细胞周期检测点激酶Chk1和Chk2在急性白血病骨髓单个核细胞中表达的研究

目的 探讨细胞周期检测点激酶 1,2 (Chk1,2 )在急性白血病中表达的意义。方法 用RT PCR方法、免疫组织化学方法及共聚焦显微镜检测Chk1和Chk2的mRNA和蛋白在白血病细胞株K5 6 2及急性白血病骨髓单个核细胞中的表达。结果 Chk1和Chk2的mRNA水平在急性白血病与增生性贫血之间无显著差异 ,Chk1和Chk2在K5 6 2细胞及白血病骨髓单个核细胞的细胞质和细胞核中均有表达 ,Chk1蛋白在初治及骨髓幼稚细胞大于 30 %的复治白血病的骨髓单个核细胞中核表达显著增高 ,Chk2蛋白在白血病骨髓单个核细胞中核表达与增生性贫血相比无显著差异。结论 Chk1和Chk2的mRNA水平与白血病发生无关 ,但Chk1蛋白表达水平与白血病发生有一定的相关性 ,Chk1有作为白血病治疗靶点的可能性 ,Chk2蛋白表达水平与白血病发生无关。

细胞周期检测点激酶2在调节DNA损伤以及维持染色体稳定中的作用

细胞周期检测点激酶2(cell cycle checkpoint kinase 2,CHK2)是由抑癌基因CHEK2编码的丝氨酸/苏氨酸激酶,是DNA双链断裂后参与DNA修复应答反应的重要的信号转导蛋白。CHK2被毛细血管扩张性共济失调突变基因(ataxia telangiectasia mutated,ATM)磷酸化后,CHK2可磷酸化多个底物,包括细胞分裂周期25同源物(cell division cycle 25 homolog,Cdc25)、P53、乳腺癌遗传易感基因1(breast cancer 1,early onset,BRCA1)蛋白、E2F-1转录因子和早幼粒细胞白血病(promye-locytic leukemia,PML)蛋白,使细胞周期进程发生阻滞,促进细胞对DNA损伤进行修复或诱导凋亡。细胞在没有DNA损伤时,CHK2也可以将BRCA1磷酸化,这一过程对保持有丝分裂纺锤体组装的正确性以及染色体稳定性十分必要。基于在DNA损伤和细胞有丝分裂中的作用,CHK2有望成为抗肿瘤治疗的靶点。

老年宫颈鳞癌患者癌组织中细胞周期检测点激酶1、2和DNA双链断裂修复蛋白51的表达及意义

目的检测老年宫颈鳞癌患者癌组织中细胞周期检测点激酶(CHK)1、2和DNA双链断裂修复蛋白(RAD)51的表达特征,关注其在不同临床特征中的表达差别及相关性。方法 121例老年宫颈鳞癌患者作为观察组,以70例慢性宫颈炎组织作为对照组,采用免疫组织化学方法检测CHK1、2和RAD51表达及在不同临床病理特征中的表达差别及相关性。结果观察组CHK1、2和RAD51表达阳性率明显高于对照组,观察组CHK1、2和RAD51表达阳性率与肿瘤最大径、淋巴结转移、脉管浸润、累及宫颈管深度和Ki67表达密切相关。观察组CHK1和2、CHK1和RAD51、CHK2和RAD51的表达均呈正相关性。结论老年宫颈鳞癌患者癌组织中CHK1、2和RAD51高表达且具有协同作用,不仅可以加速肿瘤发生和进展,也可能对判断肿瘤生物学行为有重要意义。

细胞周期检测点激酶与肿瘤的关系研究进展

细胞周期检测点激酶(Chk)是一类能在细胞DNA损伤后发挥作用的酶,其可以阻滞细胞周期,直接介导受损DNA的检测和损伤修复,保证DNA复制和染色体的分配质量,维持基因组的保真度。目前Chk主要应用于人类相关肿瘤诊断治疗的研究,已知的可作为相关肿瘤治疗靶点的Chk主要包括Chk1和Chk2等2种。本文综述了近年来Chk及其与人类肿瘤关系的研究进展。

