蛇床子素通过NF-kB信号通路调控退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应及凋亡

目的 研究蛇床子素对退变髓核细胞的细胞外基质表达、炎症反应和凋亡的作用及其潜在机制。方法 采用氧糖剥夺(Oxygen Glucose Deprivation, OGD)培养建立退变髓核细胞模型,将细胞分为:对照组(正常培养)、OGD组(OGD培养)、蛇床子素组(OGD培养+蛇床子素处理)、PDTC组(OGD培养+NF-κB通路抑制剂PDTC处理)和蛇床子素+PDTC组(OGD培养+蛇床子素+PDTC处理)。采用Western blot检测细胞中Ⅱ型胶原(Collagen typeⅡ,Col2al)、聚集蛋白聚糖(Aggrecan)、P65和p-P65蛋白表达,ELISA法检测细胞培养液中炎性因子血清白细胞介素-1β(interleukin-1 β,IL-1β),白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 与对照组比较,OGD组细胞中Col2al、Aggrecan蛋白相对表达水平明显降低,细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平升高,细胞凋亡率明显升高,细胞中p-P65蛋白表达明显升高;与OGD组比较,蛇床子素组和PDTC组细胞中Col2al、Aggrecan蛋白相对表达水平明显升高,细胞培养液中IL-1β、IL-6和TNF-α水平降低,细胞凋亡率明显降低,细胞中p-P65蛋白表达明显降低,而蛇床子素+PDTC组上述指标改变最为明显。结论 蛇床子素可能通过抑制核因子激活的B细胞的κ轻链增强(nuclear factorκB,NF-κB)信号通路的活性,促进退变髓核细胞的细胞外基质合成、抑制退变髓核细胞的炎症反应和凋亡。

虎杖苷调控Janus激酶1/信号传导和转录激活因子3信号通路对小鼠宫颈癌细胞凋亡及裸鼠移植瘤作用实验研究

目的:探讨研究虎杖苷调控Janus激酶1(JAK1)/信号传导和转录激活因子3(STAT3)信号通路对小鼠宫颈癌细胞凋亡及裸鼠移植瘤的作用。方法:选取人宫颈癌HeLa细胞株,分为对照组(未经任何处理的HeLa细胞)、虎杖苷低、中、高剂量组(加入50、100、150μmol/L虎杖苷),继续培养24、48、72 h, Annexin V双染法检测HeLa细胞凋亡,MTT检测HeLa细胞增殖能力,Transwell小室检测HeLa细胞侵袭能力,qRT-PCR检测JAK1、STAT3 mRNA表达,Western blot检测JAK1/STAT3信号通路相关蛋白表达,并进行细胞形态学观察。结果:与对照组比较,虎杖苷低、中、高剂量组HeLa细胞凋亡率升高,高剂量组凋亡率高于中剂量组,中剂量组高于低剂量组(均P<0.05)。虎杖苷低、中、高剂量组HeLa细胞增殖和侵袭能力显著下降,虎杖苷高剂量组增殖率和侵袭细胞数最低(均P<0.05)。虎杖苷低、中、高剂量组HeLa细胞中JAK1、STAT3 mRNA和蛋白表达显著下降,高剂量组JAK1、STAT3 mRNA和蛋白表达低于中剂量组,中剂量组低于低剂量组(均P<0.05)。虎杖苷低、中、高剂量组小鼠肿瘤体积缩小,肿瘤质量降低(均P<0.05)。结论:虎杖苷可诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡,抑制其增殖、迁移、侵袭及裸鼠皮下成瘤,其作用机制可能与调控JAK1/STAT3通路信号通路有关。

甘草酸二铵通过TLR4/NF-κB信号通路负调控LPS诱导的BV2小胶质细胞神经炎症反应

目的:评价甘草酸二铵(DG)对脂多糖(LPS)诱导的BV2小胶质细胞TLR4/NF-κB炎症信号通路的影响,探讨其改善神经炎症的潜在机制。方法:采用LPS诱导BV2小胶质细胞损伤模型,给予20、60μmol/L DG处理。MTS检测细胞活力;Griess检测细胞NO分泌水平;ELISA检测细胞上清中TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平。RT-qPCR检测细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平;Western blot检测细胞TLR4、MyD88、NF-κB、p-NF-κB、IκB-α和p-IκB-α蛋白表达。结果:与对照组相比,LPS处理的BV2小胶质细胞活力明显降低(P<0.05),NO分泌显著增加(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平明显升高(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平显著升高(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB和p-IκB-α蛋白表达明显升高(P<0.05);与LPS组相比,不同浓度DG干预的BV2小胶质细胞活力明显升高(P<0.05),NO分泌明显减少(P<0.05),TNF-α、IL-6和IL-1β炎症因子水平明显降低(P<0.05),TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4和MyD88 mRNA水平明显降低(P<0.05),TLR4、MyD88、p-NF-κB和p-IκB-α蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论:DG可有效减轻LPS诱导的小胶质细胞神经炎症反应,可能与抑制TLR4/NF-κB信号通路有关。

