番茄耐盐体细胞变异体的离体筛选

以上海主要栽培番茄品种“鲜丰”的下胚轴作为外植体诱导愈伤组织 ,用 Na Cl进行直接高盐胁迫和逐渐加大盐浓度胁迫筛选。研究结果表明 ,逐渐加大 Na Cl浓度胁迫筛选获得的耐盐性大多属生理适应性 ,直接高盐胁迫筛选才有可能获得真正的耐盐突变体。直接高盐胁迫筛选再生出的 1 2株耐盐植株 ,在 1 5 0 mmol/L Na Cl的盐胁迫下 ,幼苗的成活率可达6 6 % ,而未经胁迫筛选过的原始株成活率则为零。其中 ,2株耐盐突变株能正常开花、结果。其后代在盐胁迫培养基中芽体的生根率。

柑橘抗寒细胞变异体的获得及其抗性遗传稳定性的研究

锦橙（Citrussinensis（L．）Osbeckcv．Jincneng）珠心愈伤组织悬浮细胞通过γ射线诱变与高浓度羟脯氨酸离体选择的方法，获得了抗性细胞系，并再生植株。抗性细胞系及其再生植株比供体（对照）的抗寒性分别提高1．4℃和24℃，连续3年测定结果表明再生植株抗寒性的增强是稳定的。其叶片总DNA的RAPD分析说明供体与变异植株可能在DNA水平上存在细微的差异，冷驯化进一步加强抗性细胞系与再生植株在抗氧化酶SOD、过氧化氢酶（CAT）活性和脯氨酸（Pro）、丙二醛含量上的差异。变异系抗性增强的生理基础涉及Pro代谢外的其他途径，抗氧化酶活性的提高与其抗寒性的增强有关。

玉米抗除草剂体细胞变异体的筛选及植株再生

将玉米优良自交系齐 31 9和N1 0 - 6产生的胚性愈伤组织 ,转移到加有半致死浓度除草剂绿磺隆的培养基上 ,经 3代筛选 ,获得抗除草剂愈伤组织。在加有除草剂的分化培养基上 ,抗性愈伤组织分化出植株。除草剂对愈伤组织的生长与分化有显著影响。再生植株移栽成活后 ,自交结实 ,获得种子。再生植株农艺性状与对照相似。除草剂抗性鉴定结果表明 。

运用α-吡啶羧酸筛选水稻抗稻瘟病细胞变异体的研究

利用α-吡啶羧酸为胁迫因子,研究了花药培养筛选水稻(Oryza sativa L.)抗稻瘟病(Pyricularia oryzae Cav.)细胞变异体的效果。α-吡啶羧酸可抑制水稻花药(粉)愈伤组织的形成与生长,用40mg-L α-吡啶羧酸进行诱导、继代和分化筛选,可获得抗性愈伤组织并再生绿苗,但仅有一半绿苗自然加倍结实,并具备对稻瘟病孢子悬浮液的抗性。经两代选择与鉴定,获得了抗稻瘟病 ZA_1和 ZB_(11)小种、但感 ZG_1小种的变异体2-07和4-091。

抗茎腐病的玉米（Zea maysL．）自交系体细胞变异体选择

用玉米自交系综３、综３１、５００３、Ｐ９－１０（Ｚｅａ ｍｅｙｓ Ｌ）的幼胚所诱导的愈伤组织，在继代繁殖后一部分愈伤组织转移到含有玉米茎腐病的病原菌（Ｆ．ｇｒａｍｉｎｅａｒｕｍ）毒素的培养基中培养并进行变异体选择，现已获得了大量的抗毒素变异体再生植株，并有部分植株移栽成活。

水稻耐亚铁细胞变异体筛选和植株再生

来源于水稻幼胚的液体悬浮培养物，经离体筛选后，获得了４８个耐亚铁细胞系。其中５个细胞系能再生出植株，但再生植株当代和Ｒ２代的结实率极低或不育。细胞水平上耐亚铁稳定性检验表明，耐亚铁细胞系与对照相比，在低浓度亚铁胁迫下，表现出一定程度的耐性；细胞内积累更多的亚铁和总铁。并有某些可溶性细胞质蛋白的变化。但在致死浓度下，耐亚铁细胞系的耐性不稳定，而且随着无选择压力下增殖继代时间延长，耐性逐渐丧失。由此推测：水稻细胞对亚铁胁迫呈诱导性反应，细胞耐亚铁变异属外遗传（ｅｐｉｇｅｎｅｔｉｃ）变异。