胃腺癌中细胞周期检测点激酶1、2和DNA双链断裂修复蛋白51的表达及意义

目的检测胃腺癌中细胞周期检测点激酶(CHK)1、2和DNA双链断裂修复蛋白(RAD)51的表达,分析三者在不同临床特征中的表达意义及相关性。方法以97例胃腺癌术后组织为观察组,以切端经病理证实为正常胃黏膜组织80例为对照组,应用免疫组化方法检测两组CHK1、CHK2和RAD51表达,分析其表达的特征及相关性。结果观察组CHK1、CHK2和RAD51表达的阳性率明显高于对照组,观察组CHK1、CHK2和RAD51表达与肿瘤的分化程度、浸润深度和临床分期相关,而与淋巴结转移无关。CHK1和RAD51、CHK2和RAD51的表达具有正相关性。结论 CHK1、CHK2和RAD51高表达可以有效促进胃腺癌发生和进展,CHK1、CHK2和RAD51具有一定协同作用。

沉默细胞周期检测点激酶l基因对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨沉默细胞周期检测点激酶l(Chk1)基因对人膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响。方法培养人膀胱癌T24细胞,根据转染物的不同,将细胞分为siRNA-Chk1组、siRNA-对照序列组和空白对照组,利用实时荧光定量PCR检测各组细胞中Chk1基因表达,MTT法检测各组细胞增殖能力,利用流式细胞术检测各组细胞凋亡,利用流式细胞术检测各组细胞周期,利用Western blot法检测各组细胞中Chk1、Cdc25C和Cyclin B1蛋白表达。结果与空白对照组和siRNA-对照序列组比较,siRNA-Chk1组细胞中Chk1 mRNA相对表达量降低(F=43.813,P=0.000);与空白对照组和siRNA-对照序列组比较,siRNA-Chk1组细胞24h、48h、72h和96h时吸光度A值均降低(P<0.05);与空白对照组和siRNA-对照序列组比较,siRNA-Chk1组细胞凋亡率显著增加(F=90.736,P=0.000);流式细胞术检测结果显示,siRNA-Chk1组G0/G1期和S期高于siRNA-对照序列组和空白对照组,而G2/M期低于siRNA-对照序列组和空白对照组(P<0.05);与空白对照组和siRNA-对照序列组比较,siRNA-Chk1组细胞中Chk1、Cdc25C和Cyclin B1蛋白相对表达量均降低(P<0.05)。结论特异性沉默Chk1基因可抑制人膀胱癌T24细胞增殖,加速细胞凋亡,其机制可能与抑制Chk1/Cdc25C/CyclinB1通路而减少细胞G2/M期阻滞有关。

细胞周期检测点激酶l研究进展

本文结合国内外相关文献,分析细胞周期检测点激酶1(Chk1)的结构、功能、生物学机制和在人类肿瘤发生、发展中的作用,总结Chk1抑制剂在肿瘤治疗中的应用现状,为今后治疗肿瘤和抑制肿瘤发生提供新的思路。

细胞周期检测点激酶1、2及T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3和癌胚抗原对子宫肿瘤转归结局的预测价值分析