NLRC3通过抑制STING信号通路, 减轻类风湿关节炎患者巨噬细胞焦亡诱导的免疫炎症反应

目的探索含胱天蛋白酶激活和募集结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体3(NLRC3)在RA患者巨噬细胞焦亡诱导的免疫炎症反应中的作用及潜在的机制。方法按照入组标准选取50名类风湿关节炎(RA)患者和10名健康志愿者,提取外周血巨噬细胞,根据分组要求进行转染处理,分为正常健康对照(NC)组、RA巨噬细胞模型(RA-MC)组、RA巨噬细胞模型联合NLRC3过表达(RA-MC联合pcDNA3.1-NLRC3)组、RA巨噬细胞模型联合NLRC3敲低(RA-MC联合siRNA-NLRC3)组、RA巨噬细胞模型联合干扰素基因刺激因子(STING)过表达(RA-MC联合pcDNA3.1-STING)组、RA巨噬细胞模型联合STING敲低(RA-MC联合siRNA-STING)组,采用透射电镜观察各组巨噬细胞焦亡的情况,实时定量PCR检测各组巨噬细胞中NLRC3、STING、胱天蛋白酶1(caspase-1)、消皮素D(GSDMD)的mRNA表达,ELISA测定各组巨噬细胞上清液中白细胞介素1β(IL-1β)、IL-18的水平。结果与NC组相比,RA-MC组中巨噬细胞表现出细胞焦亡的特点;与RA-MC组相比,RA-MC联合pcDNA3.1-NLRC3组和RA-MC联合siRNA-STING组中细胞焦亡情况改善,RA-MC联合siRNA-NLRC3组和RA-MC联合pcDNA3.1-STING组中细胞焦亡情况加重;与NC组相比,RA-MC组中STING、caspase-1、GSDMD的mRNA相对表达水平升高,炎症因子IL-1β、IL-18的水平也升高,而NLRC3的mRNA相对表达水平降低;与RA-MC组相比,RA-MC联合pcDNA3.1-NLRC3组和RA-MC联合siRNA-STING组中caspase-1、GSDMD的mRNA相对表达水平降低,炎症因子IL-1β、IL-18的水平也降低,RA-MC联合siRNA-NLRC3组和RA-MC联合pcDNA3.1-STING组的情况则与之相反;同样与RA-MC组相比,RA-MC联合pcDNA3.1-NLRC3组中STING的mRNA相对表达水平会降低,RA-MC联合siRNA-NLRC3组中STING的mRNA相对表达水平升高。结论NLRC3可通过抑制STING信号通路,减少caspase-1、GSDMD焦亡蛋白的产生,进而拮抗巨噬细胞焦亡,降低炎症因子IL-1β、IL-18的水平,从而减轻RA患者的免疫炎症反应。

肿瘤微环境的免疫细胞、信号传导通路及相关治疗展望

肿瘤微环境(Tumor microenvironment,TME)是一个高度结构化的生态系统,包括多种免疫细胞、肿瘤相关的成纤维细胞(CAFs)、内皮细胞和细胞外基质(ECM)等。研究TME内部的免疫细胞及信号传导通路对于探索肿瘤治疗靶点、提高治疗效果具有重要意义。拟通过对TME中的免疫细胞及相关信号传导通路的研究进展综述,以期为肿瘤免疫、靶向治疗提供新的思路和方法。