细胞粘附分子变异体在结直肠癌中的表达及预后

目的探讨细胞粘附分子变异体(CD44v6)在结直肠癌中的表达及与患者预后的关系。方法应用SP免疫组织化学法检测CD44v6蛋白在120例结直肠癌中的表达。结果CD44v6在结直肠癌中的阳性表达率为31.7%(38/120);CD44v6的阳性表达与淋巴结转移和Dukes’分期有关(P<0.05);有淋巴结转移组CD44v6的阳性表达率比无淋巴结转移组高;且随着Dukes’分期的加深,CD44v6的阳性表达率逐渐增高;CD44v6的表达与结直肠癌患者的生存时间有关(P<0.01),CD44v6阳性表达的患者预后较差。结论CD44v6的表达与结直肠癌淋巴结转移、Dukes’分期和患者生存时间有关。CD44v6可能为影响结直肠癌患者预后的一个重要因素。

非小细胞肺癌中CD_(44)变异体表达及临床意义

目的 探讨CD44V4、V5 、V6 与非小细胞肺癌 (Non smallcelllungcancer ,NSCLC)患者的淋巴结转移及预后的关系。方法 采用免疫组化方法观察CD44V4、V5 、V6 在 76例原发性非小细胞肺癌组织及转移淋巴结中的表达。结果 在肺癌中CD44V4、V5 、V6 表达鳞癌多于腺癌 (P <0 0 1 ) ;在正常肺组织中无表达。淋巴结转移病例中CDV6 3 3 / 3 6(91 % )表达阳性 ,在 2 5例转移淋巴结中 2 4例表达阳性 (96% )。CD44V6 在Ⅲ～Ⅳ期患者表达高于Ⅰ～Ⅱ期患者 (P <0 0 1 )。结论 肺癌组织CD44V6 阳性表达对肿瘤的组织病理分型、淋巴结转移及临床分期方面有一定的指导意义。

白细胞介素7剪接变异体蛋白的表达、复性和纯化

目的表达、复性和纯化重组人白细胞介素7剪接变异体蛋白(interleukin-7 splice variants,IL-7splice variants),为下一步功能研究奠定基础。方法在IL-7剪接变异体(IL-7δ4/5以及IL-7δ3/4)cDNA克隆的基础上进行亚克隆,插入细菌表达载体pET-21b中,构建相应的原核表达载体,阳性克隆测序,证实其构建成功,转化入大肠杆菌BL21(DE3)中,对各蛋白表达条件进行优化、复性及纯化,利用Western blot鉴定重组蛋白。结果各表达蛋白与预期相对分子质量(10.3 ku、9.3 ku)相符,纯化后蛋白纯度高达95%以上,并经免疫印迹鉴定证实表达的蛋白为IL-7δ4/5和IL-7δ3/4。结论成功获得高纯度的IL-7剪接变异体复性蛋白。

