细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1和p27kip1在老年乳腺浸润性导管癌中的表达及临床意义

乳腺癌是女性发病率最高的恶性肿瘤〔1〕,欧美国家中的老年患者(60岁以上)约占49%〔2〕。细胞在基因水平上失去对本身生长的正常调控,生长周期失调紊乱,可发生肿瘤,p27 kip1作为抑癌基因,负性调控细胞周期,表达水平与细胞增殖程度紧密关联。CKS1正性调节细胞周期,是一种癌基因,能够促进肿瘤发生,在肝癌、乳腺癌、胃癌等癌组织中表达增高〔3,4〕。

子宫内膜癌组织CKS1B mRNA水平表达与临床病理学特征及预后的相关性研究

目的研究细胞周期依赖蛋白酶调节亚基1B(cyclin-dependent kinases regulatory subunit 1B,CKS1B)与子宫内膜癌(endometrial carcinoma,EC)患者临床病理特征及预后的相关性。方法下载癌症基因组图谱(the Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库和基因型-组织表达(genotype-tissue expression,GTEx)数据库中CKS1B的表达谱数据和临床数据,分析CKS1B在子宫内膜癌中的表达及与临床病理特征和预后的关系。通过UALCAN数据库验证CKS1B蛋白表达水平;Logistics回归分析CKS1B表达与临床病理参数的关系;COX回归分析和Kaplan-Meier分析临床病理参数与子宫内膜癌预后的相关性;分析TCGA数据库中CKS1B的共表达基因并富集分析。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测CKS1B mRNA在Ishikawa和HEC-1-A细胞系中的表达。蛋白质免疫印迹(Western Bolt,WB)检测CKS1B蛋白在子宫内膜癌组织和癌旁组织的表达。结果CKS1B mRNA和蛋白在子宫内膜癌中明显高于正常子宫内膜,差异具有统计学意义(P<0.05)。CKS1B mRNA表达水平与患者FIGO分期(F=42.994)、组织学分级(F=70.350)、组织学类型(F=87.341)和年龄(F=40.097)密切相关(均P<0.05)。Kaplan-Meier法显示CKS1B m RNA高表达组患者总生存率更低(Log-rankχ^(2)=1.175,P<0.01)。多因素COX分析显示CKS1B表达水平(HR=1.856,95%CI:1.154~2.985)、FIGO分期(HR=3.065,95%CI:1.906~4.926)为子宫内膜癌预后的独立风险因素(P<0.05)。GO分析显示CKS1B主要参与细胞核分裂、染色体分离。KEGG分析显示主要在细胞周期、剪接体及DNA复制通路富集。进一步验证与人子宫内膜上皮细胞比较CKS1B mRNA在Ishikawa和HEC-1-A细胞中高表达(F=44.560,P<0.001),CKS1B蛋白在子宫内膜癌组织中高表达(t=14.900,P<0.001)。结论CKS1B在子宫内膜癌中表达上调且与患者的临床病理因素及预后密切相关,可能通过细胞周期调控参与子宫内膜癌发生、发展,有望成为子宫内膜癌诊断和预测预后的新指标。

HO-1活性改变对肝癌细胞周期调控因子CKS1和Cyclin D的影响

目的探讨血红素加氧酶(HO)-1活性改变对肝癌细胞株Hep G2细胞周期蛋白(Cyclin)依赖性激酶调节亚基(CKS)1和Cyclin D的影响。方法采用靶向抑制HO-1的小分子RNA(siRNA)沉默细胞癌Hep G2细胞HO-1基因的表达,应用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)测定Hep G2细胞的增殖情况,应用RT-PCR法测定HO-1、CKS1和Cyclin D mRNA,应用Western印迹检测HO-1、CKS1和Cyclin D蛋白表达水平。结果 MTT实验结果显示,HO-1 siRNA转染组细胞转染后24 h和48 h的吸光度较空白对照组显著降低(P<0.01),HO-1 siRNA转染组细胞转染后48 h的HO-1、CKS1和Cyclin D mRNA水平较空白对照组显著降低(P<0.01),HO-1 siRNA转染组细胞转染后48 h的HO-1、CKS1和Cyclin D蛋白水平较空白对照组显著降低(P<0.01)。结论 HO-1的活性降低可抑制肝癌Hep G2细胞的增殖,其调控作用可能通过降低Hep G2细胞CKS1和Cyclin D表达而实现。

