,可作为评价生物材料的分子生物相容性的参考,将可用于对骨植入材料和组织工程材料的分子生物相容性研究.

c-myc基因在子宫内膜癌及癌旁组织中表达的研究

用生物素Bio-11－duTP标记c－myc基因作探针，与16例子宫内膜腺癌、2例子宫内膜腺鳞癌与其癌旁组织以及6例正常子宫内膜组织进行细胞原位杂交，定性、半定量测定c－myc基因在子宫内膜癌组织、癌旁组织及正常子宫内膜组织中的表达。结果c－myc基因在子宫内膜癌组织中呈过表达，过表达率为100％，过表达平均倍数为9.86（P＜0．01），并显示与癌组织恶性程度呈正相关趋势，提示c－myc基因的过表达在子宫内膜癌的发生、发展中起重要作用。

使用FISH-FC测定益生菌对小鼠肠道菌群失衡的调节作用

目的:使用荧光原位杂交-流式细胞计数法(FISH-FC)测定灌胃自筛菌株嗜酸乳杆菌KLDS1.8701与植物乳杆菌KLDS1.0355混合液对抗生素性肠道菌群失衡小鼠的影响,并初步研究其发挥作用的机制。方法:在体外实验中,测定上述两株菌对肠道病原菌的抑制作用,并探讨其作用机理。在体内实验中,采用随机饮用盐酸克林霉素水溶液(2.8mg/mL)的方法建立抗生素性肠道菌群失衡小鼠模型,并使用FISH-FC方法测定小鼠粪便中总厌氧菌、球形梭菌属(Clostridium coccoides-Eubacterium rectale)、肠杆菌(Enterobacteria)、拟杆菌属(Bacteroides-Prevotella)的数量变化,以此判断模型是否建立成功。之后,灌胃嗜酸乳杆菌KLDS1.8701和植物乳杆菌KLDS1.0355的混合液(活菌数分别为107、108、109CFU/mL),以生理盐水为对照,采用上述方法评价混合菌液对小鼠模型的影响。结果:与对照组相比,灌胃混合菌液组可迅速恢复肠道菌群平衡(P<0.01),产生作用的效应剂量为107CFU/mL。结论:直接的抗微生物效应可能是该混合菌液调节肠道菌群平衡的机制之一。