浆细胞瘤变异体易位1和MYC基因在泛癌中的表达及生存期预测价值分析

目的:探讨浆细胞瘤变异体易位1(plasmacytoma variant translocation 1,PVT1)和MYC基因在泛癌组织中的表达水平,及其对患者生存期的预测价值。方法:从癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库获取31种共计10016例癌症患者的临床资料以及转录组RNA测序数据,其中23种癌症组织标本有相应的癌旁正常组织对照。应用t检验比较PVT1、MYC基因在23种癌症组织与癌旁正常对照样本中的表达水平差异。采用Spearman相关性分析PVT1与MYC基因在31种癌症中表达的相关性。应用Kaplan-Meier方法和Cox比例风险模型,分别在31种癌症中分析PVT1、MYC基因的表达水平与患者总体生存期的关系。结果:PVT1的表达水平在19种癌症组织中显著增高(P<0.05);在2种癌症组织中显著降低(P<0.05)。MYC的表达水平在7种癌症组织中显著升高(P<0.05);在6种癌症组织中降低(P<0.05)。相关性分析发现,在约87%(27/31)的癌症类型中,PVT1与MYC基因的表达水平呈正相关(Rho>0,P<0.01)。总体生存期分析表明,PVT1相对高表达在膀胱尿路上皮细胞癌、乳腺浸润癌、肾上腺皮质癌、肾透明细胞癌、乳头状肾细胞癌、低级别胶质瘤、前列腺癌、睾丸生殖细胞肿瘤以及葡萄膜黑色素瘤中与较短的总体生存期显著相关(log-rank P<0.05);MYC基因相对高表达在肾上腺皮质癌、膀胱尿路上皮细胞癌、宫颈鳞状细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、乳头状肾细胞癌、卵巢浆液性囊腺癌、胰腺癌以及肉瘤中与较短的总体生存期显著相关(log-rank P<0.05),而在低级别胶质瘤及直肠腺癌中,MYC基因相对高表达组的总体生存期显著长于相对低表达组(log-rank P<0.05)。结论:PVT1在癌症组织中表达升高相比MYC基因而言更具有普遍性。在多种癌症中,PVT与MYC基因的表达相关,提示两者在功能调控中可能存在联系。此外,在9种癌症中,PVT1相对高表达患者的总体生存期较短,而MYC基因的表达情况在不同癌症中对患者总体生存期的影响存在差异。

跨膜丝氨酸蛋白酶2-成红细胞特异性转化基因相关基因、成红细胞特异性转化基因变异体1及成红细胞特异性转化基因变异体4在前列腺癌中的表达及临床意义

目的分析跨膜丝氨酸蛋白酶2(TMPRSS2)-成红细胞特异性转化基因相关基因(ERG)、TMPRSS2-成红细胞特异性转化基因变异体1(ETV1)、TMPRSS2-成红细胞特异性转化基因变异体4(ETV4)在前列腺癌中的表达及临床意义。方法2018年4月至2020年9月我院收治的82例前列腺癌患者,采用免疫组化法检测癌组织及癌旁正常组织中TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4表达。分析上述因子表达与前列腺癌临床病理特征的关系及诊断前列腺癌的价值。结果前列腺癌组织中TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4阳性表达率均高于癌旁正常组织(P<0.05)。临床分期C+D、Gleason评分≥5分者TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4阳性表达率高于临床分期A+B、Gleason评分<5分(P<0.05)。RTMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4联合检测曲线下面积(AUC)、敏感度、特异度分别为0.814、0.925、0.865,均高于各项指标单独检测(P<0.05)。结论TMPRSS2-ERG、TMPRSS2-ETV1、TMPRSS2-ETV4在前列腺癌患者中呈过度表达,通过联合检测上述因子对前列腺癌的诊断与鉴别诊断有良好的应用价值。

NS398对SGC7901胃癌细胞生长及CD44V6、MMP-9基因表达的影响

目的探讨COX-2特异性抑制剂NS398对SGC7901胃癌细胞体外生长及CD44V6、MMP-9基因表达的影响。方法体外培养SGC7901胃癌细胞,应用免疫细胞化学方法,检测SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9蛋白表达水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测NS398对胃癌细胞PGE2分泌水平的影响,MTT法检测NS398对SGC7901胃癌细胞体外生长的抑制效应,半定量RT-PCR检测NS398作用后胃癌细胞株中CD44V6、MMP-9基因表达水平的变化。结果 SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9呈阳性表达,NS398可显著抑制SGC7901胃癌细胞PGE2的分泌,200μmol/L NS398抑制率达64.3%,NS398对胃癌细胞生长抑制作用呈时间及浓度依赖性;NS398作用24 h后胃癌细胞中CD44V6、MMP-9基因表达水平下降,200μmol/L NS398对CD44V6、MMP-9基因表达抑制率分别为45.7%、43.6%。结论 SGC7901胃癌细胞中COX-2、CD44V6、MMP-9呈阳性表达,NS398可有效抑制SGC7901胃癌细胞PGE2的分泌和胃癌细胞生长,并可抑制与胃癌转移相关的CD44V6、MMP-9基因的表达。