LncRNA MINCR调控AMPK/SIRT1信号通路对LPS诱导的人肺泡上皮细胞自噬和炎症反应的作用机制

目的探讨lncRNA MINCR调控AMPK/SIRT1信号通路对LPS诱导的人肺泡上皮细胞自噬和炎症反应的作用机制。方法将A549细胞随机分为Control组(A549细胞正常培养)、LPS组(10μg/mL LPS处理A549)、si-NC组(转染si-NC质粒后,10μg/mL LPS处理A549)、si-MINCR组(转染si-MINCR质粒后,10μg/mL LPS处理A549)和si-MINCR+Compound C组(转染si-MINCR质粒后,10μg/mL LPS和50μmol/L的Compound C处理A549)。qRT-PCR检测细胞中MINCR相对表达量,CCK-8和流式细胞仪检测细胞存活率和凋亡率,ELISA检测细胞中炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α水平,蛋白质印迹法检测细胞中LC3、p62、Beclin-1、AMPK、p-AMPK、SIRT1蛋白表达。结果与Control组比较,LPS组细胞中MINCR相对表达量(3.84±0.52)、细胞凋亡率(26.84%±3.12%)、细胞中IL-6(416.95±45.06)、IL-8(549.32±61.45)、TNF-α(694.81±71.42)水平及细胞中p62蛋白(0.87±0.10)表达明显升高,细胞中LC3Ⅱ/LC3Ι比值(0.32±0.05)、p-AMPK/AMPK比值(0.31±0.05)、Beclin-1(0.52±0.07)和SIRT1蛋白(0.46±0.06)表达明显降低(P<0.01);与LPS组比较,si-MINCR组细胞中MINCR相对表达量(1.45±0.26)、细胞凋亡率(9.62%±1.15%)、细胞中IL-6(198.62±21.34)、IL-8(287.15±30.76)、TNF-α(364.72±40.59)水平及细胞中p62蛋白(0.87±0.10)表达明显降低,LC3Ⅱ/LC3Ι比值(0.78±0.09)、p-AMPK/AMPK比值(0.64±0.07)、Beclin-1(0.73±0.08)和SIRT1蛋白(0.81±0.09)表达明显增加(P<0.01);与si-MINCR组比较,si-MINCR+Compound C组细胞中MINCR相对表达量(3.21±0.45)、细胞凋亡率(20.24%±2.26%)、细胞中IL-6(395.78±10.47)、IL-8(543.26±56.71)、TNF-α水平(610.54±65.33)及细胞中p62蛋白(0.79±0.08)表达明显升高,细胞中LC3Ⅱ/LC3Ι比值(0.40±0.06)、p-AMPK/AMPK比值(0.38±0.04)、Beclin-1(0.56±0.06)和SIRT1(0.52±0.07)蛋白表达明显降低(P<0.01)。结论敲减lncRNA MINCR可促进LPS诱导的肺泡上皮细胞自噬,减轻炎性损伤,其作用机制可能与激活AMPK/SIRT1信号通路有关。

苦杏仁苷调节HMGA1/NF-κB信号通路对LPS诱导的心肌细胞炎症反应的影响

目的:探讨苦杏仁苷(AMG)对脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞炎症反应的影响及对高迁移率族ATHook蛋白1(HMGA1)/核因子-κB(NF-κB)信号通路的调节机制。方法:将H9c2心肌细胞分为对照组、LPS组、AMG低剂量组、AMG高剂量组、AMG高剂量+重组HMGA1组(AMG高+HMGA1组)。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测心肌细胞的增殖活性;流式细胞术检测心肌细胞凋亡率;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养液炎性因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β、肿瘤坏死因子(TNF)-α;蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测心肌细胞HMGA1/NF-κB通路相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,LPS组心肌细胞存活率、NF-κB抑制蛋白α(IκBα)蛋白表达降低,心肌细胞凋亡率、炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α含量、HMGA1蛋白和NF-κB p65、IκBα磷酸化水平升高(P<0.05)。与LPS组比较,AMG各剂量组心肌细胞存活率、IκBα蛋白表达升高,心肌细胞凋亡率、炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α含量、HMGA1蛋白和NF-κB p65、IκBα磷酸化水平降低(P<0.05),且HMGA1过表达可逆转AMG对心肌细胞的保护作用(P<0.05)。结论:AMG通过抑制HMGA1/NF-κB信号通路,减轻LPS诱导的心肌细胞炎症反应。

基于JAK/STAT3信号通路探讨SLIT3对高糖诱导的人肾小球足细胞炎症反应的影响

目的探讨SLIT3能否调控JAK/STAT3信号通路调控高糖诱导的肾小区足细胞炎症反应。方法将肾小球足细胞MPC-5随机分为L-Glucose+NC siRNA组、L-Glucose+SLIT3组、L-Glucose+SLIT3 siRNA组、H-Glucose+NC siRNA组、H-Glucose+SLIT3组、H-Glucose+SLIT3 siRNA组。流式细胞仪检测细胞凋亡率;ELISA检测细胞中炎症因子水平;蛋白质印迹检测细胞中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3蛋白表达;RT-PCR检测细胞中SLIT3、IL-1β、IL-6、TNF-α相对表达量。结果与Ctrl组相比,SLIT3-siRNA1组(0.67±0.04)、SLIT3-siRNA2组(0.26±0.03)和SLIT3-siRNA3组(0.71±0.08)MPC-5细胞中SLIT3对表达量均明显降低,且SLIT3-siRNA3组变化最显著(P<0.01);与L-Glucose+NC siRNA组相比,L-Glucose+SLIT3组和H-Glucose+NC siRNA组MPC-5细胞凋亡率(分别为11.84%±1.06%、11.88%±1.07%)、细胞中IL-1β(分别为164.69±6.92、155.31±8.62)、IL-6(分别为162.16±5.56、105.35±3.44)、TNF-α(分别为103.31±6.84、128.43±4.82)水平及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(分别为1.74±0.14、3.93±0.17)和p-STAT3/STAT3比值(分别为1.99±0.24、4.43±0.16)明显增加,L-Glucose+SLIT3siRNA组细胞凋亡率(2.73%±0.25%)、细胞中IL-1β(78.09±7.47)、IL-6(46.48±2.63)、TNF-α水平(42.61±3.10)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(0.16±0.04)和p-STAT3/STAT3(0.20±0.03)比值明显降低(P<0.01);与H-Glucose+NC siRNA组相比,H-Glucose+SLIT3组MPC-5细胞凋亡率(16.24%±1.28%)、细胞中IL-1β(214.09±9.28)、IL-6(205.44±6.80)、TNF-α水平(192.11±4.93)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(5.00±0.39)和p-STAT3/STAT3比值(5.71±0.33)明显增加,H-Glucose+SLIT3 siRNA组细胞凋亡率(6.25%±0.43%)、细胞中IL-1β(118.60±8.05)、IL-6(74.37±4.91)、TNF-α水平(98.76±4.81)及mRNA相对表达量、细胞中p-JAK2/JAK2(2.99±0.13)和p-STAT3/STAT3(2.05±0.14)比值明显降低(P<0.01)。结论敲减SLIT3可抑制高糖诱导的肾小球足细胞中炎症反应和细胞凋亡,改善足细胞损伤,其作用机制可能比抑制JAK2/STAT3信号通路激活有关。