miR-936通过靶向CKS1诱导细胞周期停滞并抑制神经胶质瘤细胞增殖

目的探讨微小RNA-936(miR-936)通过靶向细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1(CKS1)诱导细胞周期停滞并抑制神经胶质瘤细胞增殖行为及其作用机制。方法流式细胞术检测miR-936对胶质瘤细胞细胞周期的影响;细胞增殖-毒性检测试剂盒(CCK-8)和集落形成实验检测miR-936对胶质瘤细胞的增殖行为的影响,miR-936对细胞周期蛋白和通路蛋白的影响情况,双荧光素酶实验检测miR-936和CKS1在神经胶质瘤细胞中的相互作用,miR-936对裸鼠体中的肿瘤生长及肿瘤中的Ki67蛋白水平的影响。结果 miR-936的表达下调可以调控胶质瘤细胞细胞周期抑制胶质瘤细胞增殖行为,抑制miR-936的表达可以抑制胶质瘤细胞的增殖行为,miR-936的异位表达显着抑制U87细胞中的细胞分裂周期蛋白2(CDC2),细胞分裂蛋白激酶2(CDk2),细胞分裂蛋白激酶4(CDK4)和细胞周期蛋白E1(Cyclin E1)的表达,miR-936能与CKS1的3'UTR特异性结合,调控CKS1的表达活性;miR-936的表达下调可以抑制裸鼠体内胶质瘤细胞的生长,并降低Ki67的表达水平。结论 miR-936在胶质瘤的发生发展过程中起重要作用,通过靶向调节CKS1的表达影响胶质瘤细胞的增殖和迁移。

2型糖尿病患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因及其剪接异构体的表达水平和临床意义

目的:探讨2型糖尿病(T2DM)患者外周血淋巴细胞中细胞周期蛋白依赖性激酶5调节亚基相关蛋白1类似物1(CDKAL1)基因及其剪接异构体的表达水平,并探讨其临床意义。方法:收集65例糖尿病患者,其中T2DM患者20例(T2DM组)、糖尿病肾病(DN)患者23例(DN组)和糖尿病视网膜病变(DR)患者22例(DR组),并选择同期健康体检者28名(健康对照组)。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测各组研究对象外周血淋巴细胞中CDKAL1基因及其2种剪接异构体CDKAL1-X1和CDKAL1-X2表达水平,分析其表达与T2DM及其糖尿病微血管并发症的关系。结果:与健康对照组比较,T2DM组患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因表达水平升高(Z=4.705,P<0.01),CDKAL1-X1表达水平升高(Z=2.698,P=0.007)。与健康对照组比较,DR组和DN组患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因和CDKAL1-X1表达水平升高(P<0.05);DR组患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因表达水平高于DN组(P<0.05)。结论:T2DM患者外周血淋巴细胞中CDKAL1基因和CDKAL1-X1表达水平升高可能参与糖尿病及其并发症的发生发展。

人肝细胞癌组织细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1的表达及其预后意义

肝细胞癌（HCC）居全球癌症病死率第三，在亚洲国家发病率特别高，尽管对本病的治疗已取得一些进展，预后仍不尽人意，5年生存率仅为12％左右[1]。细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1（CKS1）是高度保守的细胞周期调节蛋白Sucl／Cks蛋白家族成员之一，