CD44v6、基质金属蛋白酶及人类绒毛膜促性腺激素联合检测对葡萄胎恶变的诊断价值

目的:探讨细胞粘附分子变异体6(CD44v6)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)以及人类绒毛膜促性腺激素(HCG)联合检测对葡萄胎恶变的诊断价值。方法:选取30例葡萄胎恶变患者纳入观察组,另选取30名正常妊娠行人工流产者纳入对照组,两组孕周均在12周之内;检测两组的HCG、CD44v6、MMP-2及MMP-9水平,并对检测结果进行比较。结果:观察组与对照组相比,葡萄胎恶变患者的HCG、CD44v6、MMP-2及MMP-9水平较高,差异有统计学意义(t=2.757,t=3.384,t=3.386,t=2.451;P<0.05)。结论:葡萄胎恶变患者的血清HCG、CD44v6、MMP-2以及MMP-9水平与正常妊娠行人工流产者相比较高,联合检测对临床葡萄胎恶变的诊断具有指导意义。

宫颈鳞状细胞癌组织中CD44v6、LYVE-1表达与患者临床病理特征及预后的关系

目的探讨白细胞分化抗原44号拼接变异体v6(CD44v6)、人淋巴内皮透明质酸受体-1(LYVE-1)在宫颈鳞状细胞癌组织中的表达与患者临床病理特征及预后的关系。方法收集宫颈鳞状细胞癌患者宫颈组织78例份、宫颈鳞状上皮内病变患者宫颈组织47例份和正常宫颈组织32例份,免疫组化(SP法)检测各组宫颈组织中CD44v6、LYVE-1蛋白的表达。分析癌组织CD44v6、LYVE-1蛋白的表达与宫颈鳞状细胞癌患者临床病理特征的关系。绘制生存曲线,分析癌组织CD44v6、LYVE-1表达与宫颈鳞状细胞癌患者预后的关系。结果 CD44v6、LYVE-1蛋白表达比较:正常宫颈组织<宫颈鳞状上皮内病变宫颈组织<宫颈鳞状细胞癌宫颈组织(P均<0.05)。癌组织CD44v6、LYVE-1表达均与组织学分级、肌层浸润深度、淋巴管浸润及淋巴结转移等相关(P均<0.05),与患者年龄、肿瘤直径无关(P均>0.05); CD44v6的表达与临床FIGO分期有关(P<0.05)。CD44v6与LYVE-1表达呈正相关(rs=0.408,P=0.000)。与CD44v6、LYVE-1表达阴性患者比较,CD44v6、LYVE-1表达阳性患者生存率低、生存时间短(P均<0.05)。结论 CD44v6、LYVE-1在宫颈鳞状细胞癌组织中过量表达,且均与患者不良预后相关,二者可能协同参与病情进展。

磷酸酯酶基因、黏着斑激酶及白细胞分化抗原44拼接变异体6在结直肠癌中表达及其相关性研究

目的：探讨磷酸酯酶基因（PTEN）、黏着斑激酶（FAK）及白细胞分化抗原44拼接变异体6（CD44v6）在结直肠癌组织中的表达及相关性。方法收集2012年8月至2013年8月汕头大学医学院第二附属医院普通外科行结直肠癌根治手术且经病理证实的117例患者的临床资料及手术标本。获取117例患者的结直肠癌组织作为观察组；另外筛选距离肿瘤边缘大于10 cm且经病理证实为正常结肠黏膜的组织块共60例作为对照组。采用免疫组织化学染色、Western blot及反转录PCR（RT-PCR）方法联合检测结直肠癌组织及正常结肠黏膜组织中PTEN、FAK及CD44v6的表达特点，分析三者与肿瘤特征的关系及三者的相关性。结果结直肠癌组织中PTEN的阳性率显著低于对照组[20．5％（24／117）比76．7％（46／60），P＜0．01]，FAK及CD44v6的阳性率显著高于对照组[67．5％（79／117）比21．7％（13／60），70．9％（83／117）比28．3％（17／60），均P＜0．01]。结直肠癌组织中PTEN、FAK及CD44v6的表达与TNM分期、淋巴结转移、是否有癌结节及脉管浸润密切有关；相关分析显示， PTEN、FAK及CD44v6的表达并无相关性。结论结直肠癌组织中PTEN、FAK及CD44v6异常表达，但是三者不具有协同作用，三种蛋白可能是通过各自的通路发挥促肿瘤进展的作用。