槲皮素预处理ALI大鼠肺组织损伤、炎症/氧化应激反应、铁死亡及Nrf2/HO-1信号通路激活情况观察

目的观察槲皮素灌胃预处理的LPS诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织损伤、炎症反应、氧化应激反应、铁死亡及Nrf2/HO-1信号通路激活情况,以探讨槲皮素对ALI的预防作用及机制。方法24只SD大鼠分为槲皮素低、中、高剂量组和阳性对照组(地塞米松)、模型组、正常对照组。槲皮素低、中、高剂量组以25、50、100 mg/kg槲皮素灌胃,1次/天,连续7 d;槲皮素灌胃处理的第4天在大鼠气管内滴注5 mg/kg LPS;阳性对照组以地塞米松1.04 mg/kg灌胃,其余处理同槲皮素组;模型组以生理盐水灌胃,1次/天,连续7天,其余处理同槲皮素组;正常对照组以生理盐水连续灌胃7 d。末次灌注给药后,观察各组肺组织损伤(肺功能及肺组织病理改变、纤维组织阳性表达率、肺泡上皮细胞凋亡率)、炎症反应(肺泡灌洗液TNF-α、IL-6、IL-1β)、氧化应激反应(肺泡灌洗液SOD、GSH、MDA,肺组织ROS)、铁死亡(Fe^(2+)水平)及Nrf2/HO-1信号通路激活[肺组织核因子红细胞2相关因子2(Nfr2)、血红素加氧酶1(HO-1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、过氧化氢酶(CAT)蛋白]情况。结果与正常对照组比较,模型组PaCO_(2)水平升高,PaO_(2)、SaO_(2)水平降低(P均<0.01);肺组织可见肺泡上皮细胞变性坏死,纤维组织阳性表达率高;肺泡上皮细胞凋亡率高;肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均升高,SOD、GSH水平降低,MDA水平升高,肺组织ROS表达水平升高,肺泡灌洗液中Fe^(2+)水平升高(P均<0.05)。与模型组相比,槲皮素中、高剂量组和阳性对照组中PaCO_(2)均降低(P均<0.05),槲皮素高剂量组PaO_(2)和SaO_(2)水平升高(P均<0.05);槲皮素高剂量组与阳性对照组肺组织炎性浸润与纤维增生明显减少,肺泡恢复正常生理结构;槲皮素低、中、高剂量组和阳性对照组肺纤维组织阳性表达率均下降(P均<0.05),其中槲皮素高剂量组肺纤维组织阳性表达率最低;槲皮素低、中、高剂量组和阳性对照组肺泡上皮细胞凋亡率均降低(P均<0.01);槲皮素低、中、高剂量组和阳性对照组肺泡灌洗液中TNF-α、IL-6、IL-1β水平均降低、SOD、GSH水平升高、MDA水平降低,肺组织ROS表达水平降低(P均<0.01),肺泡灌洗液中Fe^(2+)水平降低。与正常对照组比较,模型组肺组织中CAT、HO-1、Nrf2、SOD2蛋白表达水平低(P均<0.01);与模型组比较,槲皮素中、高剂量组和阳性对照组肺组织中CAT、HO-1、Nrf2、SOD2蛋白表达水平高(P均<0.05)。结论槲皮素灌胃预处理的ALI大鼠肺组织损伤、炎症反应、氧化应激反应、铁死亡情况减轻,Nfr2/HO-1信号通路激活;槲皮素灌胃预处理可预防LPS诱导的大鼠ALI,可能通过抑制炎症反应、氧化应激反应及铁死亡而起作用;槲皮素可能通过上调Nfr2/HO-1信号通路而抑制炎症反应、氧化应激反应及铁死亡;50、100 mg/kg槲皮素均对LPS诱导的大鼠ALI起预防作用,以100 mg/kg槲皮素的作用效果更佳。