目的探究细胞周期检测点激酶1(Chk1)、细胞周期检测点激酶2(Chk2)、T细胞免疫球蛋白黏蛋白分子3(Tim3)和癌胚抗原(CEA)在子宫肿瘤病理组织中的表达水平和对肿瘤转归结局的预测价值。方法选取2019年1月至2020年1月吉林大学中日联谊医院收治的160例子宫肿瘤患者为研究对象进行回顾性分析,根据患者病理学检查结果的不同分为良性组(73例)和恶性组(87例)。比较两组患者病理组织和病理周围组织中Chk1、Chk2、Tim3和CEA的阳性表达水平,并采用受试者操作特征(ROC)曲线评估病理组织和病理周围组织Chk1、Chk2、Tim3和CEA水平对肿瘤疾病转归结局的预测价值。结果恶性组患者病理组织与其病理周围组织中Chk1、Chk2、Tim3和CEA阳性表达水平高于良性组(P<0.05)。两组患者病理组织中Chk1、Chk2、Tim3和CEA阳性表达水平高于病理周围组织(P<0.05)。良性组患者转归结局优于恶性组(P<0.05)。ROC分析结果显示,病理组织Chk1、Chk2、Tim3和CEA预测肿瘤转归的曲线下面积(AUC)值分别为0.773、0.780、0.792、0.779,病理周围组织Chk1、Chk2、Tim3和CEA预测肿瘤转归的AUC值分别为0.696、0.677、0.688、0.638。结论Chk1、Chk2、Tim3和CEA可作为子宫肿瘤疾病转归结局的预测指标。

细胞周期检测点激酶与肺癌耐药研究进展

肺癌是最常见的诊断癌症和癌症死亡的主要原因。虽然化疗、放疗、靶向治疗等治疗手段取得了重大进展,但获得性耐药的出现阻碍了临床治疗的疗效。研究表明肿瘤是一类细胞周期调控机制破坏的疾病,其中细胞周期检测点激酶(checkpoint kinase,Chk)发挥着核心的作用,而Chk1和Chk2是检测点中非常重要的蛋白激酶。近年来发现,调控Chk1和Chk2对肺癌的临床治疗和耐药机制有十分重要的意义。本文就细胞周期检测点激酶与肺癌耐药机制进行综述,阐述有效的肺癌治疗靶点和方法。

膀胱癌组织中细胞周期检测点激酶2的表达及其意义

目的 探讨细胞周期检测点激酶2(CHK2)在膀胱癌组织中表达及临床意义。方法 分别采用实时荧光定量PCR技术和免疫组织化学法,检测73例膀胱癌及癌旁组织中CHK2基因和蛋白的表达情况。结果 膀胱癌组织中CHK2mRNA相对表达量低于癌旁组织,膀胱癌组织中CHK2蛋白阳性表达率低于癌旁组织,差异有统计学意义(t=24.146,χ^2=49.936,P<0.05);膀胱癌组织中CHK2mRNA相对表达量和CHK2蛋白阳性表达均与pT分期、淋巴结转移和P53蛋白表达有关(t=2.347~9.217,χ^2=4.171~33.400,P<0.05);CHK2蛋白阴性表达组病人平均生存时间47.25个月,CHK2蛋白阳性表达组病人平均生存时间67.24个月,Log-Rank检验差异有统计学意义(χ^2=4.269,P<0.05)。结论 CHK2在膀胱癌组织中呈低表达,且与病人预后有关。

沉默细胞周期检测点激酶1基因对肺腺癌顺铂敏感性的影响

目的探讨小干扰核糖核酸(siRNA)沉默Chk1基因表达对肺腺癌A549细胞顺铂敏感性的影响。方法分组培养肺腺癌A549细胞,采用Chk1 siRNA沉默细胞中Chk1表达,Western Blot法检测肺腺癌A549细胞中Chk1蛋白表达,流式细胞术分析沉默Chk1基因对肺腺癌A549细胞的细胞周期和细胞凋亡的影响。结果Chk1蛋白在肺腺癌A549细胞中高表达,转染siRNA后Chk1蛋白表达水平明显降低。与对照组比较,顺铂组Chk1蛋白表达减少,但差异无统计学意义( P >0.05);Chk1 siRNA组和联合组Chk1蛋白表达明显降低( P 均<0.05);联合组Chk1蛋白表达明显低于顺铂组( P <0.05)。正常培养的肺腺癌A549细胞以G 0/G 1期为主,顺铂组和联合组肺腺癌A549细胞出现明显的G 2/M期阻滞,S期、G 2/M期细胞比例较对照组和Chk1 siRNA组明显增多( P 均<0.05),而联合组S期、G 2/M期细胞比例又低于顺铂组( P 均<0.05)。联合组、Chk1 siRNA组及顺铂组早期凋亡细胞数和晚期凋亡细胞数均高于对照组( P 均<0.05);联合组与Chk1 siRNA组及顺铂组比较,早期凋亡细胞数和晚期凋亡细胞数增多( P 均<0.05)。结论SiRNA沉默Chk1基因可明显消除顺铂引起的肺腺癌A549细胞G2/M期阻滞,促进细胞凋亡,增强肺腺癌对顺铂化疗的敏感性。