CKS1和CyclinD1在老年肝细胞癌中的表达

肝细胞癌（HCC）是最常见的肝脏原发恶性肿瘤，尽管手术切除和肝移植已经显著改善小肝癌及无转移肝癌患者的生存时间，但是晚期肝癌患者的预后仍然较差。细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1（CKS1）是高度保守的细胞周期调节蛋白SUCl／CKS蛋白家族成员之一，在胃癌、乳腺癌和肝癌等多种肿瘤组织中高表达。细胞周期蛋白D1（CyclinD1）在乳腺癌、结肠癌和肝癌组织中表达升高，其表达失调会导致细胞周期异常从而促进肿瘤发生。本研究分析CKS1和CyclinD1蛋白在HCC及对应癌旁组织中的表达水平及其与临床病理特征之间的相关性。

乳腺癌组织中CKS1和CyclinD1的表达及相关分析

目的:探讨细胞周期蛋白依赖性激酶调节亚基1(cyclin kinase subunit1,CKS1)和细胞周期蛋白D1(CyclinD1)在乳腺癌组织的表达及意义。方法:采用免疫组化SP法检测105例乳腺癌组织中CKS1和CyclinD1的表达,并同时检测100例乳腺纤维腺瘤作为对照,分析其在乳腺癌组织中的表达及临床意义。结果:CKS1和CyclinD1在乳腺癌组织中的阳性率分别为80.9%(85/105)和85.7%(90/105),在乳腺纤维腺瘤中的阳性率分别为22%(22/100)和19%(19/100)。乳腺癌中两基因蛋白的阳性表达与淋巴管侵犯、淋巴结转移有关;乳腺癌中两基因蛋白的阳性表达均明显高于乳腺纤维腺瘤(P<0.05);乳腺癌组织中CKS1与CyclinD1的阳性表达呈正相关(r=0.677,P<0.05)。结论:CKS1和CyclinD1在乳腺癌组织中的表达较对照组乳腺纤维腺瘤明显升高,并且与淋巴管侵犯、淋巴结转移呈正相关,提示检测2种蛋白的表达对乳腺癌的临床治疗及预后预测具有一定的意义。

华蟾毒精靶向KATNB1抑制肿瘤细胞微管形成和有丝分裂

华蟾素是临床广泛应用的抗肿瘤中药,但其抗肿瘤分子机制尚未完全清楚。本研究旨在阐明华蟾素活性成分华蟾毒精(cinobufagin,CBG)抑制肿瘤细胞有丝分裂的靶标及分子机制。应用碘化丙啶(PI)DNA染色法分析CBG对肿瘤细胞周期的作用;通过胸苷同步化细胞至有丝分裂时期,微管及中心粒染色法表征CBG对肿瘤细胞有丝分裂的影响;采用体外微管聚合实验、微管单体/聚体分离实验及微管α-tubulin荧光标记法从分子和细胞水平评价CBG对微管聚合的作用;通过基因编辑技术CRISPR/Cas9建立微管切割蛋白Katanin调节亚基B1(KATNB1)敲除的肿瘤细胞,CCK-8法考察CBG对野生型和敲除细胞抑制作用的差异;利用化学生物学的技术方法研究CBG和KATNB1的结合;采用Western blot及实时定量PCR检测CBG对KATNB1蛋白和mRNA的调控。结果发现,CBG阻滞结肠癌HCT116细胞周期于G2/M期;诱导中心粒异常增生,抑制肿瘤细胞的有丝分裂;体内外的微管形成实验表明CBG显著抑制微管蛋白聚合;KATNB1敲除后缓解了CBG对HCT116细胞的抑制作用,表明KATNB1是CBG抗肿瘤的重要靶标;进一步发现CBG与KATNB1结合并减少其蛋白水平,KATNB1突变能阻断两者结合及CBG的这种作用。以上结果表明,CBG靶向微管切割蛋白KATNB1抑制微管聚合从而抑制肿瘤细胞有丝分裂。