神经肌肉电刺激通过调控白细胞介素6/信号转导子及转录激活子3信号通路促进脊髓损伤后小鼠运动功能恢复

目的观察神经肌肉电刺激(NMES)对脊髓损伤后小鼠白细胞介素6(IL-6)/STAT3信号通路的影响,探讨其对运动功能恢复的机制。方法选取SPF级小鼠72只随机分成假手术(sham)组、脊髓损伤组(SCI)和NMES组。利用BMS评分、斜坡实验与电生理(EMG)评估小鼠脊髓损伤后肢体运动恢复情况。Western blotting和Real-time PCR检测各组小鼠脊髓组织中相关炎症因子、IL-6/STAT3信号通路与胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。HE染色观察各组小鼠脊髓形态结构。结果NMES组BMS评分和小鼠斜坡实验均高于SCI组(P<0.05);NMES组小鼠运动诱发电位(MEP)最大振幅高于SCI组(P<0.05);NMES组脊髓组织TNF-α、IL-12A与GFAP表达量均低于SCI组(P<0.05),TGF-β、IL-10与BDNF表达量均高于SCI组(P<0.05);与SCI组相比,NMES组小鼠脊髓空洞较少,脊髓形态修复较好;与SCI组相比,NMES组IL-6/STAT3信号通路蛋白表达均低于SCI组(P<0.05)。结论神经肌肉电刺激通过抑制IL-6/STAT3信号通路发挥抗炎作用,从而促进脊髓损伤后小鼠后肢运动功能的恢复。

黄芩素通过抑制NF-κB/STAT3/ERK信号通路改善过敏性鼻炎小鼠的炎症反应

目的探究黄芩素是否通过调控核转录因子(NF)-κB、信号传导与转录激活因子(STAT)3、细胞外调节蛋白激酶(ERK),参与影响过敏性鼻炎小鼠的炎症反应,探究NF-κB/STAT3/ERK信号通路作为黄芩素作用靶点的可能性。方法选取72只BALB/c小鼠随机分为健康对照组、过敏性鼻炎组、氯雷他定组、黄芩素处理组、黄芩素+ERK激活组、黄芩素+NF-κB激活组,每组12只。构建过敏性鼻炎小鼠模型,过敏性鼻炎症状评分评估各组的构模情况;苏木素-伊红(HE)染色观察各组鼻黏膜组织的病理学变化;血球计数法检测各组鼻腔灌洗液中各类细胞数量;酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂盒检测各组鼻腔灌洗液中白细胞介素(IL)-12、肿瘤坏死因子(TNF)-α、IL-6水平及血清中OVA特异性免疫球蛋白(Ig)E、IgG1水平;Western印迹法检测鼻黏膜组织中NF-κB/STAT3/ERK信号通路蛋白表达水平。结果健康对照组鼻黏膜组织完整;与健康对照组相比,过敏性鼻炎组鼻黏膜组织具有明显病理学变化,过敏性鼻炎症状评分、鼻腔灌洗液中IL-12、TNF-α、IL-6含量和血清中IgE、IgG1含量显著升高,嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量和NF-κB p65、STAT3、ERK蛋白磷酸化水平显著升高(P<0.05);与过敏性鼻炎组相比,氯雷他定组、黄芩素处理组黏膜组织逐渐恢复,过敏性鼻炎症状评分、鼻腔灌洗液中IL-12、TNF-α、IL-6含量和血清中IgE、IgG1含量显著降低,嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量和NF-κB p65、STAT3、ERK的蛋白磷酸化水平显著降低(P<0.05);与黄芩素处理组相比,分别激活ERK、NF-κB通路后,小鼠鼻黏膜组织恢复缓慢,过敏性鼻炎症状评分、鼻腔灌洗液中IL-12、TNF-α、IL-6含量和血清中IgE、IgG1含量显著升高,嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、巨噬细胞数量显著升高(P<0.05);氯雷他定组和黄芩素处理组相比,各项指标无显著差异(P>0.05)。结论黄芩素通过调控NF-κB/STAT3/ERK信号通路,抑制NF-κB p65、STAT3、ERK蛋白磷酸化,减少炎症细胞聚集,减轻炎症反应,缓解小鼠过敏性鼻炎。