细胞周期检测点激酶1小干扰RNA对顺铂抑制人食管癌EC9706细胞增殖、诱导其凋亡的影响

目的构建pSilencer3．1．细胞周期检测点激酶1（Chkl）小干扰RNA（siRNA）重组载体，观察其对顺铂抑制食管癌EC9706细胞增殖及诱导其凋亡的影响。方法根据Chkl基因序列，设计合成3条ChklsiRNA片段，构建3个pSilencer3．1．ChklsiRNA重组载体，转染人食管鳞癌EC9706，采用实时定量聚合酶链反应（Real—timePCR）检测细胞中ChklmRNA的表达，Westernblot检测Chkl蛋白的表达，选择抑制Chkl表达最强的pSilencer3．1-ChklsiRNA转染EC970624h后，再应用浓度为10μmol／L的顺铂处理EC9706细胞12h，噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖，原位末端转移酶标记（TUNEL）法及流式细胞术检测各组细胞凋亡，同时设顺铂单独处理组和正常对照组。结果pSilencer3．1-ChklsiRNA转染食管癌EC9706细胞，人食管癌EC9706细胞中ChklmRNA及蛋白（siRNAl：1．828±0．077，siRNA2：1．801±0．072，siRNA3：1．833±0．079，未处理的EC9706细胞2．793±0．086，对照siRNA组2．724±0．084）的表达均减弱，且差异均有统计学意义（P〈0．05），并增强顺铂对人食管癌EC9706细胞增殖的抑制作用[ChklsiRNA＋顺铂组、顺铂组及正常对照组细胞生长抑制率分别为（24．67±0．54）％、（13．56±0．28）％及（1．93±0．12）％]及对细胞凋亡指数[ChklsiRNA＋顺铂组、顺铂组及正常对照组分别为（11．76±1．02）％、（19．97±1．23）％及（3．76±0．54）％]的诱导作用（P〈0．05）。结论成功构建的pSilencer3．1一ChklsiRNA重组载体，其可能通过抑制Chkl基因的表达，增强顺铂抗肿瘤的敏感性。

细胞周期检测点激酶1在肝细胞癌中的表达及意义

目的：探讨细胞周期检测点激酶1（Chk1）在肝细胞癌（肝癌）中的表达及其对肝癌侵袭能力的影响。方法标本来源于2005年6月至2010年6月在广州医科大学附属肿瘤医院行根治性肝切除术的127例患者的肝癌及癌旁组织。所有患者均签署知情同意书，符合医学伦理学规定。其中男116例，女11例；年龄23～77岁，中位年龄50岁。采用免疫组织化学方法检测肝癌和癌旁组织中Chk1表达，并分别采用Huh7和MHCC-97H肝癌细胞进行Transwell细胞侵袭实验。实验分为两组，Chk1抑制剂组（抑制组）加入Chk1小分子抑制剂G？6976，对照组加入0.1%二甲基亚砜（DMSO）。观察肝癌和癌旁组织中Chk1的表达情况，以及Chk1表达与临床病理学参数的关系。两组穿膜细胞数比较采用t检验，率的比较采用χ2检验。结果肝癌组织Chk1阳性率为80.3%（102/127），明显高于癌旁肝组织的15.0%（19/127）（χ2=108.700，P〈0.05）。肿瘤数目多发、无肿瘤包膜、术后早期复发的患者肝癌组织中Chk1高表达（χ2=6.289，4.713，5.039；P〈0.05）。抑制剂组Huh7和MHCC-97H肝癌细胞的穿膜细胞数分别为（127±8）、（136±10）个，对照组相应为（174±11）、（188±13）个，抑制组明显低于对照组（t=-3.402，-3.136；P〈0.05）。结论肝癌组织中存在Chk1高表达，Chk1高表达与肝癌的侵袭和转移有关，Chk1抑制剂可有效抑制肝癌细胞的侵袭能力。