小黑麦单倍体愈伤组织(n=28)耐碱和耐盐变异体的筛选与鉴定

在小黑麦单倍体愈伤组织中,自然发生的细胞变异体,其变异频率对耐1%NaCl来说大约是0.86×10-6,对耐pH10是0.81×10-6。经过诱变剂（EMS）处理后,其突变频率可提高1-2倍。筛选出来的变异体约有23-33%是不稳定的。有2/3或更多的变异体是比较稳定的,其抗性不因培养条件的改变而丧失。特别是从耐pH 10的TR4细胞系中分化出来的再生植株,以及由这些植株的外植体重新诱导出的愈伤组织都依旧保持了这种抗性。

错配修复蛋白1、错配修复蛋白2及细胞黏附分子变异体在卵巢上皮性癌中的表达及意义

目的探讨人类错配修复蛋白1（MLH1）、错配修复蛋白2（MSH2）及细胞黏附分子变异体（C044v6）在卵巢上皮性癌中的表达及临床意义。方法应用免疫组织化学S-P法检测MLH1、MSH2及CD44v6在60例卵巢上皮性癌、35例卵巢交界性肿瘤和35例卵巢良性肿瘤组织中的表达。结果MLH1在卵巢上皮性癌和交界性肿瘤中的阳性表达率分别为43．33％（26／60）、48．57％（17／35），均明显低于于良性肿瘤阳性表达率的91．43％（32／35），差异有统计学意义（x2=20．16、15．31，均P〈0．05）。卵巢上皮性癌和交界性肿瘤MSH2的阳性表达率分别为38．33％（23／60）、51．43％（18／35），均明显低于良性肿瘤阳性表达率的88．57％（31／35），差异有统计学意义（x2=22．74、11．49，均P〈0．05）。MLH1的表达率在卵巢上皮性癌有无淋巴结转移组、高级别与低级别组比较有差异，但差异无统计学意义（X2：2．24、1．19，均P〉0．05）。MSH2的表达下调与卵巢上皮性癌的分化程度、有无淋巴结转移及临床分期密切相关（X2=5．22、7．86、4．38，均P〈0．05）。CD44v6在卵巢上皮性癌、交界性肿瘤和良性肿瘤中阳性表达率分别为78．33％（47／60）、54．29％（19／35）、17．14％（6／35），差异有统计学意义（0=33．55、10．52，均P〈0．05）。CD44v6与卵巢上皮性癌有无淋巴结转移及临床分期密切相关（X2=6．10、5．88，均P〈0．05）。结论MLH1、MSH2和CD44v6在卵巢上皮性癌的发生、进展、侵袭中起到重要调控作用，并是判断其预后的重要参考指标。

E-cadherin,CD_(44)变异体6在子宫腺肌病发病机制的研究

目的检测与分析上皮细胞钙粘蛋白(上皮钙粘附素,E-cadherin),CD44变异体6(CD44varient6,CD44v6)在子宫腺肌病(adenomyosis,AM)在位内膜及异位内膜细胞中的表达情况及相关性,探讨其在AM发病中的作用。方法采用免疫组化Envision法检测正常子宫内膜,AM的在位内膜、异位内膜组织中E-cadherin,CD44v6的表达,采用SPSS13.0统计软件对实验数据进行统计学分析。结果E-cadherin在AM在位内膜和异位内膜的表达,较正常子宫内膜弱,差异有显著意义(P<0.05);CD44v6在AM在位内膜和异位内膜的表达,较正常子宫内膜强,差异有显著意义(P<0.05)。AM异位内膜和在位内膜中,E-cadherin和CD44v6的表达,呈负相关(P<0.05);正常内膜中,E-cadherin和CD44v6的表达无明显相关性(P>0.05)。结论E-cadherin,CD44v6在AM在位内膜及异位内膜细胞中表达异常,提示其可能在AM的发生发展中起重要作用;E-cadherin,CD44v6在AM在位内膜及异位内膜细胞中表达有相关性,提示二者在AM的发生发展中有协同作用。