组胺H 1受体激动剂通过Akt/NF-κB通路抑制脂多糖诱导的星形胶质细胞炎症反应

目的探讨组胺H 1受体(histamine H 1 receptor,H 1R)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导的星形胶质细胞炎症反应的影响及其调控机制。方法采用LPS建立体外星形胶质细胞炎症模型,随机将大鼠原代星形胶质细胞分为对照组、LPS组、LPS+H 1R激动剂组(2-pyridylethlamine,Pyri)和H 1R激动剂组。对照组仅加入培养液,LPS+H 1R激动剂组提前在培养液中加入100μmol·L-1的Pyri,1 h后再加入终浓度为100μg·L-1的LPS。CCK-8法检测细胞活性;免疫荧光法检测活化标记物GFAP和H 1R的表达;倒置相差显微镜下观察星形胶质细胞的形态变化;ELISA法检测细胞上清中炎症因子TNF-α和IL-6水平;Western blot检测p-Akt、Akt、p-NF-κB p65、NF-κB p65的蛋白表达。结果与对照组比较,LPS组星形胶质细胞分支和辐射状突起减少,GFAP表达增加,细胞表面H 1R表达下调,上清液中TNF-α和IL-6含量增加,Akt和NF-κB p65的磷酸化水平明显增加;与LPS组相比,LPS+H 1R激动剂组激活态星形胶质细胞减少,GFAP表达降低,培养基上清中TNF-α和IL-6的含量明显下降,Akt和NF-κB p65的磷酸化表达明显降低。结论H 1R激动剂能够抑制LPS诱导的星形胶质细胞活化和炎症因子的表达,且Akt/NF-κB通路可能是H 1R参与星形胶质细胞免疫调节的重要途径。

益母草碱调节RhoA/ROCK信号通路对冠心病大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响

目的:研究益母草碱(Leo)通过调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路对冠心病(CHD)大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响及机制。方法:将造模成功的75只CHD大鼠随机分为模型组(CHD组)、Leo低、中、高剂量组(Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组)和Leo高剂量组+RhoA激活剂LPA组(Leo-H+LPA组),每组15只。Leo-L、Leo-M、Leo-H组分别灌胃15、30、60mg·kg^(-1)·d^(-1)的Leo,Leo-H+LPA组灌胃60mg·kg^(-1)·d^(-1)的Leo,另需腹腔注射1mg·kg^(-1)·d^(-1)的LPA,Control组和CHD组以相同方式给予等量生理盐水,均连续干预4周。超声心动图测定心功能指标;全自动生化分析仪测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、内皮细胞特异性分子-1(EMS1)、血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉内皮损伤;流式细胞仪检测主动脉内皮细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测RhoA/ROCK信号通路相关蛋白表达。结果:与Control组相比,CHD组主动脉壁增厚且染色不均匀,细胞膨大,排列紊乱,内皮粗糙;左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ET-1、VCAM-1和EMS1水平、细胞凋亡率及RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白表达显著升高(P<0.05),左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)、HDL-C、NO水平显著降低(P<0.05)。与CHD组相比,Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组主动脉染色均匀,动脉壁结构清晰,细胞排列紧密且形态较正常,内膜较平滑;LVEDD、LVESD、TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ET-1、VCAM-1和EMS1水平、细胞凋亡率及RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白表达逐渐降低(P<0.05),LVEF、FS、HDL-C、NO水平逐渐升高(P<0.05)。Leo-H+LPA组逆转了Leo对CHD大鼠的保护作用(P<0.05)。结论:Leo可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善CHD大鼠心功能,降低血脂,抑制炎症,进而减轻CHD大鼠主动脉内皮细胞损伤。

黄柏碱调节MCP-1/CCR2信号通路对特应性皮炎大鼠炎症反应的影响

目的:探讨黄柏碱对特应性皮炎(Atopic dermatitis,AD)大鼠炎症反应的影响及其作用机制。方法:构建AD大鼠模型,大鼠分为正常组、模型组、黄柏碱低剂量组、黄柏碱高剂量组、黄柏碱+巨噬细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemotactic protein-1,MCP-1)组;给药结束后,各组大鼠做皮损评分,记录搔抓次数,HE染色观察皮肤组织病理变化,甲苯胺蓝染色测定肥大细胞数,ELISA试剂盒测定皮肤组织活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)和血清免疫球蛋白(Immunoglobulins,IgE)、白介素-17(Interleukin,IL-17)、IL-6的含量,Western blot检测皮肤组织MCP-1、CC类趋化因子受体2(CC chemokinereceptor 2,CCR2)蛋白表达。结果:与正常组相比,模型组大鼠脱毛处皮肤发生溃疡、红斑,表皮和棘层增厚且有大量炎性细胞浸润,搔抓次数、肥大细胞数、ROS、IgE、IL-17、IL-6及MCP-1、CCR2蛋白表达水平增加(P<0.05);与模型组相比,黄柏碱低、高剂量组皮肤组织红斑、溃疡情况、炎性细胞浸润减少,未见脱屑,搔抓次数、肥大细胞数、ROS、IgE、IL-17、IL-6及MCP-1、CCR2蛋白表达水平依次降低(P<0.05);与黄柏碱高剂量组相比,黄柏碱+MCP-1组皮肤红斑、溃疡和炎性细胞浸润加重,搔抓次数、肥大细胞数、ROS、IgE、IL-17、IL-6及MCP-1、CCR2蛋白表达水平增加(P<0.05)。结论:黄柏碱可能通过抑制MCP-1/CCR2信号通路降低AD大鼠炎症反应。