细胞周期检测点激酶1的研究进展

细胞周期检测点激酶1(checkpoint kinase 1,Chk1)是一种进化上高度保守的蛋白质激酶,在S期、G_2/M检测点调控细胞周期的进程。受损的DNA可活化Chk1,引起细胞周期阻滞,使受损的DNA得以修复;若损伤广泛而无法修复时则诱导凋亡,从而维持基因组的完整性和稳定性。Chk1缺失的肿瘤细胞表现出多重缺陷,如:细胞增殖缓慢、细胞周期检测点的反应消失、对DNA损伤剂的敏感性增加。由于Chk1的抗损伤作用,Chk1在肿瘤的发生发展、凋亡和耐药机制中起重要作用。

细胞周期检测点激酶1在胃腺癌组织中的表达及意义

目的探讨细胞周期检测点激酶1(Chk1)在胃腺癌组织中的表达及其意义。方法采用免疫组化、原位杂交方法检测80例胃腺癌组织和80例正常胃黏膜组织中Chk1蛋白及mRNA的表达,并分析Chk1表达与胃癌临床病理参数的关系。结果胃腺癌组织和正常胃黏膜组织中Chk1蛋白阳性表达率分别为78.75%(63/80)和45.00%(36/80),两组相比,差异有显著性(P<0.05)。Chk1mRNA在胃腺癌组织和正常胃黏膜组织中的阳性表达率分别为82.50%(66/80)和40.00%(32/80),两组差异具有统计学意义(P<0.05),Chk1蛋白及mRNA表达与胃癌浸润和淋巴结转移有关(P<0.05)。结论 Chk1表达与胃腺癌发生、发展密切相关。

细胞周期检测点激酶1在原发性肝癌中的表达及其与肝癌的相关性

原发性肝细胞癌（HCC）是常见的恶性肿瘤之一，发病率高。细胞周期检测点激酶1（Chk1）是细胞周期检测点中重要关卡激酶之一，Chk1磷酸化而活化，有利于肿瘤细胞修复受损的DNA，避免凋亡，与肿瘤的发生发展密切相关。有研究表明，多种肿瘤组织及细胞株高表达Chkl，而且Chk1的高表达亦与肿瘤的耐药、

细胞周期激酶CHEK2和p53在恶性肿瘤细胞周期和凋亡中的作用

细胞周期检测点激酶2（cell cycle checkpoint ki-nase2，CHEK2）是由抑癌基因CHEK2编码的丝氨酸／苏氨酸激酶，CHEK2激酶是DNA双链断裂损伤中重要的信号转导蛋白，参与细胞周期G1、S或G2／M期的阻滞，促进细胞对损伤进行修复。CHEK2基因发生突变后，其编码的激酶会丧失活性，无法修复DNA的损伤，受损伤的DNA不断复制，产生大量异常的细胞，进而导致癌变。CHEK2是继BRCA1／2后发现的另一个重要的乳腺癌易感基因。

放射线照射引起胶质瘤细胞细胞周期和凋亡的动力学变化及其对Chk1/2蛋白表达的影响

目的:观察非同步化的U251细胞株对放射线所表现的细胞周期和凋亡的变化以及放射线对Chk1、Chk2蛋白表达的影响。方法:以不同剂量的放射线处理非同步化的U251细胞株,流式细胞仪检测处理后不同时间细胞周期和凋亡的变化,流式细胞仪和Westernblot法检测照射后Chk1、Chk2蛋白表达量。结果:非同步化的U251细胞株经放射线处理后可引起G2/M期阻滞,细胞周期阻滞呈照射剂量依赖性增强,而细胞凋亡均发生于细胞周期阻滞解除后,其强度与细胞周期激活的程度成反比。照射后不影响Chk1、Chk2蛋白水平的表达。结论:放射线处理非同步化的U251细胞株可成功地建立G2/M期阻滞模型,但对Chk1、Chk2蛋白水平表达无影响。