胶质瘤组织中CD44V9的表达及临床意义

目的探讨胶质瘤组织中细胞粘附分子CD44变异体9(CD44V9)的表达水平及临床意义。方法收集2012年1月至2016年12月手术切除并经病理证实的胶质瘤组织92例和正常脑组织42例,采用实时荧光定量PCR(QPCR)检测上述组织的CD44V9 mRNA水平,分析胶质瘤组织中CD44V9 mRNA水平与临床病理特征(性别、年龄、肿瘤大小、病理类型、KPS评分、WHO分级、囊性改变、肿瘤位置、切除范围和辅助治疗)的关系,根据随访数据采用Kaplan-Meier法分析CD44V9 mRNA水平与预后的关系。结果 92例胶质瘤组织中的CD44V9 mRNA水平为2.519±0.995,高于42例正常组织的1.158±0.240,差异有统计学意义(P<0.001)。胶质瘤组织中的CD44V9水平与患者的性别、年龄、KPS评分、肿瘤位置、切除范围和辅助治疗均无关(P>0.05),而与肿瘤大小、病理类型、WHO分级和囊性改变有关(P<0.05)。CD44V9低表达组的中位无复发生存时间和总生存时间分别为36.0个月(95%CI:28.053～43.947个月)和46.0个月(95%CI:39.900～52.100个月),均高于高表达组的22.0个月(95%CI:19.510～24.490个月)和27.0个月(95%CI:24.154～29.846个月),差异有统计学意义(P<0.05)。结论胶质瘤组织中CD44V9水平升高,且与肿瘤大小、病理类型、WHO分级和囊性改变有关。CD44V9高表达者的预后较差,其可能参与了胶质瘤的发生、发展,对胶质瘤的诊治及预后预测有一定意义。

VEGF、CD44v6、MMP-2在食管癌中的表达及其与淋巴结转移的相关性

目的研究食管癌患者的癌组织发生淋巴结转移与病变组织中血管内皮生长因子(VEGF)、细胞的粘附因子C4D4的变异体v6(CD44v6)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)水平的关系。方法选取2011年3月至2014年9月到我院肿瘤科进行治疗的83例食管癌患者作为食管癌组,所有患者均经术后HE切片病理检查证实,另选取21例术前诊断为食管癌但术后经组织学检查结果为良性者的食管黏膜标本作为良性组,比较两组患者中VEGF、CD44v6和MMP-2的阳性水平,并对不同表达食管癌患者的淋巴结是否发生转移进行分析,探讨他们的相关性。结果 VEGF、CD44v6和MMP-2在食管癌组患者病变组织标本中的阳性表达率分别为77.11%(64/83)、73.49%(61/83)和59.04%(49/83),而在良性组患者食管组织标本中的阳性表达率分别为14.29%(3/21)、23.81%(5/21)和14.29%(3/21),三者在食管癌组患者病变组织标本中的阳性表达率均显著高于良性组,经比较差异均有统计学意义(P<0.05);VEGF、CD44v6和MMP-2在发生了淋巴结转移的食管癌患者中的阳性率依次为85.48%(53/62)、82.26%(51/62)和66.13%(41/62),而在没有发生淋巴结转移的患者中的阳性率依次为52.38%(11/21)、47.62%(10/21)和38.10%(8/21),发生淋巴结转移的食管癌患者病变组织标本中三者的阳性表达率显著高于没有发生转移者,经比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论 VEGF、CD44v6和MMP-2在食管癌患者癌变组织中的表达水平与其淋巴结是否发生转移具有一定的关系,其对食管癌患者的早期正确诊断、治疗以及预后效果评估具有重要的意义。