基于NF-κB信号通路探讨类风湿性关节炎炎性反应的研究进展

核转录因子κB(NF-κB)信号通路是典型的促炎信号通路,通过在炎性反应中诱导促炎细胞因子表达以发挥促炎作用。过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(PPAR-γ)是炎性反应的重要调节因子,可通过直接或间接的竞争性抑制作用,抑制NF-κB的信号通路,从而抑制促炎细胞因子产生。类风湿性关节炎(RA)是一种慢性炎症性疾病,炎性反应是其发病的核心环节。该文基于NF-κB信号通路探讨RA炎性反应机制。

黄曲霉毒素B1激活核转录因子-κB信号通路引起牛乳腺上皮细胞发生炎性反应

本试验旨在研究不同浓度黄曲霉毒素B1(AFB1)对牛乳腺上皮细胞(MAC-T细胞)中核转录因子-κB(NF-κB)信号通路介导的炎症反应的影响。向MAC-T细胞中分别加入不同浓度的AFB1处理培养液培养24 h,分析AFB1对MAC-T细胞活力、乳酸脱氢酶(LDH)活性、促炎细胞因子含量和基因表达以及NF-κB信号通路相关蛋白表达的影响。结果显示:1)与对照组相比,2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L AFB1处理MAC-T细胞均能显著或极显著降低细胞活力(P<0.05或P<0.01),显著或极显著升高培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性(P<0.05或P<0.01),且呈剂量依赖性。2)与对照组(0μmol/L AFB1)相比,5.0、10.0和20.0μmol/L AFB1处理MAC-T细胞使上清液中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01);5.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量显著或极显著升高(P<0.05),10.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量显著或极显著升高(P<0.01),20.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中IL-1β、IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的相对表达量极显著升高(P<0.01)。3)与对照组相比,10.0和20.0μmol/L AFB1处理使MAC-T细胞中磷酸化P65(p-P65)、磷酸化核转录因子-κB抑制因子α(p-IκBα)蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01)。上述结果提示,AFB1通过促进炎症相关因子表达和激活NF-κB信号通路,引起MAC-T细胞发生炎性反应。

山姜素介导NF-κB信号通路对胰腺癌细胞BXPC-3增殖、侵袭和炎症反应的影响

目的探讨山姜素介导核因子-κB(NF-κB)信号通路对胰腺癌细胞BXPC-3增殖、侵袭能力和炎症反应的影响。方法将人胰腺癌细胞BXPC-3分为对照组(0μmol/L山姜素)和不同浓度(25、50、100、200、400μmol/L)山姜素处理组,细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期,Transwell小室法检测细胞侵袭,蛋白免疫印迹法检测相关蛋白表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测炎症因子表达情况。结果CCK-8实验结果显示,与对照组比较,不同浓度(25、50、100、200、400μmol/L)山姜素处理后,胰腺癌细胞BXPC-3的细胞活力显著下降(P<0.05);且山姜素浓度越高、处理时间越长,对BXPC-3细胞活性的抑制作用越明显(P<0.05)。与对照组比较,经50、100、200μmol/L山姜素溶液处理后,细胞的克隆形成率、细胞侵袭能力、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、神经-钙黏素(N-cadherin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、NF-κB亚基p65、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)蛋白表达水平均明显下降,转化生长因子-β(TGF-β)、IL-10、上皮-钙黏素(E-cadherin)及NF-κB抑制蛋白(IκBα)蛋白表达水平明显上升(P<0.05)。加入激活剂脂多糖(LPS)后,细胞活力、细胞侵袭能力、TNF-α、IL-6、p65、MMP-9、cyclin D1蛋白表达水平明显上升,TGF-β、IL-10、IκBα蛋白表达水平明显下降(P<0.05);而加入NF-κB通路抑制剂Sulfasalazine后上述指标变化相反。结论山姜素可抑制胰腺癌细胞BXPC-3的增殖、侵袭能力和炎症反应,其机制可能与介导NF-κB信号通路有关。