Chk1基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖及细胞周期调控的影响及可能机制

目的:探讨si RNA沉默检测点激酶1(Chk1)基因对人卵巢癌细胞HO8910增殖和周期调控的影响及其作用机制。方法:设计并合成3条Chk1 si RNA干扰片段,转染进入卵巢癌细胞HO8910,Western blot检测转染前后HO8910细胞中Chk1蛋白的表达情况,筛选出有效片段。将Chk1 si RNA有效片段转染进入HO8910细胞,采用MTT法和流式细胞仪分析Chk1si RNA对HO8910细胞增殖和周期的影响;Western blot方法分别检测细胞周期相关基因Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白表达。结果:3个si RNA中,1条是有效si RNA。该有效Chk1 si RNA片段转染后,HO8910细胞中Chk1蛋白水平下降约53.6%,明显低于未转染组和脂质体转染组(P=0.000)。转染48 h后,Chk1 si RNA转染组HO8910细胞增殖活性下降,抑制率为(52.1±5.1)%,明显高于脂质体转染组的(7.6±3.8)%(P=0.000)。流式细胞仪检测显示Chk1 si RNA转染组HO8910细胞G2/M期比例为(5.03±2.62)%,明显低于未转染组(19.35±2.19)%和脂质体转染组(19.76±2.67)%(P=0.000)。Western blot结果显示转染Chk1 si RNA后,细胞内与细胞周期相关的Cyclin A、CDK4、Cdc25A蛋白水平表达明显增强,与未转染组和脂质体组比较,差异有统计学意义(P=0.000)。结论:si RNA沉默Chk1基因后,可明显抑制卵巢癌细胞HO8910细胞的增殖,其抑制增殖作用与减弱G2/M期阻滞有关。

P162通过抑制Chk1/2表达增加食管癌细胞株Eca109的放射敏感性

目的:研究P162是否通过抑制细胞周期检测点激酶(checkpoint kinase,Chk)1/2的表达来增加食管癌细胞株Eca109放射敏感性,并观察其对细胞周期的影响.方法:以食管癌细胞株Eca109为研究对象,小剂量反复照射形成有一定放射抗拒性的细胞株Eca109R;将实验分为不加P162不照射组、不加P162照射组、加P162不照射组及加P162照射组四大组,每组分别包含Eca109与Eca109R二种细胞株;MTT法选取实验合适的照射剂量;CCK-8法测定实验所需的最适P162浓度;Western blot检测4组细胞中Chk1与Chk2蛋白表达的动态变化;流式细胞仪检测4组细胞的细胞周期变化.结果:成功诱导具有放射抗拒性的食管癌细胞株Eca109R;6 Gy为实验照射剂量;以20 mg/L的P162为实验浓度;Western blot显示Eca109及Eca109R均存在少量的Chk1及Chk2蛋白,照射后Chk1与Chk2的表达增高,加用20 mg/L P162培养48 h后,Eca109中Chk1与Chk2值分别为0.244±0.013、0.148±0.011,6 Gy照射后24 h其值分别为0.154±0.013、0.124±0.011;Eca109R中Chk1与Chk2值分别为0.139±0.010、0.134±0.008,6 Gy照射后24 h其值分别为0.083±0.010、0.059±0.009,照射后二者表达均明显降低(P<0.05);细胞周期显示,加用P162不照射组的G2期较不加药组下降,加药照射组较不加药照射组G2期显著下降(P<0.05).结论:Eca109R更有放射抗拒性.P162通过抑制Chk1、Chk2的表达来解除细胞G2/M期阻滞,增加食管癌细胞株Eca109放射敏感性.