p16β基因重组腺病毒质粒的构建及对喉癌细胞的作用

目的探讨野生型p16β对体外喉癌H ep-2细胞周期信号传导的干预作用。方法以重组腺病毒为载体,构建p 16β的重组腺病毒A dE asy-GFP-p 16β质粒,并在293细胞中包装、纯化。将已纯化的重组腺病毒A dE asy-GFP-p 16β在体外转染H ep-2喉癌细胞,采用M TT实验、流式细胞术(FCM)、免疫组化、W estern b lot等实验手段检测H ep-2细胞的抑制/杀伤作用及其细胞周期信号、DNA含量、细胞凋亡率的变化;检测P 16蛋白的表达和H ep-2细胞的超微结构变化。结果本研究成功地构建和制备了高滴度的A dE asy-GFP-p 16β重组腺病毒,并高效地转移到H ep-2细胞内和表达P 16蛋白,有效地抑制了H ep-2细胞的生长。被转染的H ep-2细胞被有效地阻滞在G 0/G 1期,提高了转染细胞的凋亡率。结论重组腺病毒A dE asy-GFP-p 16β能高效感染H ep-2细胞,表达P 16蛋白;有效抑制H ep-2细胞增殖;干预H ep-2细胞周期的信号传导机制和细胞周期,诱导凋亡,从而抑制肿瘤细胞增殖活性。