TRAF5通过调控IL-17A/NF-κB信号通路减轻氧-糖剥夺/再灌注引起的心肌细胞炎症和细胞凋亡

目的 探讨肿瘤坏死因子受体相关因子5(tumor necrosis factor receptor-associated factor 5,TRAF5)对氧-葡萄糖剥夺/再灌注(oxygen-glucose deprivation/reperfusion,OGD/R)引起的心肌细胞炎症和细胞凋亡的影响及相关分子机制。方法 体外培养大鼠心肌细胞系H9c2细胞,构建OGD/R诱导的H9c2细胞模型,以脂质体转染法将TRAF5过表达质粒(pcDNA-TRAF5)和空载质粒(pcDNA-NC)转染至OGD/R诱导的H9c2细胞。采用实时定量聚合酶链反应(quantitative real time polymerase chain reaction,qRT-PCR)法检测细胞中TRAF5基因表达,CCK-8法测定细胞活力,试剂盒法检测细胞中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、心肌肌钙蛋白T(cardiac troponin T,cTnT)和炎性因子水平,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中相关蛋白表达。结果 与对照组比较,OGD/R组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达量降低,细胞活力降低,细胞中LDH、cTnT、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)浓度升高,细胞凋亡率升高,细胞中B淋巴细胞瘤2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白表达量降低,Bcl-2相关蛋白(B-cell-lymphoma-2 related protein,Bax)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved cysteine aspartate proteolytic enzyme-3,cleaved caspase-3)、白细胞介素-17A(interleukin-17A,IL-17A)蛋白表达量及磷酸化核转录因子-κB(phosphorylated nuclear factor-κB,p-NF-κB)/NF-κB比值升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与OGD/R组比较,OGD/R+pcDNA-TRAF5组H9c2细胞中TRAF5 mRNA和蛋白表达量升高,细胞活力升高,细胞中LDH、c TnT、TNF-α、IL-6、IL-1β、MCP-1浓度降低,细胞凋亡率降低,细胞中Bcl-2蛋白表达量升高,Bax、cleaved caspase-3、IL-17A蛋白表达量及p-NF-κB/NF-κB比值降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 TRAF5可减轻OGD/R引起的心肌细胞炎症和细胞凋亡,其作用机制可能与调控IL-17A/NF-κB信号通路有关。

禽腺病毒血清型4通过JAK/STAT信号通路调控鸡胚心脏成纤维细胞炎症反应的研究

为探究禽腺病毒血清型4(FAdV-4)感染鸡胚心脏成纤维细胞(CEF)后调控该细胞中炎症因子反应的机制,本研究以MOI 5 FAd V-4贵州分离株(GZ-QL)感染鸡胚心脏CEF细胞,采用荧光定量PCR(qPCR)检测FAd V-4感染后CEF细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α基因的转录水平;采用western blot检测FAd V-4感染后CEF细胞中不同时间段JAK/STAT信号通路关键蛋白JAK2和p-JAK2的表达情况;以40μmol/L JAK/STAT信号通路抑制剂Ruxolitinib预处理CEF细胞2 h后,将FAd V-4按MOI 5感染CEF细胞,在感染后不同时间分别收集细胞和上清,采用western blot检测Ruxolitinib处理后FAd V-4感染的CEF细胞中不同时间段JAK/STAT信号通路关键蛋白JAK2和p-JAK2的表达情况;采用q PCR检测Ruxolitinib处理后FAd V-4感染的CEF细胞中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α基因的转录水平;采用ELISA检测Ruxolitinib处理后FAd V-4感染的CEF细胞上清中IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的表达水平。结果显示,与不感染FAd V-4的空白对照细胞相比,FAd V-4感染CEF细胞后IL-6和IL-8基因的转录水平均极显著上调(P<0.01),IL-1β基因的转录水平在后期显著上调(P<0.05),TNF-α基因的转录水平在前期无变化,后期极显著上调(P<0.01);western blot结果显示,与空白对照细胞相比,FAd V-4感染CEF细胞后p-JAK2蛋白的表达水平均极显著升高(P<0.01),且48 h p-JAK2蛋白的表达水平最高。Western blot结果显示,与FAd V-4感染组相比,Ruxolitinib处理后FAd V-4感染的CEF细胞及Ruxolitinib处理的CEF中p-JAK2蛋白的表达水平均极显著降低(P<0.01),Ruxolitinib组与空白对照组无显著差异;q PCR结果显示,与FAd V和空白对照组相比,Ruxolitinib处理后FAd V-4感染的CEF细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8基因的转录水平均极显著上调(P<0.01),TNF-α基因的转录水平显著上调(P<0.05);ELISA结果显示,与FAd V和空白对照组相比,Ruxolitinib处理后FAd V-4感染的CEF细胞中炎症因子IL-8分泌水平极显著上调(P<0.01),TNF-α分泌水平显著上调(P<0.05)、IL-1β和IL-6分泌水平无显著变化,与转录水平结果基本一致。本研究上述结果首次证实FAd V-4可以诱导鸡胚心脏CEF细胞产生强烈的炎症反应,并激活了该CEF细胞中的JAK/STAT信号通路,该研究结果为深入阐明FAd V-4感染心脏细胞的致病机制提供一定的参考依据。